自2016年3月1日《血站技术操作规程（2015版）》［1］实施以来，血液核酸检测已达到100%全覆盖。血液核酸检测（nucleic acid amplification test，NAT）作为传统酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）的补充，能有效缩短病毒检测窗口期，检测到隐匿性感染，提高血液安全，降低输血传播风险。国内采供血机构NAT模式主要包括混样检测（MP-NAT）［2-3］和单人份检测（ID-NAT）［4-5］，MP-NAT 一般在 ELISA检测后去除阳性标本再进行；ID-NAT一般与ELISA同时进行。NAT检测技术主要有PCR（聚合酶链式反应）技术和TMA（转录介导的扩增）技术，与ELISA平行检测的单人份核酸检测多为基于TMA原理的诺华Procleix TIGRIS核酸检测系统。目前，我省血液核酸检测均采用PCR技术，检测模式也多为ELISA检测后对阴性样本进行NAT混样检测，仅少数成分血或应急血液NAT检测与ELISA检测平行进行。我站是全省唯一一家采用浩源单人份检测系统与ELISA平行检测的血站，现对本站血液检测方案进行分析，找出利弊，为今后的工作提供指导依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选取2016年6月至2017年6月我站无偿献血者血液标本3894份，每位献血者留取3管标本，1支ELISA及ALT（谷丙转氨酶）常规检测管，2支NAT检测管，NAT管使用美国BD真空采血管，含EDTA-K2抗凝剂和分离胶，均为5ml/管。以上标本严格按照《血站技术操作规程（2015版）》［5］要求进行。

1.2 试剂与仪器 ELISA检测试剂：HBsAg（英科新创（厦门）科技有限公司，批号：2015115141；意大利索林诊断有限公司，批号：D402910）；抗-HCV（英科新创（厦门）科技有限公司，批号：2015105822；北京万泰生物药业股份有限公司，批号：20151208）；抗-HIV/HIV Ag-Ab（英科新创（厦门）科技有限公司，批号：2015126622；法国伯乐生命医学有限公司，批号：5J0339）；抗-TP(英科新创（厦门）科技有限公司，批号：2015117527；北京万泰生物药业股份有限公司，批号：20151222）。NAT采用PCR原理的上海浩源HBV/HCV/HIV-1多重分项检测试剂盒（批号：MF20160102）。仪器：FREEDOM EVO LYZER-2 150全自动酶免一体机（瑞士TECAN贸易有限公司）、手工+MK3酶标仪（芬兰-上海雷勃分析仪器有限公司）、Pre-NAT单人份核酸提取仪（上海浩源）+ABI7500荧光定量PCR仪（美国ABI）。

1.3 方法 采用浩源单人份核酸检测系统与ELISA双试剂平行检测无偿献血者血液标本3894份，检测指标按照《血站技术操作规程（2015版）》中相关规定［1］。ELISA与NAT检测结果判定独立互补，ELISA与NAT一种方法不合格即为不合格。所有检测均按照试剂盒说明书和试验标准操作规程进行，NAT每批试验分别设阴性对照、阳性对照、质控各一孔，每孔设有ICDNA、IC-RNA内对照，ELISA根据各试剂说明书要求分别设有阴、阳对照和质控。结果有效性判定严格按照试剂说明执行，结果无效重新进行检测。对ELISA双试剂（+）NAT（-）和 ELISA（-）NAT（+）标本进行复查，并送检国家卫生和计划生育委员会临床检验中心进行验证。送检血样卫生部临检中心NAT采用罗氏血筛2代单检试剂，乙肝两对半采用美国罗氏电化学法试剂。

殷明慌乱不已，他不知道离开那个熟悉的宿舍后，要去哪里，又会面对什么样的目光。恍惚间，仿佛又看到了向华杰的母亲撕打他时那恨不得杀死他的目光，看到郑云涛的爸爸抱着头蹲在地上无声哭泣的背影……他抓起他的那个灰扑扑的包，猛地向外跑去。

1.4 判定标准 ELISA依据项目及试剂不同设定不同灰区，S/CO≥灰区界限为反应性，若双试剂反应性直接判为不合格，若单试剂反应性，下次原样1孔和血袋新截样2孔进行复查，复查任意1孔反应性判为不合格。NAT初筛阳性即判为不合格，并根据结果报告不合格项目，复查结果仅作数据统计。

