罗丹明B，也称玫瑰红B，是由邻苯二甲酐和间羟基二乙基苯胺缩合而成的三苯甲烷类染料，易溶于水和乙醇等，具有红艳的色泽和稳定性强等特点，主要应用于皮革、造纸、织物、瓷器等染色［1］。相关资料表明，罗丹明B具有潜在致癌作用，可能诱变或致畸［2-3］。但因罗丹明B具有价格低、稳定性强、颜色艳丽，一些不法商贩违法在调味品或辣椒中使用，以达到增加食品外观鲜艳度的效果，且严禁不止。目前，欧盟等国已禁止在食品加工过程中使用罗丹明B［4］，2008年我国卫生部也将其列入了第一批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》。

目前检测罗丹明B的方法主要有：液相色谱-荧光法、液相色谱-紫外法、液相色谱-串联质谱法等。含辣椒制品样品前处理方法主要有：微波辅助萃取法、液-液萃取法、固相萃取法及凝胶渗透色谱净化法［5］等。本研究应用全在线凝胶净化色谱-高效液相色谱-串联质谱法测定辣椒油中罗丹明B。辣椒油样品基质复杂，含有大量的油脂、色素等大分子成分，凝胶渗透色谱对去除样品基质中的油脂、色素等大分子干扰物质非常有效。液相色谱—串联质谱仪应用于食品分析时，具有重复性好、检出限低、抗干扰能力强的优点，而全在线GPC-EVA（定量浓缩） -HPLC-MS/MS联机系统是将凝胶渗透色谱和液相色谱-串联质谱仪进行联机的平台，同时具有两种仪器的优点，在一套系统上能够完成浓缩、净化、定容、上机的全部过程，从而进一步增强了系统的适用性、提高了检测效率、回收率和灵敏度，进一步减少了前处理过程中试剂的大量使用、减少了人工操作步骤和检测人员在实验区域的工作时间、减少了试剂对实验人员造成的潜在危害。

1 材料与方法

1.1 仪器设备与材料

1.1.1 仪器设备

随着信息化教学及物联网水平提高，多媒体等现代化教学设备逐渐普及，良好教学设备的引入，使得广大教师借助于现代高效的教学手段，在提升教学效率的同时，也增强了教师教学的积极性与主动性，这是新时代下教学手段现代化发展需要。

Freestyle全在线凝胶净化/定量浓缩联机系统（德国Lctech公司），安捷伦6410 B三重串联四极杆质谱仪（配有电喷雾离子源），安捷伦1200 SL型液相色谱仪（美国安捷伦公司）。

在上述质谱和色谱条件下，得到罗丹明B标准溶液（10 ng/mL） 的色谱图（见图4）。由图4可知，罗丹明B的保留时间为2.6 min左右。

罗丹明B标准品：CAS81-88-9，纯度≥95.0%，购自德国Dr.Ehrenstorfer GmbH公司。

运用紫外检测器，根据紫外谱图，由罗丹明B标准样品的保留时间来确定目标物收集开始和结束的时间，同时进行样品溶液加标试验，确定目标物的流出时间段为19～27 min，见图1。

实验材料为辣椒油。

1.2 色谱和质谱分析条件

1.2.1 色谱分析条件

色谱柱：Poroshell 120 SB-Aq柱，（2.7μm，50 mm×2.1 mm），流动相为乙腈（A） 和水（B：含有0.1%甲酸），梯度洗脱方式洗脱，洗脱条件见表1，流速：0.3 mL/min，柱温：40℃；进样量：10μL。

 

表1 罗丹明B的梯度洗脱参数

  

时间/min 流动相/（A%） 流动相/（B%）0 2 5 6 50 90 90 50 50 10 10 50

1.2.2 质谱分析条件

离子源为电喷雾离子源（ESI＋）；检测方式为多反应监测；离子源温度350℃；雾化气压力206.85 kPa。多反应监测参数见表2。

 

表2 质谱多反应监测实验条件

  

注：*为定量子离子

 

分析物 母离子 子离子 碎裂电压/V 碰撞气能量/eV 驻留时间/s罗丹明B 44335510050200 443399*10050200

1.2.3 凝胶渗透色谱条件

准确称取辣椒油样品1.00 g至10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯-环己烷=1∶1（V∶V） 定容至刻度，摇匀后转移至16 mLGPC进样瓶中（根据实际样品情况必要时需过滤），待上在线凝胶色谱及质谱分析。将16 mL前处理瓶放入在线凝胶净化系统样品盘架上，按照设定的在线方法进行样品前处理及HPLC-MS/MS分析。

