1 前言

油橄榄是木犀科木犀榄属常绿乔木，是世界著名的木本油料兼果用树种，栽培品种有较高食用价值和保健价值，含丰富优质食用植物油——油橄榄油，为著名亚热带果树和重要经济林木，主要分布于地中海国家，希腊、意大利、突尼斯、西班牙为集中产地。

对比且分析医护人员对研究组、参照组医疗器械清洗满意度，结果划分为三个标准，即十分满意、相对满意和不满意。

含橄榄多酚(羟基酪醇为代表)成分的橄榄提取物，功效广，具有明显的消炎止痛，抗菌、抗病毒，预防牙周炎、牙龈炎、口臭、口腔溃疡的功效，同时还特别适用于血脂高、心脑血管病等高风险患病人群；还具有增加骨密度功能。其中羟基酪醇，又名3，4-二羟基苯乙醇，是一种天然抗氧化剂，广泛存在于橄榄的枝叶及果实中，特别是地中海地区的橄榄树中含量较高，是橄榄油的有效成分。近年来，国内外大量研究证实羟基酪醇具有较强的抗氧化活性，在降低血压预防心血管疾病，抗癌防癌等方面具有积极的促进作用，是一种值得研究和大力开发的天然食品抗氧化剂[1]。

2 安全性阐述

2.1 橄榄果提取物

橄榄提取物已享有美国联邦政府要求食品、药品、化妆品上市前的批准豁免先例，拥有GRAS安全认证的产品。Phenofarm公司对作为抗氧化添加剂应用于食品中的橄榄提取物提供了数据支持。通过研究文献关于橄榄提取物的安全毒理学信息，组分以及相关多酚的安全历史。预期所采用橄榄提取物用于制成食品的最大含量是3000ppm(3‰)。而应用于口腔护理用品因产品属性，摄入量远远低于食品摄入量，所以是非常安全的。橄榄提取物组分分析见(表1);多酚组分分析见(表2);营养组分分析见(表3);安全毒理学分析见(表4)。

有文献报道，橄榄多酚作为食品添加剂对于LDL较高的人群具有抗氧化功能(降低胆固醇)(活性得到了欧洲食品安全局的确认)自由基清除尽管对于一些多酚粗提液(绿茶儿茶酸、橄榄咖啡酸)以及特定条件(存在于金属离子)下亲氧化特点(比如活性氧和过氧化氢)。而专家描述中都是近乎一致的安全结论，其中食品权威专家也有多酚是安全的、没有任何毒性影响的观点。而且含多酚类的食品有安全消费历史。有研究者报道正常每天消耗50克橄榄或橄榄油，分别平均每天摄入大约400和12mg的多酚类物质。含最大含量0.3%保健食品摄入，大体相当于摄入量40克的黑榄。而橄榄提取物安全摄入剂量为5000mg/kg每天，相当于70kg的成年人350g的量。毒理学研究大鼠和小鼠数据显示(Christian，Sharperetal.2004)在任何评估数据上都没有相关毒性影响[2]。橄榄提取物有比较周密的安全的科学数据、组成成分、酚类物质数据支持，对原料保持不低于通过GRAS认证的产品类似组分及营养成分、安全数据，认为橄榄提取物用于食品、保健品、个人护理用品是较安全的选择。

 

表1 所采用橄榄粗提液成分及含量分析

  

成分mg/L橄榄苦苷派生物682.9橄榄苦苷2238.9木樨榄苷(木樨素)471.6羟基酪氨酸糖酸55.3羟基酪氨酸糖派生物71.9羟基酪氨酸(羟基酪醇)228.6羟基酪醇糖268.6酪醇74.3酪氨酸糖0酪氨酸派生物48.3香草酸0去甲基橄榄苦苷0裂环烯醚萜派生物0橄榄油刺激醛0咖啡酸派生物34.7咖啡酸0对香豆酸0右旋毛蕊花苷63.7毛蕊花苷68.7异毛蕊花苷10.6四乙酰断马钱子甙咖啡油脂62四乙酰断马钱子甙对香豆素油脂78.3总量5226.7

