口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)具有较高的局部侵袭性、淋巴结转移率。对于中晚期口腔鳞癌采取以手术为主、放化疗及生物治疗等为辅的多学科综合治疗，但是口腔鳞癌患者五年生存率仍处于60%左右[1]。微小RNA(micro RNA，miR)-34a是miR-34家族的一员，与肿瘤的发生发展密切相关。miR-34a作为p53的下游，在p53的调节网络中起重要的作用。p53可以通过miR-34a调节细胞周期的变化和上皮间充质转化[2]。而且miR-34a在多种恶性肿瘤中表达均降低[3]，提示miR-34a可能是一个潜在的抑癌基因。本课题组之前的研究证明核基质蛋白特异AT序列结合蛋白2(special AT-rich sequence-binding protein 2，SATB2)在OSCC中呈异常高表达，它的过表达会促进OSCC在体内外的增殖、迁移和侵袭[4-5]。本实验以人OSCC组织和细胞株HN6为研究对象，观察miR-34a在其中的表达情况，探讨miR-34a是否可以通过调节SATB2的表达来影响HN6细胞的增殖、迁移和侵袭。

1　材料与方法

1.1　主要材料和试剂

28例新鲜的OSCC组织来源于2015年9月至2016年12月南京医科大学附属口腔医院口腔颌面外科收治入院的肿瘤患者，经过病理证实均为OSCC，且均未接受任何特殊的抗肿瘤治疗。与之相对应的28例对照组组织为距离肿瘤边缘2 cm以上，经病理证实的切缘正常组织。人OSCC细胞株HN6(ATCC，美国)，人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes，HOK)(上海市口腔医学重点实验室)。4～6周龄雄性BALB/c裸鼠(南京大学模式动物研究所)10只，体质量(10±0.3)g。

鉴于两“T构”实际温度基本一致，故将其中一个的悬臂作为主要温测对象。本次观测一共布置两处截面，又在每个截面上布置12个测点，先在截面钢筋上粘贴测温片，然后作必要的防护与防潮处理，再将其埋进结构内部，把测温片的导线引至表面。

带绿色荧光的SATB2慢病毒载体及空载体(上海赛业生物科技有限公司)，DMEM培养基(Hyclone，美国)，Defined Keratinocyte-SFM培养基(Gibico，美国)，四季青胎牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司)，青/链双抗、0.25%胰蛋白酶(Gibco，美国)，羊抗兔SATB2抗体(Abcam，英国)，羊抗兔基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-2、MMP-9、Tubulin抗体(Bioworld，美国)，辣根过氧化物酶标记二抗、FITC标记山羊抗兔荧光二抗(Sigma，美国)，DAPI(上海碧云天生物技术有限公司)，PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司)，CCK-8试剂(Sigma，美国)，Transwell小室(Corning，美国)。

1.2　细胞培养

HN6培养于DMEM完全培养液内(含10%胎牛血清)，HOK细胞培养于Defined Keratinocyte-SFM培养基，置于37 ℃、5% CO2(体积分数)及饱和湿度的细胞孵育箱中培养。

1.3　慢病毒转染及稳定株建立

将HN6细胞接种至六孔板，调节细胞至对数生长期，当细胞的生长密度达到60%～70%进行慢病毒转染；根据慢病毒使用说明书推荐的病毒感染细胞所用培养基体积和病毒量，按感染复数MOI=2计算病毒用量；将空载体对照组和目的病毒组病毒液分别加入无双抗培养基稀释，再分别加入终浓度为8 μg/mL polybrene，使六孔板中每孔的终体积为1 mL，混匀后放入37 ℃、5% CO2细胞培养箱培养；转染10～12 h后观察细胞状态，去除含有病毒的培养基，磷酸盐缓冲液冲洗3次后，每孔加入2 mL不含双抗的完全培养基。采用Western blot检测慢病毒转染后SATB2表达情况(实验步骤见1.5)。待转染72 h后按1∶1 600的浓度加入1 mg/mL的嘌呤霉素进行筛选，24 h后换液，剩下的细胞即为稳定转染SATB2的Lv-SATB2-HN6细胞株。

