脱落酸(abscisic acid,ABA)是植物体内一种重要的激素分子,在调控植物生长发育和适应各种环境胁迫的过程中起着重要作用。植物响应干旱胁迫的一条有效途径是胞内ABA迅速积累,继而启动一系列响应胁迫的反应,包括诱导气孔关闭、积累渗透调节物质和增强抗氧化防护系统等[1-4]。ABA信号转导途径是一个非常复杂、多种细胞组分参与ABA信号转导的调控过程。之前的报道指出,活性氧(reactive oxygen species,ROS)作为第二信使参与干旱胁迫下ABA调控的适应性生理反应[5]。

“互联网+”即“互联网+各个传统行业”，是利用信息通信技术以及互联网平台，让互联网与传统行业进行深度融合，创造新的发展生态。在这种环境下，互联网+图书馆成为常态，意味着图书馆的跨界、图书馆的变革、图书馆服务的开放和重塑。只要是用户需要的，高校图书馆都可以利用互联网为用户服务。

植物细胞代谢过程中产生的ROS主要包括超氧阴离子单线态氧(1O2)和羟基自由基(HO·)以及过氧化氢(H2O2)等。NADPH氧化酶已经被证实是植物细胞ROS的重要来源[2,6]。水分胁迫下植物体内ABA的积累能诱导编码NADPH氧化酶的基因表达并且增加其活性,产生较多的ROS,从而激活ABA信号级联反应,增强植物对水分胁迫的耐性[7-8]。拟南芥基因组中有10个编码NADPH氧化酶催化亚基的基因(AtrbohA～J)[8],而水稻基因组中则有9个基因(OsrbohA～I)[9]。在ABA诱导的拟南芥保卫细胞气孔关闭过程中,AtrbohD和AtrbohF是ROS产生所必需的[8]。在水稻中,ABA处理诱导OsRbohB和OsRbohE表达上调,暗示这2个基因可能参与ABA诱导的H2O2产生[10-11]。

连旱天数和森林火险等级呈正相关，连旱天数增加，可燃物可燃性增加，对应的火险等级升高。反之，可燃物可燃性降低，对应的火险等级降低[6]。在祁连山东端青海云杉林中，连旱天数小于7d，一般不易引发森林火灾，连旱天数大于32d，则较容易引发森林火灾。

（1）设置预锯缝。技术人员首先将基层按每间距20m进行标记处理，然后由专业技术人员采用切割机对基层进行切割，设置预锯缝。

[2]　　　Zhang Y,Zhu H,Zhang Q,et al. Phospholipase dalpha1 and phosphatidic acid regulate NADPH oxidase activity and production of reactive oxygen species in ABA-mediated stomatal closure in Arabidopsis[J]. Plant Cell,2009,21:2357-2377.

1　材料与方法

1.1　试验材料

通过地下水系统脆弱性评价分析，可以掌握不同等级脆弱性的地下水分布，特别是了解地下水水质脆弱性高，即易于污染地区的状况。这样，地下水水质保护就能做到更有针对性。地下水系统的脆弱性，除了地下水系统固有的对污染物的敏感性外，还与天然或人为造成的污染源的位置和类型以及污染物距离含水层的相对位置和污染物的运移情况等因素有关。因此，应了解和掌握受水区地下水系统对污染物的固有敏感性，研究评价受水区地下水系统的脆弱性。

1.2　试验方法

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1.2.3　谷胱甘肽转移酶下拉试验(GST-pull down)　使用Primer Premier 5.0软件设计SAPK8/9/10上游带EcoRⅠ酶切位点和下游带XhoⅠ酶切位点的引物,以SAPK8/9/10-T载体测序正确无突变的质粒为模板,将SAPK8/9/10全长序列构建到带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-1上;设计带有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的OsRbohB N端(355个氨基酸)的上、下游引物,克隆OsRbohB N端片段,并将其连接到pET30a-c载体上,构建His-OsRbohB原核表达载体。采用MagneGSTTM Pull-Down System试剂盒(Promega)检测SAPK8/9/10与OsRbohB/E的体外互作。将转化有GST空载和SAPK8/9/10-GST菌裂解后与预洗过的MagneGSTTM磁珠结合,加入目的蛋白OsRbohB-His或OsRbohE-His以及反应缓冲液,混匀后在4 ℃旋转仪上反应2 h,然后用MagneGSTTM Binding/Wash Buffer 洗涤磁珠,去除非特异性结合的杂蛋白,洗涤3次后加入适量蛋白上样缓冲液,煮样,SDS-PAGE电泳,并用His一抗进行Western Blotting检测。