 

表2 HPLC多酚组分分析

  

总酚(mg/kg)45261芳香醇(mg/kg)21328羟基酪醇(mg/kg)20131酪醇(mg/kg)1197橄榄苦苷派生物(mg/kg)23005女贞甙派生物(mg/kg)1710毛蕊花苷(mg/kg)1089橄榄油刺激醛(mg/kg)1020木脂素类(mg/kg)(松脂醇和乙酰基松脂醇)36总酚酸(mg/kg)(原儿茶酸,香草酸,咖啡酸香豆酸)4784黄酮类(mg/kg)222木犀草素(mg/kg)222芹菜素(mg/kg)n.d.裂环烯醚萜酸(mg/kg)7695去甲基橄榄苦苷(mg/kg)0木樨榄苷-11-甲醚(mg/kg)5287

 

表3 营养组分分析

  

营养组分含量/100g蛋白质2.50g/100g脂肪0.10g/100g膳食纤维2.0g/100灰分6.00g/100g碳水化合物61.00g/100g糖12.00g/100g钠360mg/kg重金属<0.1mg/kg农药残留Absent霉菌<10UFC/1g酵母菌<10UFC/1g总多酚50mg/100g

 

表4 有毒物质、化学试剂、农药残留分析

  

酵母菌和霉菌:小于等于5x102UFC/g菌落总数:小于等于5x105UFC/g大肠杆菌:不得检出肠杆菌:小于等于102UFC/g沙门氏菌:不得检出重金属Pb:<3ppmCd:<1ppmHg:<0.01ppmAs:<1ppm残留水分<30%有提取溶剂不得含有外来物质无金属和非金属不得含有虫害污染不得有环芳香烃<1pg/kg赭曲霉素不得检出黄曲霉素不得检出农药残留不得检出

2.2 橄榄叶的提取物

江苏省疾病预防控制中心毒理与评价所对橄榄叶提取物也进行了毒理评价，结果橄榄叶提取物属于无毒级；未见潜在致突变作用[3]。

4.1.5 检测图谱实例

3 橄榄提取物功效

3.1 橄榄中的黄酮类物质及多酚类物质具有抗氧化活性

橄榄中总黄酮提取物对OH和1，1-二苯基-2-苦苯肼基自由基(DPPH)以及超氧自由基(O2-·)均具有较强的清除能力，且抗氧化活性优于2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)和叔丁基对羟基茴香醚(BHA)。

4.1.5.2 牙膏中羟基酪醇的测试样品图谱

周红梅等通过研究认为，氧自由基(oxygenfreeradicals，OFRs)损伤是口腔粘膜炎性疾病(如白塞综合征、复发性阿弗它溃疡等)的重要致病环节。OFRs可通过攻击上皮细胞内一些重要酶类以及使结缔组织中蛋白多糖分解而造成组织的损伤，诱发并加重充血、渗出等炎症反应[5]。

3.2 增加骨密度和骨钙含量

张润谱等通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型，用不同剂量的橄榄多酚提取物对受试大鼠进行灌胃，经每日一次连续12周的灌胃试验后与对照组比较，3个剂量组左股骨密度及中、高剂量组右股骨骨钙含量显著高于溶剂对照组，试验初步证明橄榄多酚可增加卵巢切除大鼠股骨密度及骨钙含量[6]。

3.3 总黄酮抗菌消炎

曲中堂等研究结果表明橄榄总黄酮对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、黑曲霉和青霉皆有抑制作用[7]。

要实现军民基础地理信息要素分类与编码标准的融合，也就是说可以同时在民用测绘和军事测绘中使用，建立共同的分类代码原则以保证后期数据的顺利转换。但是鉴于保密安全、协调一致等多方考虑，建议将标准分为2个部分：第一部分为民用基础地理信息要素分类与代码，其内容可对大众公开，民用测绘及军事测绘可同时使用；第二部分为军事特有的基础地理信息要素分类与代码，其内容不对大众公开，仅供军事测绘使用。