1.4　载体构建和质粒转染

以正常人组织DNA为模板，通过PCR扩增获得miR-34a模拟物miR-34a mimic质粒(图1)。构建完成的质粒大小约为1 100 bp，酶切鉴定和测序鉴定序列鉴定准确无误。同时构建无关核苷酸序列质粒作为对照。将Lv-SATB2-HN6接种于六孔板中每孔加入2 mL的无双抗完全培养基，调节细胞至对数生长期，当细胞的生长密度达到60%～70%进行质粒转染。六孔板每孔加入质粒量为3 μg，根据质粒浓度计算出加样体积。取2个无菌1.5 mL EP管，每管加入250 μL Opting DMEM，一支加入质粒，另一支加入3 μL Lipofectamine 2000，常温静置5 min后将二者混合，移液枪吹打混匀，常温静置20 min后逐滴均匀加入六孔板的一孔中。每孔转染方法一致。转染后放入37 ℃、5% CO2细胞培养箱培养；转染6～8 h后，观察细胞状态，去除含质粒的培养基，磷酸盐缓冲液冲洗3次后，每孔加入2 mL不含双抗的完全培养基。实时定量RT-PCR检测质粒转染效率(实验步骤见1.6)。

  

图1　miR-34a mimic质粒的结构示意图Fig.1　Structure of miR-34a mimic

1.5　Western blot检测

1.5.1　慢病毒转染效果　收集按照1.3方法转染后的细胞，去除培养基，用4 ℃预冷的磷酸盐缓冲液冲洗细胞3次，六孔板每孔加入200 mL含有蛋白酶抑制剂(PMSF)的裂解液，置于冰上20 min以裂解细胞；4 ℃、12 000 r/min离心10 min，取上清测定蛋白浓度；10% SDS-PAGE电泳分离，每孔总蛋白加样量为20 μg，以Tubulin作为内参；湿转法将蛋白转至PDF膜上，4 ℃、5%脱脂奶粉封闭2 h，一抗(SATB2 1∶1 000，Tubulin 1∶5 000)4 ℃孵育过夜，以辣根过氧化物酶标记二抗(1∶1 000)，孵育1 h，加入发光底物后曝光记录拍照。

从认知视角来揭示人体词语义转移的本质，可以为语义学的研究提供新的视角；研究结果可以为其他领域的词汇认知研究提供参考。语义的构建机制也能够为大学英语词汇教学及语篇教学提供新的思路。

1.5.2　MMP-2和MMP-9蛋白表达量　在Lv-SATB2-HN6中转染质粒72 h后检测MMP-2和MMP-9以及SATB2蛋白表达量，均以Tubulin作为内参，一抗(MMP-2 1∶1 000，MMP-9 1∶1 000，Tubulin 1∶1 000)，实验步骤同1.5.1。

Lv-SATB2-HN6细胞分别转染miR-34a mimic和无关序列对照质粒后，CCK-8实验显示：从24 h开始，两组细胞增殖出现明显差异，转染miR-34a mimic的细胞的增殖能力明显低于对照组的细胞，差异有统计学意义(P<0.01)(图5)，提示miR-34a能明显抑制Lv-SATB2-HN6细胞的增殖。流式细胞检测结果(图6)显示：转染miR-34a mimic的Lv-SATB2-HN6细胞中处于G0/G1期、S期及G2/M期百分比分别为73.06%、19.65%、7.28%，而对照组Lv-SATB2-HN6细胞中处于G0/G1期、S期及G2/M期百分比分别为57.08%、29.12%、13.08%，差异均具有统计学意义(P<0.05)，说明转染miR-34a mimic能使减缓Lv-SATB2-HN6细胞进入S期，从而抑制细胞的增殖。

1.6　实时定量RT-PCR

1.6.1　miR-34a的基因表达　分别提取HOK、HN6、新鲜OSCC组织、对应癌旁组织总RNA，按照Takara micro RNA逆转录试剂盒说明书逆转为miR-34a的cDNA，以U6为内参，设计引物：miR-34a F：5′-ACACTCCAGCTGGGTGGCAGTGTCTTAG-3′，R：5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′；U6 F：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，R：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。对miR-34a进行实时定量RT-PCR检测。反应体系：2倍SYBR Premix Ex TaqTM 5 μL，10 μmol /L 上、下游引物各0.2 μL，cDNA模板2 μL，ddH2O 2.6 μL。反应条件：95 ℃ 10 min，预变性；95 ℃变性15 s，60 ℃退火延伸30 s，共40个循环。实验结果以U6为内参照，对miR-34a进行归一化处理；采用相对定量法，表达量用U6的倍数表示，用2-ΔΔCt法计算。