2.1 NAT检测结果 3894份标本共检出NAT初筛阳性标本51份（HBV 47份，占92.1%，HCV 2份，HIV 2份），不合格率 1.31%（51/3894），其中 ELISA 双（+）12份，符合率为 23.5%（12/51），未发现 ELISA 单试剂（+）且 NAT（+）样本，ELISA（-）NAT（+）39 份（HBV 38 份，HIV1份），占 76.5%（39/51）。将39份ELISA(-)NAT（+）样本进行NAT复查，阳性15份，复查阳性率仅38.5%（15/39）。见表 1。

2 结果

利用美国布鲁克 GC-MS工作站与 NIST 11 Library数据库检索比对，匹配度达到800以上，结合在相同测定条件下对系列烷烃标准品进行分析，并根据公式（1）计算保留指数（RI），与文献中的RI值比较来进行定性分析；各成分的含量采用内标法进行半定量分析，按公式（2）计算：

2.3 送检结果 国家卫生和计划生育委员会临床检验中心反馈结果16份，1份HCV ELISA双试剂（+）NAT（-）标本，反馈结果为 NAT（+）；1 份 HIV ELISA（-）NAT（+）标本，反馈结果为 NAT（-）；反馈 14份HBV NAT和乙肝两对半结果，其中3份罗氏NAT也为阳性，3份标本中2份我站初筛、复查均阳性，1份初筛阳性，复查阴性。乙肝两对半结果仅2份五项全阴，其余12份至少有一项阳性，以HBeAb和HBcAb居多。见表2。

2.2 ELISA检测结果 3894份标本ELISA检测HBV/HCV/HIV不合格28份，（HBV 13份，占46.4%，HCV 6份，HIV 9份）不合格率0.7%（28/3894）。双试剂阳性13份，占46.4%（13/28），其中HBV 9份，占HBV 不合格69.2%（9/13），HCV 3份，占 HCV 不合格 50%（3/6），HIV 1份，占HIV不合格11.1%（1/9）。见表1。

本站NAT检测不合格率为1.31%，可能与初筛存在假阳性有关。主要表现为①HBV NAT阳性率高达1.2%；②HBV ELISA（-）NAT（+）结果重复性差，复查阳性率 39.5%（19/38）；③NAT（+）与 ELISA 双（+）符合率仅23.5%，这与单人份检测、NAT初次阳性即报废有很大关系［6］，另外标本质量、实验室环境、检测系统、试剂灵敏度、耗材、人员操作均会造成假阳性偏高。我站所用浩源单检系统为半自动化操作，试剂配置较多，核酸提取半开放，影响因素多，对操作人员的技术能力要求较高［7］。

表1 3894份献血者标本NAT和ELISA平行检测结果

注：（）内数据为 NAT 复查阳性数,ELISA（双+）为 ELISA 双试剂阳性，单（+）为单试剂阳性;未发现 ELISA 单（+）NAT（+）标本

项目HBV HCV HIV合计NAT（+）47 ELISA（+）13 NAT（+）ELISA 双（+）NAT（-）ELISA 双（+）ELISA 单（+）NAT（-）2 2 5 1 6 9 2 8 NAT（+）ELISA（-）38（15）0 1（0）39（15）9 2 1 1 2 0 1 0 1 4 3 8 1 5

表2 卫计委临床检验中心反馈结果

注：“+/-”表示初筛阳性，复查阴性；（）内数值为比色值；N表示阴性，R表示反应性，-表示国家卫生和计划生育委员会临床检验中心反馈阴性，/表示未检该项目

编号 本站NAT结果卫生部反馈结果HCV HIV 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0+/-+/++/-+/-+/-+/++/-+/-+/-+/++/++/-+/++/++/--/-HBV-38.6- - - - - - - -11 12 13 14 15 16 34.2 40.1- - - -- - - - - - - - - - - - - - -HBsAg N（0.14）N（0.11）N（0.13）N（0.13）N（0.15）N（0.11）N（0.15）N（0.1）N（0.12）N（0.12）N（0.572）N（0.552）N（0.576）N（0.517）HBsAb N（0.81）N（0.52）N（2.53）N（2.87）R（31.17）R（16.86）N（1.35）R（19.13）R（109.29）R（23.58）N（2）R（53.43）N（2）R（453.7）HBeAg N（0.305）N（0.251）N（0.278）N（1.66）N（0.357）N（0.33）N（0.274）N（0.265）N（0.292）N（0.28）N（0.307）N（0.095）N（0.089）N（0.099）HBeAb N（1.22）R（0.52）N（1.66）N（1.83）N（1.68）R（0.45）N（1.02）N（1.45）N（1.69）R（0.29）R（0.85）R（0.689）R（0.003）N（1.34）HBcAb R（9.17）R（8.41）N（0.96）N（0.44）N（0.15）R（4.84）R（8.3）R（5.81）N（0.2）R（10.42）R（0.004）R（0.004）R（0.004）R（0.005）39.8- - - - - - - - - - - - - - - -/ // // // // /