3.4 解酒护肝作用

橄榄解酒在古典医籍记载，现代研究亦证实橄榄及其复方制剂具有显著的解酒功效，并初步阐明了其解酒机理。近年来对此作了细致研究，他们采用橄榄制成的橄榄解酒饮对小鼠急性酒精性肝损伤的防治效果进行研究，发现该解酒饮可显著降低血清ALT、AST及肝匀浆ALT水平，改善肝组织病理状态，促进肝细胞损伤恢复，表明橄榄解酒饮具有良好的防醉、解酒、护肝作用。橄榄的解酒保肝作用可能与其所含的萜类及鞣质等酚类成分有关[8]。

3.5 羟基酪醇具有清除自由基的作用及机理

研究表明氧自由基在复发性口腔溃疡形成过程中具有重要作用ix。羟基酪醇分子结构不仅同其它酚类物质一样具有酚羟基，而且在连有苯环的乙醇链上也具有醇羟基。羟基酪醇的抗氧化活性与它的结构密切相关:①羟基酪醇以酚羟基作为氢供体，对多种活性氧具有消除作用，可将单线态氧O2还原成活性较低的三线态氧O2，减少氧自由基产生的可能性;②羟基酪醇是各种自由基有效的消除剂，经反应生成活性较低的多酚自由基，打断自由基氧化的链式反应;③羟基酪醇的邻位二酚羟基可以与金属离子鳌合，减少金属离子对氧化反应的催化[9]。

3.6 羟基酪醇抑制血糖升高

HedyaJemai等人用大鼠检测了橄榄苦苷(羟基酪醇是橄榄苦苷酶解的衍生物)和羟基酪醇的抗糖尿病和抗氧化活性，患糖尿病的大鼠具有高血糖症，高胆固醇血症，升高的脂质过氧化作用，抗氧化酶活性丧失，而用橄榄苦苷和羟基酪醇喂食糖尿病大鼠能显著降低它们的血糖和胆固醇水平，恢复它们的抗氧化能力这说明羟基酪醇的抗糖尿病作用是通过其强抗氧化活性遏制糖尿病症及其并发症相关的氧化性应激反应[10]。

叶晓晓径直向巷子最深处走去，一刻也不停留，路过一棵大树底下的平房，里面传出依依呀呀的越剧声，门开着，却没有看见里面的人，她犹豫了一秒，打消了要进去看看的念头，又向前走。

西汉元光六年（前129年），匈奴入侵上谷郡（今河北怀来）。刘彻决定派四位将军各领一万骑兵反击匈奴。李广、公孙敖都吃了败仗，公孙贺没有遇到匈奴人，徒劳无功。

3.7 羟基酪醇的防癌抗癌活性

4.1.2 LC-MS/MS测定

3.8 羟基酪醇的抗炎症作用

2）IHS变换，IHS融合算法是多源影像融合中的经典算法，首先通过正变换将多光谱影像从RGB彩色空间变换到IHS彩色空间，同时对高分辨率的全色影像进行线性拉伸，即与分离出来的I（亮度）分量进行直方图匹配，使拉伸后影像的均值和方差与I分量一致；然后将经过直方图匹配的高分辨率全色影像代替IHS空间的I分量与分离出来的H（色度）、S（饱和度）分量一起进行IHS逆变换，重新变换到RGB彩色空间。

天然或合成的抗氧化剂能够通过调控包括核因子B(NF-B)在内的转录因子来抑制促炎症因子的表达。最近有研究发现，羟基酪醇具有阻止NF-B和激活蛋白-1(AP-1)的活化，以致降低血管细胞粘附因子-1的基因转录的作用[12]。

本试验均使用1 000 ℃下煅烧4 h的生石灰为钙质原料，以氧氯化锆作为添加剂，采用不同粒径晶质石英粉作为硅质原料，考察了石英粉的粒度对合成硬硅钙石纤维的影响，结果如图6所示。