1.6.2　质粒转染效率　收集按照1.4的方法转染miR-34a mimic质粒24 h和48 h的Lv-SATB2-HN6细胞，提取细胞内总RNA逆转为miR-34a的cDNA，检测转染效率，方法同1.6.1。

分析方法：采用SPSS19.0软件对数据进行描述性分析、各项检验和因子分析。先通过因子分析测算企业价值共创体系价值创造能力的综合值，再进一步明确价值创造能力的结构和主要成分。

(1) 在建筑改造中，扩大原车站付费区面积，保留进站闸机，将出站闸机由东侧调整为南北两侧。在2号线车站西侧公共区侧墙采用暗挖开洞模式，采用3个门洞与原2号线站厅和新建换乘厅进行连接。连接的通道上方空间可以为道路管网提供相应的迁改路径。

1.7　CCK-8实验

实时定量RT-PCR检测结果显示，miR-34a在口腔鳞癌组织中的相对表达量(0.322±0.217)比其对应的癌旁正常组织(2.246±1.089)降低，且差异具有统计学意义(P<0.001)，miR-34a在HN6中的相对表达量(0.094±0.036)比其在HOK细胞中(0.994±0.031)明显降低，差异具有统计学意义(P<0.001)(图2)。

1.8　流式细胞仪检测细胞周期

收集1.4中质粒转染48 h后的两组Lv-SATB2-HN6细胞，收集前进行无血清同步化处理；同步化后细胞培养2 d，用4 ℃预冷的磷酸盐缓冲液重悬细胞洗2次，加入不含EDTA的胰蛋白酶消化细胞，800 r/min离心5 min；弃上清，加入1 mL 4 ℃预冷的75%乙醇，吹打混匀细胞形成单细胞悬液，固定细胞，-20 ℃冰箱保存；检测前800 r/min离心5 min，弃上清，加入PI染料，4 ℃孵育30 min，流式细胞仪检测细胞周期。

1.9　划痕愈合实验

以记号笔在六孔板背面每隔0.5～1 cm均匀画横线，每孔至少穿过3条线。将Lv-SATB2-HN6细胞植于划线的六孔板中，按1.4的方法转染两组质粒；48 h后，用无菌10 μL移液器枪头，垂直于背面的横线，沿培养板底部呈“一”字形划痕，每孔划痕3条；用无血清培养基冲洗被划下的悬浮细胞，加入相应的完全培养基继续培养；分别于此后的0、6、12、24 h时间点在倒置显微镜下观察各组细胞的迁移情况。实验重复3次，记录分析细胞迁移的面积数据。

1.10　细胞迁移实验

以无血清培养基培养转染后的Lv-SATB2-HN6细胞48 h，行细胞饥饿处理，收集各组细胞，制成单细胞悬液(2.5×104个/mL)；将200 μL细胞悬液加入到Transwell小室的上室，将500 μL完全培养基加入到Transwell小室的下室，每组设3个复孔；37 ℃培养24 h后，弃去培养基，置于4 ℃预冷的4%多聚甲醛中固定30 min，磷酸盐缓冲液洗3次，室温干燥30 min，0.1%结晶紫染色染色5 min，以倒置光学显微镜观察细胞，取上下左右中5个视野拍照并计数。

1.11　细胞侵袭实验

将Matrixgel胶和DMEM按1∶9混合吹打均匀，加入20 μL混合液至Transwell小室的上室，轻摇使混合液均匀铺满，37 ℃孵育24 h，待混合液完全变色凝固；以无血清培养基培养转染后的Lv-SATB2-HN6细胞24 h，行细胞饥饿处理，收集各组细胞，制成单细胞悬液(5×104个/mL)；将200 μL细胞悬液加入到Transwell小室的上室，将500 μL完全培养基加入下室，每组设3个复孔；37 ℃培养24 h后，取出，按1.10的方法处理，获得实验结果。

