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紫苏叶粗提物对口腔变形链球菌的体外实验研究

更新时间:2009-03-28

紫苏(Perilla frutescens(L.) Britt.),又称白紫苏、红苏、香苏、苏麻、苏叶等,为唇形科紫苏属一年生草本植物。紫苏叶片多呈皱缩卷曲、破碎状,完整者展平后呈卵圆形。先端急尖或长尖,基部呈圆形或宽楔形,边缘有圆裙齿。两面紫色或上表面绿色而下表面紫色,疏生灰白色毛,多数下表面有凹点状的腺鳞[1,2]。紫苏叶含有多种化学成分,如挥发油、花色素甙、黄酮、黄酮甙、迷迭香酸、紫苏醛、紫苏酮、榄香素、石竹烯、木犀草素等[3-5]

变形链球菌是公认的口腔主要致龋菌,能在牙菌斑中进行无氧代谢,发酵产酸,从而造成龋菌的产生。研究表明[6],紫苏叶的乙酸乙酯提取部位能抑制变形链球菌的生长,揭示紫苏叶粗提物对防止口腔龋病有一定的作用。本文进一步研究了紫苏叶粗提物对变形链球菌生长、粘附、产酸作用的影响,期望找到一种防龋作用强的中药防龋剂。

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1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 干紫苏叶;

1.1.2 培养基:TPY液体培养基(广东环凯微生物科技有限公司)、TSB液体培养基(广东环凯微生物科技有限公司)。

1.2 实验方法

根据抑菌实验的最低抑菌浓度(MIC)测定结果,选取该MIC值及以下的5个浓度梯队配制成含1%蔗糖的TPY 液体培养基,调定初始pH值为7.4,按菌液与上述TPY培养基1∶10(V/V)比例接种,37℃下厌氧培养48h,测定上清液的pH值,并计算培养前后pH值的变化值ΔpH,ΔpH=初始pH值(7.4)-终末pH值[9]

1.2.5 对变形链球菌产酸的影响实验

将紫苏叶粗提物按2倍稀释法溶于TPY液体培养基中[7],使其生药浓度分别为50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、3.13mg/mL、1.56mg/mL、0.78mg/mL、0.39mg/mL。按菌液与上述TPY培养基1∶10(V/V)比例接种,于37℃下厌氧培养48h。肉眼观察无细菌生长最低浓度即为粗提物最低抑菌浓度(MIC)。

1.2.2 菌种及培养

根据抑菌实验的最低抑菌浓度(MIC)测定结果,选取该MIC值及以下的5个浓度梯队配制成含1%蔗糖的TPY 液体培养基。按菌液与上述TPY培养基1∶10(V/V)比例接种,各试管与地平面角度呈30°,于37℃的条件下厌氧中培养48h。移去试管中溶液,生理盐水轻轻冲洗3次,用0.1mol/L NaOH溶液、震荡器将试管上粘附的细菌洗脱下来,8000r/min、4℃离心10分钟,收集细菌,置于3mL生理盐水中,混匀,紫外可见光分光光度计测OD540nm值[8]

不少年轻父母的“父母角色”意识不够,对家庭教育不重视,因而忽略对家庭教育问题的关注。更多年轻父母是重视家庭教育的,但对家庭教育问题也未必能很好地把握。

1.2.3 对变形链球菌生长的影响实验

将紫苏叶粉碎后过60目筛,然后在乙醇浓度:70%,料液比:20∶1,提取温度:65℃,提取时间:100min的条件下进行提取,提取完成后,过滤,滤渣以少量70%乙醇洗涤,合并滤液,减压除去溶剂,冻干后置于冰箱备用。

⑵肝腺癌。肝脏呈土黄色,布满多发性大小不等的结节。结节外面有假包膜,切面似鱼肉样,分叶,淡红色。镜检:癌细胞呈多边形,边界清楚,胞浆丰富,核大,超过正常者2~3倍,杂有病理性核分裂,核重叠现象。

为什么说生活安全是海外项目工作的基础?因为做好生活安全保障工作,可以使员工始终保持良好的身体和精神状态,以饱满的热情投入到项目工作当中去。

1.2.4 对变形链球菌粘附的影响实验

取变形链球菌标准菌株ATCC25175,常规方法接种于TSB液体培养基100μL中活化3小时,将复苏的菌种接种于TPY液体培养基上,90%N2、5%CO2、5%H2、37℃下厌氧培养48小时,然后以8000r/min离心10min,收集细菌,无菌生理盐水洗涤2次,于5mL无菌生理盐水内制成混悬液,在540nm波长处吸光度(Optical Density, OD)为1.0的菌悬液(用细菌计数板测定细菌的浓度为0.9×108个/mL),备用。