3.9 羟基酪醇及橄榄提取物的其他作用

对心脑血管疾病的预防和治疗功效；羟基酪醇对视网膜色素上皮细胞的保护作用；抗HIV作用；抗HBV作用；抗肿瘤作用；意大利学者研究结果表明，酪醇对菌株具有广泛的抑制活性。橄榄油的组成成分有助于降低冠心病和癌症(前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、皮肤癌)的发生。这些积极影响主要是由于橄榄油中存在高水平的酚类化合物，主要是橄榄苦苷和酪醇。

4 橄榄提取物应用验证

4.1 橄榄提取物/橄榄多酚/羟基酪醇的检测验证

4.1.5.3 牙膏样品中羟基酪醇的检测结果

4.1.1 样品制备

样品处理：称取约1克样品(精确至0.01克)，置于25ml比色管，加入10ml蒸馏水，涡旋1min，超声5min溶解样品，加入无水甲醇提取，并定容至刻度，充分涡旋混匀，4000rpm离心5min，上清液过0.22um滤膜，待上机测试。

对照品溶液配制：准确称取羟基酪醇置于10ml容量瓶，用甲醇为溶剂分别配制适当质量浓度的对照品储备液，置于棕色容量瓶避光4℃保存，临用时根据需要，用50%甲醇水稀释成适当浓度的混合品对照工作溶液，待上机测试。

癌症的发生是基因异常表达的结果，是基因突变的逐渐积累。已有数据表明地中海膳食可降低癌症的发病率，而橄榄油是地中海膳食的重要组成部分美国的研究者RobertoFabiani等人研究了橄榄油中多酚类物质的抗癌症性质他们用橄榄油提取物羟基酪醇处理经过氧化氢诱导DNA损伤的人外周血单核细胞(PBMC)和前髓细胞性白血病细胞(HL60)，并采用单细胞凝胶电泳(彗星实验)进行分析，证明了极低浓度的羟基酪醇就能够显著降低氧化物造成的DNA损伤。大连医科大学的张小梅等采用人类来源的肝脏肿瘤细胞HepG2细胞系作为体外实验系统，研究了羟基酪醇对致癌物质丙烯酰胺的抗癌作用及可能机理研究发现丙烯酰胺在HepG2细胞能引起遗传毒性，可能的作用机制是活性氧类(ROS)增加，还原型谷胱甘肽(GSH)降低，从而引起细胞氧化性DNA损伤经羟基酪醇预处理的HepG2细胞再加入丙烯酰胺后，羟基酪醇能显著降低丙烯酰胺所致的细胞毒性防止DNA损伤阻断细胞内ROS的形成，阻止丙烯酰胺所致的GSH的降低，并呈剂量依赖关系，这说明羟基酪醇对于丙烯酰胺引起的细胞毒性和DNA损伤具有很强的保护功能羟基酪醇还被证实能够抑制结肠腺癌细胞的增殖，它能诱导细胞停滞在细胞周期的G2/M期，这种抗增殖作用是通过抑制细胞外细胞信号调节激酶ERK1/2和细胞周期蛋白D1的表达实现的[11]。

色谱柱：poroshellEC-C18柱(100mm×2.1mm，2.7um)；柱温：30℃；流速：0.3ml/min；进样量5ul；流动相A：水，流动相B：乙氰；分析时间：8min。

在我国改革开放以后，为建设中国特色社会主义经济，各个领域的企业都在以发展经济为主，但忽略了企业发展过程中，其内部人员的自身素质问题，很多企业存在财务管理人员的整体素质以及行为能力不强的问题[3]。财务管理人员自身所具备的专业知识太过局限，而且企业也没有对这部分人员进行专业的培训，所以，这部分财务管理人员在管理的意识和管理的质量上比较落后，在企业财务管理创新上难以提供良好的建议，因此提升人员自身素质是极其必要的[4]。企业可以根据实际情况对这部分人员进行培训，普及一些专业知识，以便为企业在投资或是改革上提供更多更好建议，在决策方面可以做得更完善，避免引领企业走下坡路。