1.12　裸鼠荷瘤模型构建

BALB/c裸鼠在南京医科大学动物中心SPF条件下饲养。取1.4中转染两种质粒72 h后的Lv-SATB2-HN6细胞，胰酶消化，制备单细胞悬液(3×107个/mL)；每只裸鼠左侧腋下分别注射0.1 mL单细胞悬液，SPF条件下饲养，密切观察裸鼠饮食、活动和全身情况；每周测量一次移植瘤的长宽高以计算移植瘤的体积，待某组中出现移植瘤直径大于2 cm，或实验鼠出现恶病质后处死所有实验用鼠，完整切除裸鼠皮下部的肿瘤组织，称量肿瘤的质量。

1.14　统计学分析

所有数据均用SPSS 16.0软件进行统计学处理，计量资料均数比较用配对t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2　结　果

2.1　miR-34a在OSCC中的表达

将1.4中质粒转染48 h后的两组Lv-SATB2-HN6细胞接种于96孔板中(3×103个/孔)，分别在0、24、48 h时间点加入10 μL CCK-8溶液，每组设置6个复孔；培养4 h后，吸去培养液，每孔再加入90 μL DMEM，显色2～3 h；酶标仪检测450 nm处吸光度值。

 

***：与正常组织/HOK比较，P<0.001

图2　miR-34a在OSCC中的表达

Fig.2　Expression of miR-34a in OSCC

2.2　慢病毒细胞转染结果

Western blot显示慢病毒转染后的HN6细胞中SATB2的蛋白表达量较野生型的HN6细胞显著上升(图3)，表明SATB2慢病毒载体成功转染HN6细胞。

  

图3　Western blot检测HN6和Lv-SATB2-HN6中SATB2蛋白表达Fig.3　Western blot analysis of SATB2 in HN6 andLv-SATB2-HN6 cell line

2.3　质粒转染效率验证

将miR-34a mimic质粒转染至Lv-SATB2-HN6细胞后实时定量RT-PCR检测miR-34a表达：与转染前(1.002±0.097)比较，转染后24 h和48 h的miR-34a的相对表达量(2.591±0.117，7.522±0.261)显著升高，差异具有统计学意义(P<0.01，P<0.001)(图4)。

 

**、***：与转染前(0 h)比较，P<0.01、P<0.001

图4　定量RT-PCR检测转染miR-34a mimic后miR-34a的表达

Fig.4　Expression of miR-34a at different time

points after transfection

2.4　转染miR-34a mimic可以抑制Lv-SATB2-HN6细胞的增殖

学生课堂沉默分为积极沉默和消极沉默两种情况，其中积极沉默是学生通过认真倾听课堂讲授，内化为自身学识的必要做法，是维持课堂秩序的保证。因此积极沉默的存在是合理的必须的。[1]而消极沉默一般是在课堂教学活动中，学生表现为不参与、不融入的一种不良状态。一般可分为情感沉默、思维沉默、行为沉默三个层面：情感沉默是指学生从心理上对课堂教学缺少兴趣，甚至厌烦，认为在耽误他们的时间；思维沉默则是指思维僵化，表面上在听课，实际是被动机械的听，只用耳朵不用脑袋，不思考，对于教师布置的课上课后作业，去网上找答案或者抄袭；行为沉默是指行为表现上从事与课堂学习无关的活动，比如看手机，浏览课外书籍等。

2.5　miR-34a可以抑制Lv-SATB2-HN6细胞的迁移和侵袭

划痕愈合实验结果显示，转染miR-34a mimic的细胞的迁移能力明显低于转染无关序列质粒对照组，且差异在12 h和24 h具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)(图7)。细胞迁移和侵袭实验结果均显示，转染miR-34a mimic的细胞的迁移个数明显少于对照组，且差异具有统计学意义(P<0.001，P<0.01)(图8、9)。以上实验证明，miR-34a对Lv-SATB2-HN6细胞的迁移和侵袭有明显的抑制作用。

信息化建设在目前当中非常重要，所以对于企业的财务管理来说，必须要充分的重视起来，只有不断地运用信息化的快捷性、准确性和可靠性，才可以有效的强化了现代企业的各项数据和经营风险的控制。同时通过不断加强监督管理的信息化建设，还可以将业务和财务信息得到真实的反应，实现了财务信息的远程控制，消除了各种信息不对称的问题，为企业的经营决策提供了及时的信息反馈。

 

*：与对照组比较，P<0.05

图5　CCK-8实验结果

Fig.5　Results of CCK-8 experiment

 

A：对照组；B：miR-34a mimic组

图6　流式细胞检测结果

Fig.6　Results of flow cytometry

 