姜夔词素以清空峭拔称名,其中《点绛唇·燕雁无心》更是白石词风的代表杰作,抒发了词人对身世的感慨嗟叹。在《点绛唇》中,关于首句“燕雁无心”一直有不同的释义:《全宋词》中,注释“燕雁”为“自北方飞来之雁”;《唐宋词鉴赏辞典》中,释“燕雁”为“北来之雁”;《唐宋词选释》中,俞平伯先生注:“‘燕雁’有两说:一.‘燕’指玄鸟。仄声。二.燕为地名,幽燕之燕,平声”……在当下学术论文中,也有两种释义的偏倚。那么到底是“北地之雁”?还是“燕与大雁”?究其原词,我们或可得解。

1.2.1 紫苏叶粗提物的制备

1.2.6 统计处理

第一,省草原站牵头开展生物防治、生态控制的试验、示范,为海西州草原鼠害的长期持续控制,探索有效方法和新措施。第二,在防治工作中,省、市、州业务部门要抽调业务骨干深入鼠防一线,开展防前技术指导、防中督促落实、防后检查总结,积极参与和掌握鼠害发生全过程。第三,继续加大草原鼠害生态综合治理力度。在小面积天然草场中,大力推广鼬灭鼠技术[1]。第四,继续坚持鼠害防治与草场翻耕补播等生态恢复措施相结合,有效提高鼠害灭治效果。

数据以表示,采用SPSS16.0统计软件进行数据的输入和分析,各组总体均数之间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。

2 结果

2.1 对变形链球菌生长的影响实验

当紫苏叶粗提物药液浓度≥12.5mg/mL时,对于变形链球菌的生长具有抑制作用,即紫苏叶粗提物抑制变形链球菌体外生长的MIC值为12.5mg/mL。

2.2 对变形链球菌粘附的影响实验

1 紫苏叶粗提物对变形链球菌粘附作用的影响

  

组 别OD值与对照组比较12.5mg/mL组0.365±0.022P<0.016.25mg/mL组0.449±0.025P<0.053.13mg/mL组0.538±0.023P<0.051.56mg/mL组0.598±0.030P>0.050.78mg/mL组0.716±0.014P>0.05对照组0.654±0.031-

由表1可见,随着紫苏叶粗提物浓度的增加,粘附的变形链球菌沉淀混悬液的OD值逐渐减小。经统计处理发现,当紫苏叶粗提物的浓度≥3.13mg/mL时,各浓度组与对照组相比均有显著性差异(P<0.05) 。即紫苏叶粗提物的浓度≥3.13mg/mL时,具有明显抑制变形链球菌粘附的作用。

2.3 对变形链球菌产酸的影响实验

紫苏叶粗提物对变形链球菌产酸作用的影响见表2。随着紫苏叶粗提物浓度的升高,ΔpH值越来越小。经统计处理发现,当紫苏叶粗提物的浓度≥3.13mg/mL时,各浓度组与对照组相比均有显著性差异(P<0.05) ,当紫苏叶粗提物的浓度≤1.56mg/mL时,差异无显著性(P>0.05)。即紫苏叶粗提物的浓度≥3.13mg/mL时,具有明显抑制变形链球菌产酸的作用。

2 紫苏叶粗提物对变形链球菌产酸作用的影响

  

组 别ΔpH值与对照组比较12.5mg/mL组0.571±0.018P<0.016.25mg/mL组0.806±0.099P<0.013.13mg/mL组0.920±0.095P<0.011.56mg/mL组3.269±0.110P>0.050.78mg/mL组3.447±0.065P>0.05对照组3.730±0.165-

3 讨论

龋病是发生于牙齿硬组织的慢性细菌性疾病,是由口腔常见菌(如变形链球菌)引起的内源性感染性疾病,作为一种人类最常见的口腔疾病,发病率高,流行区广,严重影响人类的口腔健康。防治龋病的关键是维持和调节牙菌斑生物膜细菌的生态平衡,而寻找具有对细菌和牙体硬组织均有作用的安全、有效、经济的防龋药物,是龋病防治研究的重点。

天然药物具有来源丰富、取材方便、用法简单、毒副作用轻微等优点,一直是研究的热点。近年来许多学者致力于从天然植物中分离提取天然抗菌斑和抗龋药物,并已初获成效[10,11]

本研究将不同浓度的紫苏叶粗提物与变形链球菌共同培养,结果显示当紫苏叶粗提物药液浓度≥12.5mg/mL时,可以有效抑制变形链球菌的生长。当紫苏叶粗提物药液浓度≥3.13mg/mL时,可以有效抑制变形链球菌的粘附和产酸能力。因此,可以推测一定浓度的紫苏叶粗提物能有效防止致龋菌在口腔中的生长及代谢,从而减少龋病的发生,在龋病防治中具有一定应用前景。然而,中药有着错综复杂的成分,其防龋的有效药物成分及具体机制,尚有待进一步研究。

参考文献(略)

 
蒋旭东,覃青云,杨卫豪,卢凯玲,周传检
《口腔护理用品工业》2018年第02期文献

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