 

表5 梯度洗脱程序

  

时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)0～1.095→605→401.0～2.060402.0～3.060→2040→803.0～4.020804.0～4.120→9580→5

4.1.3 质谱条件

电喷离子源(ESI)；负离子扫描模式；多反应监测(MRM)采集方式；干燥气温度(GasTemp)：350℃；干燥气流量(GasFlow)：10.0l/min；雾化气压力(Nebulizer)：275.8kPa(40.0psi)；毛细管电压(Capillary)：4000V；质量分析器分辨率：均为unit；具体质谱采集见(表6)。

 

表6 目标物的质谱采集参数

  

序号NO.化合物Compound保留时间tR(min)母粒子PrecIon(m/z)子粒子ProdIon(m/z)碎裂电压Frog(V)碰撞能量CE(V)驻留时间Dwell(ms)1羟基酪醇2.78153.1153.1123.0*95.078788158080

*定量离子

4.1.4 测定方法

在上述条件下，取对照样品溶液和样品溶液各5ul注入液相色谱-串联四级杆质谱仪进行测定，对照样品溶液目标峰的保留时间和MRM质谱监测离子对为依据进行定性，以对应的MRM离子对的峰面积按外标法计算样品中目标物的含量。

虾油、酵母抽提物：烟台华海生物制品有限公司；味精、食盐、焦糖色、白砂糖、干贝素、黄原胶、变性淀粉、麦芽糊精、蔬菜、食用油：市售。

4.1.5.1 羟基酪醇的对照品图谱

 

过氧自由基可能是诱发牙髓炎症的一个重要因素，氧自由基(如超氧自由基(O2-·)羟自由基(·OH-)和脂质过氧化反应中所产生的自由基(如烷基(R·)、烷氧基(RO·)和脂质过氧自由基(ROO·)都起着重要作用。许多实验研究证实，脂质过氧自由基与癌症、衰老关系非常密切。新近研究表明，这种自由基具有很强的细胞毒性[4]。

 

因橄榄提取物组分较多，选择最具代表性的羟基酪醇作为特征物质。羟基酪醇是一种天然多酚类化合物，具有多种生物和药理活性。英文名：Hydroxytyrosol；分子式：C8H10O3；分子量：154.1632；结构式 羟基酪醇测定方法如下：

 

表7 测试结果

  

样品名称检测项目检测结果计量单位检测方法橄榄提取物牙膏羟基酪醇20.9mg/kgLC-MS/MS

经检测验证，以及对测试结果和添加量的对比核算，该测试方法具重现性、准确性、实用性。

4.2 橄榄提取物在牙膏产品中的验证

4.2.1 对症试用研究

经实验室稳定试验验证(如表8)，适量的橄榄提取物应用于牙膏、漱口水中，具有良好的稳定性，采用橄榄提取物作为功效成分添加到牙膏中并验证其在牙膏中的口气清晰、消炎功效，以及通过试验研究得到所述橄榄提取物占牙膏膏体的最佳优化重量百分比。实施例1至实施例7中橄榄提取物重量份数最大值取25，最小值取0.01，中间值取0.1、0.5、1、5和10。按照上表中的配方，取不同重量份数的橄榄提取物，进行多次配方试验，除偶有变色之外，其他方面稳定，分别委托20名经常有牙龈炎和口气不清晰的志愿者进行效果评价，使用频率为每日早、晚各一次，用量约1.3g膏体/每次，每次刷牙时间约3min。得到的结果表明含有橄榄的植物牙膏具有较明显的消炎和口气清晰的作用，并且从使用口感和效果两方面评价，橄榄提取物占该植物牙膏膏体的重量比为0.01%～25%比较适宜，优化为0.1%～10%，最佳优化为0.1%～5%。当橄榄提取物占该植物牙膏膏体的重量比为0.1%～5%时，牙膏的药效与口感处于最佳平衡。

 

表8 配方实验案例

  