1.2.4　体外磷酸化凝胶激酶分析　参照Zhang等[19]的方法并稍加修改。向GST-SAPK8/9/10与His-OsRbohB/E纯化后的蛋白样品中加入激酶反应液(25 mmol·L-1 Tris、pH7.5,12 mmol·L-1 MgCl2,1 mmol·L-1 DTT,0.1 mmol·L-1 Na3VO4,5 mmol·L-1 CaCl2,0.5 mg·mL-1 MBP,200 mmol·L-1 ATP,50 μCi γ32-P-ATP),总体积不超过40 μL,30 ℃下反应30 min,加入8 μL 5×SDS上样缓冲液,煮沸5 min。SDS-PAGE电泳后将凝胶转入5%(体积分数)三氯乙酸(TCA)和1%(体积分数)焦磷酸钠(NaPPi)混合液中清洗并终止反应,清洗3次,每次5 min,以彻底除去游离的γ32-P-ATP。用玻璃纸将凝胶制成干胶,用Typhoon 打磷屏显影。

1.2.5　双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)的体外合成与纯化　使用RiboMAXTM Large Scale RNA Production System-T7试剂盒(Promege),并按照说明书进行体外转录dsRNA,以酚/氯仿抽提并纯化,用RNA-free水溶解,紫外分光检测RNA纯度与浓度。

1.2.6　水稻原生质体分离　水稻植株在28 ℃黑暗条件下培养2周,植株长至12～15 cm时,取叶与茎参照Zhang等[20]的方法提取分离原生质体。

1.2.7　水稻原生质体中H2O2的检测　参照Zhai等[21]的试验方法,以PEG介导法转化dsRNA或构建的过表达载体进原生质体,经10 μmol·L-1ABA处理5 min后,用H2O2荧光探针2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(2′,7′-dichlorofluorescein diacetate(H2DCF-DA))标记染色,在激光共聚焦显微镜下观察。试验数据重复3次,每个处理至少取60个细胞,用Zeiss图像软件统计Intensity Mean Value值。利用SPSS statistics 19软件进行统计分析,以P<0.05为显著差异。

2　结果与分析

2.1　酵母双杂交筛选SAPK8/9/10与OsRbohB和OsRbohE之间的互作关系

酵母双杂交结果如图1-A和B所示:SD-Trp/-Leu/-His酵母三缺琼脂糖培养基上,阳性对照生长良好并且变成蓝色,而阴性对照生长缓慢呈现酵母细胞原本的白色状态。SAPK8/9/10-OsRbohB和SAPK8/9/10-OsRbohE长势良好且呈现蓝色。同时自激活验证结果如图1-C所示:阳性对照变蓝,pGBKT7-SAPK8/9/10和pGBKT7空载都未变蓝,说明SAPK8/9/10没有自激活作用。这一结果表明SAPK8/9/10与OsRbohB/E在酵母中存在相互作用。

  

图1　SAPK8/9/10与OsRbohB/E酵母双杂交互作筛选Fig.1　SAPK8/9/10 interact with OsRbohB/E in yeast two-hybrid system　　A. SAPK8/9/10与OsRbohB酵母双杂交互作筛选;B. SAPK8/9/10与OsRbohE酵母双杂交互作筛选;C. SAPK8/9/10自激活检测。AD:pGAT7 AD载体;BD:pGBKT7载体。A. SAPK8/9/10 interact with OsRbohB in yeast two-hybrid system;B. SAPK8/9/10 interact with OsRbohE in yeast two-hybrid system;C. Testing SAPK8/9/10 for autoactivation. AD:pGAT7 AD vector;BD:pGBKT7 vector.