1.3 样品的前处理

净化柱：400 mm×25 mm，内装BIO-Beads SX3，200～400目填料；流动相：乙酸乙酯-环己烷=1∶1 （V∶V） )；定量环：5 mL；流速：5 mL/min；进样瓶：10 mL；收集瓶：1 mL；在线方法：GPCEVA-HPLC-MS/MS，即凝胶净化-浓缩-高效液相色谱/串联质谱进样；第一步GPC净化，设置弃去、收集和冲洗时间分别为18、10、15 min；第二步浓缩设定为蒸干，用1 mL甲醇定容，设定EVA真空度为1.80 kPa；第三部HPLC-MS/MS分析。将以上三步方法进行联机，建立完整的GPC-EVAHPLC-MS/MS方法，直接进样即可。

在大数据时代下，电力行业虽然取得了显著的发展，但在其发展过程中也存在着一系列的问题。就目前而言，在电网规划体系中主要存在以下问题，具体分析如下：

2 结果与讨论

2.1 样品前处理及净化条件的优化

2.1.1 提取溶剂的选择及优化

由于辣椒油能直接溶解于GPC的流动相乙酸乙酯-环己烷=1∶1（V∶V），故只需将辣椒油样品直接溶解，根据样品实际情况，必要时过滤或者过微孔滤膜后，待上在线凝胶色谱及质谱分析。

将经GPC净化后的提取液浓缩，设定方法为甲醇定容至1 mL，可直接在线HPLC-MS/MS进样0.1 mL，另外0.9 mL收集于1 mL样品瓶中，以备复检使用。

江豚与大熊猫一样憨态可掬，吻部短而阔，看起来就像一直在微笑。2006年，中科院水生生物研究所科考时发现，长江江豚有1800头左右，其中1000多头生活在长江干流。到了2012年，江豚数量锐减至1000头。2013年，世界自然保护联盟红色名录将长江江豚定为“极度濒危”物种。

因为是GPC流动相直接溶解样品，故设定在线方法为GPC-EVA-HPLC-MS/MS。

乙酸乙酯、甲醇、环己烷，均为色谱纯（购自Merck公司），实验用水为自制超纯水。

  

图1 罗丹明B标准品在凝胶色谱柱上的流出曲线图

考虑到样品的净化效果和对回收率的影响，设置弃去、收集和冲洗时间分别为18、10和15 min。使用此条件，得到的色谱图基质干扰较小，取得了较好的净化效果，同时可满足仪器的检测要求，得到了理想的回收率。

2.1.2 在线方法的选择

利用罗丹明B标准溶液（浓度为1μg/mL） 单针进样，在ESI＋下进行Q1扫描，得到罗丹明B的准分子离子峰，再以峰度高的准分子离子m/z443.0为母离子进行子离子扫描，见图2。根据得到的二级质谱图，确定定量离子对m/z 443.0＞399.2和定性离子对m/z 443.0＞355.1。再反复优化驻留时间、碰撞气能量、碎裂电压仪器等参数，使分子离子与子离子强度达到最大，最终确定最佳质谱参数。得到罗丹明B的多反应监测质谱图，见图3。

2.2 质谱的定性及质谱条件的优化

(2)在是否成立创业学院(或创新创业中心)方面，省属公办本科高校和省属民办本科高校以及省属公办高职高专学校做的较好，而省属独立学院和省属民办高等职业学校做的不好，反映了这些学校对这方面不太重视。

总之，专业课教学中的案例直观、易懂，能够调动学生学习主动性，培养临床思维和实践能力，因此受到专业课教师的广泛推崇，而案例编写是制约情景模拟教学效果的关键。为保证学生在情景教学中获得成功体验，教师应遵循规范化的病例编写过程，注重结合学生已有知识和技能，将课堂知识传播由静态变为动态、平面变为立体、被动变为主动，以一种全新的学习方式构建知识体系。

社会合作方，优选PPP项目运营经验丰富的国企、央企和实力较强的民营企业。高度关注 PPP 项目建成风险和运营维护风险，对于属于“跨界经营”的社会合作方，应有社会资本方提供连带责任担保、抵质押担保，或提供强约束的差额补足、流动性支持等。

  

图2 罗丹明B子离子扫描图

1.1.2 试剂材料

党的十八大以来，江西始终把生态文明建设作为重要民生工程，健全教育宣传机制，培育生态环保意识，倡导绿色消费、低碳生活，初步形成生态文明理念广泛认同、生态文明建设广泛参与、生态文明成果广泛共享的良好局面。