配方例1例2例3例4例5例6例7橄榄提取物%0.010.10.5151025

4.2.2 橄榄多酚对口腔颌面部感染常见病原菌的抑菌活性体外实验验证

王瑶等选用质量控制标准菌株和临床分离的对多数抗生素耐药的菌株，采用琼脂稀释法和微量液体稀释法相结合的药敏实验方法，定量测定橄榄多酚对口腔颌面部感染常见病原菌的最低抑制浓度(MIC)[13]。

 

表9 橄榄多酚平皿配制表

  

平皿编号123456789101112多酚溶液ml555555555550MHAml555555555555稀释度1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/5121/10241/20浓度mg/ml1052.51.250.630.320.160.080.0390.019100菌液μl111111111111

 

表10 橄榄多酚的抑菌作用

  

平皿编号123456789101112金黄色葡萄球菌ATCC25923------++++-+乙型溶血性链球菌CMCC32210------++++-+大肠埃希氏菌ATCC25922--++++++++-+表皮葡萄球菌临床株------++++-+乙型溶血性链球菌临床株------++++-+

“+”表示有菌生长，“-”表示无菌生长。

表11 橄榄多酚抑制口腔常见细菌生长的最低抑菌浓度

  

细菌种类金葡菌乙型链球菌大肠埃希氏菌表皮葡萄球菌变形链球菌MIC(mg/ml)0.250.2540.250.5

如表9、表10、表11测试数据显示，橄榄多酚对金黄色葡萄球菌ATCC25923、乙型溶血性链球菌CMCC32210/临床株、表皮葡萄球菌临床株的MIC均是0.25mg/ml。对大肠埃希氏菌ATCC25922的MIC为4.0mg/ml。对变形链球菌ATCC25175/临床株的MIC均为0.5mg/ml。体外抑菌实验表明，橄榄多酚有较好的抑菌活性。对口腔颌面感染的常见革兰氏阳性病原菌的抗菌活性明显优于革兰氏阴性杆菌，而对变形链球菌也有较明显的抑菌作用。

1) 该项目地下室顶板开裂的主要原因为施工方法选择不当，混凝土水化热释放过程引起明显的板温度胀缩裂缝.

依照此模型，用羟基酪醇溶液与多酚溶液对比试验，羟基酪醇的最低抑菌浓度分别依次用0.16mg/ml、0.16mg/ml、2.5mg/ml、0.16mg/ml、0.32mg/ml的浓度，对金色葡萄球菌、乙型链球菌、大肠埃希氏菌、表皮葡萄球菌、变形链球菌进行抑菌实验，结果只有大肠埃希氏菌有细菌生长。可认为羟基酪醇的最小抑菌浓度更低。后续研究可将橄榄提取物进一步处理，把橄榄苦苷转化为羟基酪醇(如下反应式)，并做适当的提纯，以提升橄榄提取物的抑菌性能的可能性，彰显羟基酪醇的最大价值。

5 橄榄提取物在口腔护理用品领域的意义

具有天然、健康、安全理念的产品在消费者心目中的分量越来越重，而具有食材标签的橄榄提取物，其中的羟基酪醇成分更有“植物黄金”之说，更让食材来源的功效成分实现口腔护理功效需求的价值突破。为消费者提供天然、安全、功效兼备的健康绿色口腔护理方案，提供是一个良好的基点。有深度研究和潜在的挖掘价值。橄榄多酚(羟基酪醇)重要的理论依据的明确阐述，使其在食品添加剂、化妆品、保健食品和医药工业方面具有广阔的应用前景。但橄榄多酚(羟基酪醇)当前的研究多限于化学实验和体外生物实验，体内研究较少，如机体对羟基酪醇的代谢吸收利用、神经体液调节、体内自由基平衡等问题将成为今后研究的重点，在产品应用中如何克服碱性环境下不稳定、易失活的问题，高温容易变色，口感较苦等都是我们需要克服的问题。总的来说笔者认为橄榄提取物(羟基酪醇)，前景广阔。

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参考文献(略)