2.2　GST-pull down试验体外检测SAPK8/9/10与OsRbohB/E的互作关系

为了证实SAPK8/9/10与OsRbohB/E之间相互作用的真实性,我们首先利用GST-pull down试验来研究它们之间是否在体外存在直接的物理互作。结果如图2-A和B所示:GST-SAPK8/9/10的泳道经His一抗杂交都出现了目的条带,而GST空载泳道没有目标条带,这一结果说明结合GST-SAPK8/9/10的磁珠能够正确捕捉到His-OsRbohB/E,而GST空载磁珠则不能与His-OsRbohB/E结合。这一结果指出SAPK8/9/10和OsRbohB/E之间在体外存在直接的相互作用。

利用SPSS 20.0统计软件处理实验数据,组间同类型计量、计数比较分别使用t检验和x2检验,以“P<0.05”为比较差异有统计学意义。

  

图2　GST-pull down验证SAPK8/9/10与OsRbohB/E体外互作Fig.2　GST-pull down assay for in vitro interaction of SAPK8/9/10 and OsRbohB/E　　A. GST-pull down 验证SAPK8/9/10与OsRbohB(N端)互作;B. GST-pull down 验证SAPK8/9/10与OsRbohE(N端)互作。A. GST-pull down assay for in vitro interaction of SAPK8/9/10 and OsRbohB(N-terminal);B. GST-pull down assay for in vitro interaction of SAPK8/9/10 and OsRbohE(N-terminal).

2.3　SAPK8/9/10与OsRbohB/E在植物体内的相互作用

上述研究表明,SAPK8/9/10与OsRbohB/E在酵母和体外均存在相互作用。然而,它们之间是否在植物体内也存在相互作用?对此,本研究以洋葱表皮细胞为材料,利用BiFC技术验证SAPK8/9/10与OsRbohB/E在植物细胞内是否存在相互作用。如图3-A和B所示:SAPK8/9/10-YFPN与OsRbohB-YFPC组合以及SAPK8/9/10-YFPC与OsRbohE-YFPN组合在激光共聚焦显微镜下可以观察到黄色荧光,而对照组SAPK8/9/10-YFPN与YFPC组合以及SAPK8/9/10-YFPC与YFPN组合在激光共聚焦显微镜下并没有观察到黄色荧光。这表明SAPK8/9/10与OsRbohB/E之间在植物细胞中存在相互作用。

  

图3　在洋葱表皮细胞中BiFC验证SAPK8/9/10与OsRbohB及OsRbohE的相互作用Fig.3　SAPK8/9/10 interact with OsRbohB/E in vivo as determined by BiFC assay in onion epidermal cellsA. BiFC验证SAPK8/9/10与OsRbohB互作;B. BiFC验证SAPK8/9/10与OsRbohE互作。A. The interaction between SAPK8/9/10 and OsRbohB by BiFC;B. The interaction between SAPK8/9/10 and OsRbohE by BiFC.

2.4　体外磷酸化检测OsRbohB/E与SAPK8/9/10的关系

植物Rboh基因N端含有一段300 bp左右的特异的氨基酸序列,在Rboh基因调控中起着关键作用[22-23]。因此,将GST-SAPK8/9/10、His-OsRbohB N端(355个氨基酸)和His-OsRbohE N端(290个氨基酸)原核表达后纯化蛋白,以Rboh为底物、MBP为阳性对照进行体外免疫沉淀凝胶激酶反应,Typhoon显影结果显示(图4-A和B),SAPK8/9/10能够直接体外磷酸化OsRbohB/E。这一结果表明,OsRbohB/E是SAPK8/9/10的磷酸化底物。

  

图4　SAPK8/9/10体外磷酸化OsRbohB/EFig.4　Phosphorylation of OsRbohB/E by SAPK8/9/10 in vitroA. SAPK8/9/10体外磷酸化OsRbohB;B. SAPK8/9/10体外磷酸化OsRbohE。A. OsRbohB is phosphorylated by SAPK8/9/10 in vitro;B. OsRbohE is phosphorylated by SAPK8/9/10 in vitro.

2.5　SAPK9/10与OsRbohB/E对ABA诱导的 H2O2产生的影响

为了研究ABA诱导下SAPK9/10和OsRbohB/E对水稻原生质体中H2O2积累的影响,利用原生质体瞬时体系,经10 μmol·L-1ABA处理5 min后用H2O2荧光探针H2DCF-DA标记染色,在激光共聚焦显微镜下观察。试验结果(图5和6)表明:在没有ABA处理下,与对照组相比,过表达SAPK9/10和OsRbohB/E分别显著增加H2O2荧光强度。在ABA处理后,与对照组相比,过表达SAPK9/10和OsRbohB/E中荧光强度显著增加。相反,在没有ABA处理条件下RNAi介导的SAPK9/10或OsRbohB/E沉默降低了H2O2荧光强度,ABA处理后荧光强度有所增加,但是仍然低于对照组荧光强度。由于在试验中未能成功构建SAPK8过表达载体,因此在后续的试验中没有详细分析SAPK8调节ABA诱导 H2O2产生的机制。此外,过表达SAPKs和沉默OsRbohs原生质体中H2O2荧光强度比过表达OsRbohs和沉默SAPKs原生质体中H2O2荧光强度下降明显,这一结果说明SAPK9/10通过OsRbohB/E共同调节ABA诱导H2O2产生。