*，**：与对照组比较，P<0.05，P<0.01

图7　划痕愈合实验结果

Fig.7　Results of wound healing test

 

***：与对照组比较，P<0.001

图8　细胞迁移实验结果

Fig.8　Results of Transwell test

 

**：与对照组比较，P<0.01

图9　细胞侵袭实验结果

Fig.9　Results of trans invasion test

2.6　miR-34a对移植瘤模型的影响

在裸鼠皮下注射细胞后的第4周，对照组出现瘤体直径大于2 cm的情况，故将所有实验用鼠处死，完整取下皮下肿瘤。与对照组比较，转染miR-34a mimic的移植瘤体积明显缩小，质量也明显减少(P<0.05)(图10)。

 

A：瘤体直观对比图；B瘤体质量，*：与对照组比较P<0.05

图10　裸鼠荷瘤实验结果

Fig.10　Results of xenograft model

2.7　miR-34a与SATB2之间的可能调节机制

收集转染质粒后的Lv-SATB2-HN6细胞，利用 Western blot实验检测蛋白的表达水平，结果显示转染了miR-34a mimic的细胞内SATB2、MMP-2和MMP-9蛋白水平较对照组明显降低(图11)。

秦铁崖心情有些沉重，刚想安慰乔十二郎几句，石板路上又传来急促的马蹄声。抬头一看，牌坊下赫然现出两队骑兵。秦铁崖不免担心，若是敌人再来缠斗，己方要吃大亏。

  

图11　Western blot检测质粒转染后Lv-SATB2-HN6中SATB2、MMP-2和MMP-9蛋白表达Fig.11　Western blot analysis of SATB2, MMP-2和MMP-9 in miR-34a mimic Lv-SATB2-HN6 cell line

3　讨　论

调控与核基质结合区结合的转录因子SATB2蛋白在细胞的转录、调控和染色质重组等过程中都发挥着重要作用[6]。研究发现SATB2在多种恶性肿瘤中均存在异常的表达[7]。我们课题组在之前的实验中发现了SATB2在OSCC中存在异常高表达的情况，同时稳定过表达SATB2的OSCC细胞株的增殖和侵袭转移能力均有显著增强，提示SATB2在OSCC中是一潜在癌基因[4-5]。微小RNA参与人体内多种复杂功能的调节，如细胞发育、造血过程、细胞增殖与凋亡、脂肪代谢、器官形成等，其自身的突变、缺失、易位及相互调控异常等可导致相关基因异常表达，由此也会调节肿瘤的发生发展[8]。研究表明，SATB2受到miR-31[9]、miR-211[10]、miR-27a[11]、miR-182[12]、miR-34b/c[13]等微小RNA的调控。miR-34a作为p53的下游，在p53的调节网络中起重要的调节作用[2]。p53可以通过调节miR-34a的表达，来调节其下游的一系列G1/S期的细胞周期蛋白来调节细胞周期的改变[14]；同时，p53还通过调节miR-34a的表达来调节上皮间充质的转化[15]。这些都与肿瘤的发生发展密切相关。根据文献报道，miR-34a在OSCC中呈低表达，可能是一潜在的抑癌基因[16]，但是在OSCC中miR-34a和SATB2之间是否具有调节关系仍未见报道。

以往对miR-34a的研究发现miR-34a在多种人类恶性肿瘤中低表达。在神经胶质瘤肿瘤中，miR-34a的表达随患者临床分级升高而降低，且表达量的降低与患者生存时间缩短密切相关[17]。在本研究中，miR-34a在OSCC组织和细胞系中呈低表达。同时，稳定过表达SATB2的细胞株Lv-SATB2-HN6转染miR-34a mimic质粒后，细胞内SATB2的蛋白水平明显下降，细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低；而且，将转染后的细胞注射入裸鼠皮下，建立裸鼠荷瘤模型，结果显示转染了miR-34a mimic的Lv-SATB2-HN6细胞所成的瘤体在体积和重量上均比对照组有明显减小。此外，我们还发现在转染了miR-34a mimic后，Lv-SATB2-HN6中的MMP-2和MMP-9两种基质金属蛋白酶的表达显著降低。MMP-2和MMP-9是基质金属蛋白酶家族中的一员，他们通过协同作用分解Ⅳ型胶原，从而促进肿瘤的迁移和侵袭[18]。

随着新课改的深入推动，培养学生的学习能力已经成为当务之急。良好的数学学习能力不但是教学质量的保障，也是学生自身发展的关键。教师要树立科学教育观，不要仅仅满足于课堂教学，还要注重激发学生的创新意识和独立思考意识，使学生真正成为课堂的主人。

[5]　高洁，詹甜甜，葛昕，等. SATB2在口腔鳞癌中的表达及对细胞增殖的影响[J]. 口腔生物医学，2017，8(2)：75-79.