2.3 方法学论证

2.3.1 标准曲线的制作

吴耕却是浑浑噩噩地立着，只知来到万花谷，一时欢喜，又为自己听不见说不出而着急，双眼里又急又惧。黑衣人走上前，伸出手掌贴在他丹田上，运力替他烘干衣服，收手搭在吴耕的手腕间探看他的脉息，也不由得微微叹气，右手戟指急点，厥阴指、少阳指、少明指、商阳指、太阴指、阳明指诸式兔起骰落，又挥手将在一边探头探脑的鲲招过来。

选用不含罗丹明B的空白辣椒油类样品，按1.3节方法制备空白基质液，并分别添加标准溶液，配制成浓度分别为1、2、5、10、20、50 ng/mL的基质标准液，依次进样测定。以罗丹明B定量离子峰面积（Y）为纵坐标，标样浓度（X，ng/mL） 为横坐标，绘制标准曲线，得到线性方程

 

2.3.2 回收率和检出限

选用不含罗丹明B的空白辣椒油类样品进行添加回收率和精密度试验。空白辣椒油样品中添加1.0、5.0、10.0μg/kg共3个含量的罗丹明B标准溶液，按照建立的GPC-EVA-HPLC-MS/MS全在线方法上机测定，计算各加标样品的回收率和精密度。结果表明（见表3），在添加浓度1.0～10.0μg/kg范围内，罗丹明B的回收率为85.75%～90.93%；精密度为0.89%～2.33%。

  

图3 罗丹明B的MRM色谱图

  

图4 罗丹明B标准溶液（10 ng/mL）色谱图

 

表3 空白油类样品中罗丹明B的添加回收率与精密度（n=4）

  

样品添加浓度/(μg/kg)水平1/（μg/kg）第一天 第二天（μg/kg） 精密度/% 水平1/（μg/kg）水平2/水平2/（μg/kg） 精密度 /%四次平均值回收率/%1 5 1 0 0.86 4.45 9.08 0.85 4.49 9.20 1.17 0.89 1.31 0.85 4.44 9.09 0.87 4.50 9.00 2.33 1.34 1.00 0.857 4.47 9.09 85.75 89.40 90.93

按公式

 

再结合实际添及仪器响应情况，最终确定本方法测定罗丹明B的最低检出限为1μg/kg。

3 结论

本文通过辣椒油直接溶解进样，成功建立了全在线凝胶渗透色谱净化-高效液相色谱-串联质谱分析辣椒油中罗丹明B的方法。本方法对排除辣椒油基质的干扰效果明显，整个过程全自动化，灵敏度高、重复性好。实验表明：本方法检出限1 μg/kg，1～10 μg/kg浓度范围内加标回收率达85.75%～90.93%，由此可见，在1～10μg/kg样品浓度加标下，全在线GPC-EVA-HPLC-MS/MS法测定辣椒油中罗丹明B完全适用于辣椒油这类复杂基质

我最近还遇到了一种情况，当时我正在用一部不同的相机拍摄肖像，开启了提示音，我把它关掉了，但专业模式要求我再次开启提示音：这有助于她了解我将会在何时拍摄照片。

以空白辣椒油样品的3倍信噪比的方法，确定本方法测定罗丹明B的检出限。经测定，空白辣椒油类样品加标浓度为5μg/g的信噪比约为15.2(见图5)。中罗丹明B的定性和定量分析。对于在食品安全领域公平公正、准确的检测和保障人民的饮食健康和国家安全具有重要的现实意义。

  

图5 空白油类样品加标(5μg/kg)色谱图

参考文献：

［1］ AHLSTROM L H，ESKILSSON C S，BJORKLUND E.Determination of banned azo dyesin consumer goods ［J］.Trends in Analytical Chemistry，2005，24 （1）：49-56.

［2］尹峰，丁召伟.杨志坚固相萃取—高效液相色谱—串联质谱法检测香辛料中罗丹 B［J］.色谱，2012，30（7）：672-676.

［3］孙磊龙，杨志华.高效液相色谱测定食品中的罗丹明B［J］.中国卫生检验杂志，2011，21（7）：1648-1649.

［4］杨桂玲，孟冰冰，于林，等.液相色谱串联质谱法检测辣椒制品中罗丹明B的含量 ［J］.中国调味品，2013，38（5）：108-120.

［5］徐声乐，王兴，刘金萍，等.罗丹明B及其在食品中检测方法研究进展 ［J］.食品研究与开发，2015，36（17）：136-139.