  

图5　SAPK10与OsRbohB/E协同调节ABA诱导的H2O2产生Fig.5　SAPK10 and OsRbohB/E coordinately regulate ABA-induced H2O2 production　　A、C.SAPK10与OsRbohB共同调节ABA诱导的H2O2产生;B、D.SAPK10与OsRbohE共同调节ABA诱导的H2O2产生。OE10:过表达SAPK10;OEB:过表达OsRbohB;OEE:过表达OsRbohE;ds10:沉默SAPK10;dsB:沉默OsRbohB;dsE:沉默OsRbohE。标尺=50 μm。A,C.SAPK10 and OsRbohB co-regulated ABA-induced H2O2 production;B,D.SAPK10 and OsRbohE co-regulated ABA-induced H2O2 production. OE10:Over-expression of SAPK10;OEB:Over-expression of OsRbohB;OEE:Over-expression of OsRbohE;ds10:Silencing of SAPK10;dsB:Silencing of OsRbohB;dsE:Silencing of OsRbohE. Bar=50 μm.

  

图6　SAPK9与OsRbohB/E协同调节ABA诱导的H2O2产生Fig.6　SAPK9 and OsRbohB/E coordinately regulate ABA-induced H2O2 production　　A、C.SAPK9与OsRbohB共同调节ABA诱导的H2O2产生;B、D.SAPK9与OsRbohE共同调节ABA诱导的H2O2产生。OE9:过表达SAPK9;OEB:过表达OsRbohB;OEE:过表达OsRbohE;ds9:沉默SAPK9;dsB:沉默OsRbohB;dsE:沉默OsRbohE。标尺=50 μm。A,C.SAPK9 and OsRbohB co-regulated ABA-induced H2O2 production;B,D.SAPK9 and OsRbohE co-regulated ABA-induced H2O2 production. OE9:Over-expression of SAPK9;OEB:Over-expression of OsRbohB;OEE:Over-expression of OsRbohE;ds9:Silencing of SAPK9;dsB:Silencing of OsRbohB;dsE:Silencing of OsRbohE. Bar=50 μm.

3　讨论

ABA信号转导可以分成3个阶段:ABA的产生与运输;ABA信号的感知与传递;ABA信号的应答与调控。其中ABA的信号感知与传递系统包含的核心信号成员主要有PYR/RCAR等ABA的受体家族、PP2C家族以及SnRK2激酶家族等[15,24-25]。PP2C作为一种负调控元件,在正常条件下,PP2C与SnRK2结合,去磷酸化SnRK2,从而导致SnRK2失活,不能将信号向下游传递。当植物受到外界胁迫时,ABA迅速合成并积累,结合了ABA的PYR/PYL/RCAR与PP2Cs相互作用能够抑制PP2C的活性[26],从而解除PP2C对SnRK2活性的抑制。处于激活状态的SnRK2可以将ABA信号传递给下游组分,包括通过蛋白磷酸化作用激活下游转录因子(如AREBl/ABF2、AREB2/ABF4和ABF3),正向调控ABA信号应答基因的表达[27-28],以及直接作用于相关膜蛋白(如阴离子通道和钾离子通道),最终诱导气孔关闭[29-30]。

本研究采用粳型常规水稻(Oryza sativa)品种‘徐稻4号’为试验材料。

研究发现,拟南芥OST1能够直接与NADPH氧化酶中的AtrbohF互作,且AtrbohF被OST1磷酸化,AtrbohF中的Ser13和Ser174残基是其磷酸化位点[16]。水稻中与拟南芥OST1同源的SAPK8、SAPK9和SAPK10激酶活性均可被ABA上调[17],且OsRbohB和OsRbohE被显示受ABA诱导表达上调,暗示这些基因参与ABA诱导的H2O2产生。那么,水稻中这些SAPKs是否与OsRbohs之间均存在互作关系?为此,本研究先利用酵母双杂交系统进行了初步的互作探究,结果显示SAPK8、SAPK9和SAPK10均与OsRbohB以及OsRbohE存在相互作用关系。然后又利用GST-pull down技术以及双分子荧光互补(BiFC)技术证实了SAPK8/9/10与OsRbohB/E在体内、外存在相互作用。同时,体外磷酸化技术分析显示,SAPK8/9/10能够磷酸化OsRbohB/E,即OsRbohB/E均可作为SAPK8/9/10磷酸化底物。这些结果暗示,在ABA信号通路中,SAPK8/9/10与OsRbohB/E可能通过互作发挥作用。