综上所述，miR-34a作为抑癌基因可以通过靶向调节SATB2的表达来抑制OSCC的发生和发展[23]，为进一步研究miR-34a与SATB2在OSCC中的相互作用机制奠定理论基础。

[参　考　文　献]

[1]　Monteiro LS, Amaral JB, Vizcaino JR, et al. A clinical-pathological and survival study of oral squamous cell carcinomas from a population of the North of Portugal[J/OL]. Med Oral Patol Oral Cir Bucal，2014，19(2)：e120-e126[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.4317/medoral. 19090.

[2]　Hermeking H. MicroRNAs in the p53 network: micromanagement of tumour suppression[J/OL]. Nat Rev Cancer，2012，12(9)：613-626[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1038/nrc3318.

为了准确分析我国现行商业银行费用构成，本文以大型商业银行综合实力最强的中国工商银行和发展较好的上市城市商业银行南京银行为例，对2011年～2017年的年报数据进行分析比较。

[4]　詹甜甜，高洁，葛昕，等. SATB2在口腔鳞癌中的表达及其与迁移、侵袭的临床意义研究[J]. 口腔生物医学，2017，8(2)：60-64.

由于miR-34a是p53蛋白的靶基因，所以p53的突变、p53的表达降低以及miR-34a与p53结合位点的基因突变均可导致miR-34a表达缺失[19]。在小鼠移植瘤模型中，通过尾静脉注射、皮下注射等方式给予miR-34a模拟物，能够减少肺癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤的远处转移[20]。Chung等[21]认为在头颈鳞癌中SATB2促进ΔNp63α与p53家族靶启动子结合，从而抑制p53下游促凋亡基因的表达，而p53被证明可诱发miR-34a参与细胞的凋亡过程[22]。因此，p53/miR-34a/SATB2在OSCC细胞凋亡过程中是否有某种反馈环路存在，值得进一步研究。

[6]　Dobreva G, Dambacher J, Grosschedl R. SUMO modification of a novel MAR-binding protein,SATB2,modulates immunoglobulin mu gene expression[J/OL]. Genes Dev，2003，17(24)：3048-3061[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1101/gad.1153003.

回望过去，艰辛却坚实；还看今朝，欣喜且精彩；展望未来，坚定而美好。十载筑梦奋进路，开拓创新铸辉煌。蓝图绘就，使命在肩，航程再启，图书馆愿与全校师生同舟共济，劈波斩浪，为建成中国特色世界一流大学智慧图书馆而奋勇前行。

[7]　Brocato J, Costa M. SATB1 and 2 in colorectal cancer[J/OL]. Carcinogenesis，2015，36(2)：186-191[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1093/carcin/bgu322.

[8]　Jinek M, Doudna JA. A three-dimensional view of the molecular machinery of RNA interference[J/OL]. Nature，2009，457(7228)：405-412[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1038/nature07755.

[9]　Luo LJ, Yang F, Ding JJ, et al. MiR-31 inhibits migration and invasion by targeting SATB2 in triple negative breast cancer[J/OL]. Gene，2016，594(1)：47-58[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1016/j.gene.2016.08.057.

[3]　Corcoran C, Rani S, O’Driscoll L. miR-34a is anintracellular and exosomal predictive biomarker for response to docetaxel with clinical relevance to prostate cancer progression[J/OL]. Prostate，2014，74(13)：1320-1334[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1002/pros.22848.

[10] Jiang G, Cui Y, Yu X, et al. miR-211 suppresses hepatocellular carcinoma by downregulating SATB2[J/OL]. Oncotarget，2015，6(11)：9457-9466[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.18632/oncotarget.3265.

[11] Gong Y, Lu J, Yu X, et al. Expression of Sp7 in Satb2-induced osteogenic differentiation of mouse bone marrow stromal cells is regulated by microRNA-27a[J/OL]. Mol Cell Biochem，2016，417(1/2)：7-16[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1007/s11010-016-2709-y.