3 讨论

2) 乙醇浓度。已吸附花青素后的树脂，加入50%、60%、70%、80%和90%的pH 1.0乙醇溶液经25℃摇床振荡解吸1 h，过滤定容至25 mL，测其吸光度并计算解吸率。

传统的西方企业家创业研究，强调企业家个人承担风险、学习动机和创新性格的重要性。现代的管理学和商学院的研究聚焦于组织结构、金融管理、公共关系、市场策略和公司管治。大多数西方商学院的MBA课程关于创业的训练和研究是基于其成熟的资本主义市场经济和完善的法律环境。在这样的场景中有严格的资本市场监管制度，充分发展的民主实践，完备的福利体系和严格的立法过程。在一个这样建立起来的政治经济结构当中企业家创业过程可以很好地由彼得·德鲁克(Drucker)的管理学创新思想[22]来阐释。

ELISA三项不合格28份，不合格率0.7%，其中HIV 9 份、HCV 6 份中，均包含该项 NAT（+）标本，说明本站在核酸检测未开展之前，在不考虑窗口期及隐匿性感染的情况下，ELISA可最大程度完成血液安全检测工作，尤其在HIV和HCV检测上，但HIV假阳性率偏高。ELISA 双（+）13份中 12份为 NAT（+），符合率92.3%（12/13），未发现 ELISA 单试剂（+）NAT（+）样本，如果把NAT作为ELISA检测的确证，本站ELISA三项，两种检测试剂在阳性检出率上是完全一致的。

虽然本站核酸检测开展时间短，检测量少，但仍检出至少 3 例 HBV ELISA（-）NAT（+）标本，均为 HBV隐匿性感染（如表2），说明开展NAT检测意义重大。3例罗氏血筛2代单检（+）中2例我站NAT初筛、复查均（+），1例初筛（+）、复查（-），证明NAT 初筛阳性即报废可最大程度降低漏检风险。其他送检NAT（-）结果仍无法排除标本质量原因造成的假阴性可能，从表2可知乙肝两对半结果以HBcAb和HBeAb阳性居多，考虑隐匿性感染可能，两份五项全阴标本考虑窗口期可能。发现一例HCV双（+）而NAT（-）标本，确认结果阳性，可能是由于病毒载量低或试剂原因造成的NAT漏检或者标本质量不好造成HCV RNA降解。虽然NAT与血清学试验相比优势显著，但也存在漏检风险，尤其对于较低水平病毒载量的标本。如果病毒载量极低就存在标本取样的随机性，这样再检时就会造成检测不到，或并不是每次都能检测到病毒的现象［6］。NAT不能完全代替ELISA检测。

综上所述，采用浩源单人份核酸联合ELISA平行检测，NAT初筛阳性即报废的方案有利有弊。一般来说单人份核酸与ELISA平行检测可有效缩短血液放行时间，保证临床用血的及时性，适合采血量少、库存量小、单采血小板预约机制不能有效执行的血站，同时该方案可最大程度降低血液漏检风险，与混检比检测灵敏度更高，与其他单人份检测相比成本较低。但同时该方案血液报废率明显高于混检和其他单检系统，除了NAT初筛阳性即报废导致单人份检测比混检更容易产生假阳性外，更多的是人员、试剂和检测系统原因。其次，平行检测未去除ELISA阳性标本，容易造成标本和实验室污染。分析本站一年来的检测结果，在不能确定其初筛假阳性和复查假阴性的情况下，NAT初筛阳性即报废是最安全可靠的，在此基础上为减少血液浪费和血源流失，今后应根据工作实际改进检测方案、完善检测系统、不断提高检测能力，降低假阳性率。至于假阳性献血者的确证及屏蔽与召回有待进一步探讨和研究。

参考文献

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