在拟南芥中SnRK2家族蛋白激酶OST1(SnRK2.6)作用于NADPH氧化酶AtrbohF,催化胞外活性氧产生,放大ROS信号,引起ROS介导的信号级联反应[16]。那么,水稻中这些SAPKs与OsRbohs在ABA信号转导中是否共同参与调节ABA诱导的H2O2的产生?本试验中,在SAPKs-OE、OsRbohs-OE原生质体中H2O2的荧光强度均上调,且ABA处理后上调趋势进一步增强;在ds-SAPKs、ds-OsRbohs原生质体中H2O2的荧光强度显著下降,ABA诱导的H2O2反而被抑制。与单独过表达SAPKs或OsRbohs相比,过表达SAPKs且沉默OsRbohs的原生质体以及过表达OsRbohs且沉默SAPKs的原生质体中H2O2产生均显著降低,ABA诱导的H2O2反而被阻止。这些结果表明:在ABA信号转导中,处于激活状态的SAPK9/10与OsRbohB/E相互作用,使NADPH氧化酶活性升高,进而诱导H2O2的积累。

综上所述,本试验证实SAPK8/9/10与OsRbohB以及OsRbohE在体内、外存在相互作用,OsRbohs是SAPKs磷酸化的底物,SAPKs与OsRbohs协同调节ABA诱导的H2O2产生。因此,我们推测在水稻ABA响应干旱胁迫产生H2O2的过程中可能存在这样一条通路,即干旱诱导的ABA积累激活SAPKs,活化的SAPKs磷酸化OsRbohs,进而诱导H2O2的产生。本文为进一步研究ABA信号通路在植物响应干旱胁迫的作用机制中提供了理论依据。然而,OsRbohs作为SAPKs磷酸化的底物,其磷酸化位点还需进一步的研究来证实。此外,ABA信号通路中SAPKs与OsRbohs是通过单独互作还是协同互作在ABA诱导H2O2产生过程中发挥作用,这也是之后研究中需要进一步解决的问题。

参考文献References:

1.2.1　酵母双杂交试验　根据SAPK8/9/10基因序列与pGDKT7图谱以NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点构建SAPK8/9/10-pGBKT7诱饵载体,根据OsRbohB/E基因序列与pGADT7图谱构建OsRbohB/E-pGADT7靶蛋白载体。用ProQuest酵母双杂交系统(Invitrogen)分别转化酵母Y2和Y187细胞,在SD-Leu/-Trp 或者SD-Trp/-Leu/-His上融合培养。以加入X-α-gal的SD-Trp培养基培养pGBKT7空载、SAPK8/9/10-pG-BKT7单菌落的涂布,以验证SAPK8-10自激活作用。

作为时代发展的主题，创新这个概念在很多领域都被奉为永恒发展的真谛。在以往的小学信息技术教学中，教师应用传统小学信息教学模式存在轻实践、重理论的弊端，这种教学模式在提升学生实践能力和学习效率方面很难发挥出良好的作用。另外，单一地理论化信息技术教学，会促使学生感觉相关知识和教学内容更加抽象，徒然增加学生的理解和学习难度，还会严重影响学生对信息技术的兴趣。创新小学信息技术教育，可以改善传统教学模式存在弊端，提升小学信息技术教学效率。