[14] Navarro F, Lieberman J. miR-34 and p53: new insights into a complex functional relationship[J/OL]. PLoS One，2015，10(7)：e0132767[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0132767.

[13] Hao J, Zhang L, Cong G, et al. MicroRNA-34bc inhibits aldosterone-induced vascular smooth muscle cell calcification via a SATB2Runx2 pathway[J/OL]. Cell Tissue Res，2016，366(3)：733-746[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1007/s00441-016-2469-8.

[12] Yang MH, Yu J, Jiang DM, et al. microRNA-182 targets special AT-rich sequence-binding protein 2 to promote colorectal cancer proliferation and metastasis[J/OL]. J Transl Med，2014，12：109[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1186/1479-5876-12-109.

[15] Chen J, Zhao KN. HPV-p53-miR-34a axis in HPV-associated cancers[J/OL]. Ann Transl Med，2015，3(21)：331-337[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2305-5839.2015.09.39.

[16] Li T, Li L, Li D, et al. MiR-34a inhibits oral cancer progression partially by repression of interleukin-6-receptor[J/OL]. Int J Clin Exp Pathol，2015，8(2)：1364-1373[2017-11-15]. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4396206/pdf/ijcep0008-1364.pdf.

[17] Gao H, Zhao H, Xiang W. Expression level of human miR-34a correlates with glioma grade and prognosis[J/OL]. J Neurooncol，2013，113(2)：221-228[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1007/s11060-013-1119-1.

[18] Björklund M, Koivunen E. Gelatinase-mediated migration and invasion of cancer cells[J/OL]. Biochim Biophys Acta，2005，1755(1)：37-69[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1016/j.bbcan.2005.03.001.

[19] Hermeking H. The miR-34 family in cancer and apoptosis[J/OL]. Cell Death Differ，2010，17(2)：193-199[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1038/cdd.2009.56.

[20] Lujambio A, Calin GA, Villanueva A, et al. A microRNA DNA methylation signature for human cancer metastasis[J/OL]. Proc Natl Acad Sci U S A，2008，105(36)：13556-13561[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1073/pnas.0803055105.

随着经济的高速发展，人民的生活水平日益提高，因此食品质量的关注度也越来越高，其中对肉类、海鲜、蔬菜、水果等的长期保鲜存储是极其重要的问题。因此建立成本低廉、性能稳定、能够实时智能监测冷库环境具有很强的社会意义。智能控制系统的研究与设计是冷库迈向高工业程度、高产业度的保证。本监测系统[17-19]可灵活适用于各种冷库的参数监测，在对冷库数量要求不高时，只需改变从机的电路板提高扩展能力，主机电路不用改动。本系统实现了对冷库环境因子的实时远程监测，能够使一般食品冷冻库及冷藏库的环境参数精度控制需求，应用和推广前景很好。

[21] Chung J, Lau J, Cheng LS, et al. SATB2 augments ΔNp63α in head and neck squamous cell carcinoma[J/OL]. EMBO Rep，2010，11(10)：777-783[2017-11-15]. http://dx.doi.org/10.1038/embor.2010.125.

总之，引入“逆周期调节因子”的汇率只能维持短期稳定，却形成不了汇率制度的变革；从长期来看，逆汇率周期的改革也会对宏观经济带来负向影响。

[22] Chang TC, Wentzel EA, Kent OA, et al. Transactivation of miR-34a by p53 broadly influences gene expression and promotes apoptosis[J/OL]. Mol Cell，2007，26(5)：745-752[2017-11-15]. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1097276507003103. DOI：10.1016/j.molcel.2007.05.010.

[23] 高涵，申玉芹，刘引，等. miR-34a在口腔医学领域中的研究进展[J].口腔医学,2015,35(6):490-492.

比如，外资办百货商店、超级市场，涉及外资零售权、百货进口权、国内商品采购出口权、外汇调剂权、减征关税和所得税。又比如，建设保税区，涉及区内免关税、免许可证；国内外企业可以在区内设立国际贸易机构；区内企业不仅可做一般的进出口贸易，还可做国际转口贸易，可从事生产资料交易中心业务；作为境内关外的地区，外汇全额留成，各国货币可以流通。