蔗糖非酵解型蛋白激酶(sucrose non-fermenting 1-related protein kinase,SnRK)是广泛存在于植物中的一类Ser/Thr类蛋白激酶,在植物抵抗逆境胁迫过程中发挥了重要作用[12-13]。依据基因结构及蛋白质序列同源性进行分析,植物SnRK相关蛋白激酶基因家族可以分为SnRK1、SnRK2和SnRK3共3个家族,其中SnRK2家族主要在植物响应ABA信号和抗逆信号转导中发挥重要的调节作用[14]。拟南芥中SnRK2家族的OST1(SnRK2.6)已被证实作用于产生ROS的上游[15]。OST1已经被显示能够直接与NADPH氧化酶中的AtrbohF互作,磷酸化AtrbohF的Ser13和Ser174[16],然而这种磷酸化的生理重要性还没有被证实。水稻基因组中包含10个SnRK2成员,依次被命名为SAPK1～SAPK10,但只有与OST1同源的SAPK8、SAPK9和SAPK10激酶活性可被ABA诱导上调[17]。然而,水稻中这些SnRK2激酶与Osrbohs的关系及其在ABA诱导的H2O2产生中的作用尚有待证实。因此,本研究利用酵母双杂交、双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)、谷胱苷肽巯基转移酶下拉试验(glutathione S-transferase pull down,GST-pull down)以及体外磷酸化技术,分析了水稻中SAPK8/9/10与OsRbohB和OsRbohE在体内、外的相互作用关系;同时通过水稻原生质体瞬时表达体系研究了这些SAPK与OsRboh在 ABA诱导H2O2产生中的作用。

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忽听一人道：“大哥，既然说到公事，现在公事未完，怎可你先来？还是大哥殿后，我先来。”只见摄魂寅客李双岱抢步上前，迅速来到牌坊下，亮出兵器。让秦铁崖诧异的是，李双岱所使的却不是佩刀。

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我们经常说，教学要盘活各种教育资源。小学生形象思维较为活跃，抽象思维还未发展成熟，因此生活经验作为教学资源在小学数学教学过程中就显得尤为重要。小学生的年龄特点决定了他们学习的好奇心，加深数学与生活经验的联系，将数学知识指导于生活实践，不仅可以发展学生的思维，而且使学生感到“数学有味”“数学有趣”“数学有理”“数学有用”，从而增强学生学习数学的自信心，让学生学会利用自己的生活经验去感受数学的真实价值，那将也是数学教学中的一件愉快的事。

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初中生的情感体验不够丰富，对未来世界充满了好奇心和探究心理。在美术中渗透情感教育直接会对初中生的人生价值观产生很大的影响，关系到他们将来看待事物和问题的心态、思路以及角度。因此在渗透情感教育的时候老师需要以身作则，为学生树立一个正面的榜样，并且加强在课上的师生互动，以便随时了解每个学生的情感动态，促进师生关系和谐，帮助学生健康发展。

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1.2.2　双分子荧光互补(BiFC)试验　根据SAPK8/9/10与OsRbohB/E序列以及pSPYNE、pSPYCE质粒载体图谱,构建SAPK8/9/10-YFPN与OsRbohB-YFPC组合,SAPK8/9/10-YFPC与OsRbohE-YFPN组合的质粒载体组合,并设置对照组,利用基因枪轰击洋葱表皮,25 ℃培养16 h后于激光共聚焦显微镜下观察黄色荧光[18]。

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1.要正确把握教学起点和课堂容量。教学起点应是绝大部分学生能够达到的，不能盲目拔高；例如大纲在词汇要求上分为四会、三会和二会，在语法要求上分为理解、掌握和运用，这些都是教师把握教学起点的依据。课堂容量也应适度，容量太大或太小都会影响课堂教学效果。许多心理学家和语言学家提出的“Comprehensible input(i+1)”，都肯定了输入语言信息要合理性、针对性。调查表明，34%的学生认为，初中与高中最大区别是课堂上，高中要求记大量笔记，教学内容多；50%的学生认为，高中英语课难度大，听课吃力。可见教学起点过高和课堂容量过多是造成学生不适应的主要因素。

祝国寺的管理工作有很多方面。首先根据相关标准和条件，选配小寺小庙领导班子和管理人员，有了管理团队，还要建立“四公开一监督”的制度，并对这些分散各地的寺庙进行监督、检查。

[26]　　　Santiago J,Rodrigues A,Saez A,et al. Modulation of drought resistance by the abscisic acid receptor PYL5 through inhibition of clade A PP2Cs[J]. Plant J,2009,60:575-588.

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[30]　　　Sato A,Sato Y,Fukao Y,et al. Threonine at position 306 of the KAT1 potassium channel is essential for channel activity and is a target site for ABA-activated SnRK2/OST1/SnRK2.6 protein kinase[J]. Biochem J,2009,424:439-448.

在化肥施用上，应以氮、磷为主，其中氮肥占总施肥量的60%、磷肥占80%、钾肥占20%。具体来说，亩施尿素31.4 kg、过磷酸钙96 kg、硫酸钾8.7 kg，或二铵25 kg、尿素21.6 kg，配施生物菌肥 50～60 kg。