X连锁凋亡抑制蛋白 （X—linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）是细胞凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis,IAP）家族的主要成员之一，是IAP家族中最有效的内源性caspase抑制因子[1]。XIAP可通过多种途径调节细胞凋亡，如调节受体介导的信号转导和蛋白泛素化等。XIAP在正常口腔黏膜角化细胞中的表达水平很低，但在口腔鳞癌细胞系中的表达显著增强[2]。有关XIAP基因在口腔黏膜鳞癌形成过程中及对患者预后所起的作用,国内外相关报道较少。本实验通过小样本回顾性研究，运用免疫组织化学方法检测口腔鳞癌组织标本中XIAP的表达情况，初步评估其表达水平与口腔鳞癌患者临床病理因素及预后之间的关系，寻找与口腔鳞癌发生发展的相关基因。

1 资料和方法

1.1 临床资料

收集2008—2013年期间，在江苏大学附属医院口腔颌面外科，经活检后病理确诊为口腔鳞癌病例52例，所有病例均有术后蜡块。其中男性33例,女性19例，年龄24～77岁，平均年龄47岁。根据口腔鳞状细胞癌的病理分级，高分化35例，中等分化14例，低分化3例。所有组织标本均使用4%甲醛溶液固定,然后进行石蜡包埋，5 μm厚度连续切片。

1.2 XIAP蛋白的检测

1.2.1 试剂及方法 即用型鼠抗人XIAP单抗 （购自美国BD公司），抗体浓度参照课题组前期实验结果[3]。按SP法进行免疫组织化学染色，DAB显色，苏木精衬染，常规脱水、透明、封片。阴性对照组使用PBS代替一抗。

（1）通过问卷调查了解实验班对标准化沟通训练的看法。结果显示，护生对该教学方法满意度较高，认为能够提高沟通能力和学习积极性（见表1）。

1.2.2 结果判读 所有病理切片均经2位病理专家进行读片，每张病理切片使用高倍显微镜随机选取10个视野进行观察，以切片中口腔鳞癌细胞出现明确的胞浆着色记为XIAP阳性，阳性细胞百分率为阳性细胞数和所计癌细胞总数的比值。阳性病例的确定标准[3]：肿瘤组织中未出现阳性表达或≤30%为低表达（阴性，记为-），阳性细胞百分率＞30%为高表达（阳性，记为+）。

对52例患者5年总生存和无病生存曲线进行分析时发现，XIAP的表达水平与患者总生存率（P=0.003）和无病生存率（P=0.01）均显著相关，提示XIAP的表达水平可以作为判断口腔鳞癌患者预后的一个预测因子（图2、图3）。

1.3 统计分析

XIAP蛋白的表达主要定位于细胞胞浆（图1），被检测的52例标本中阳性14例（27%）。XIAP表达水平在各标本中有较大差异，为5%～90%不等。对XIAP表达水平与各临床参数进行统计学分析，发现不同病理分级的癌组织，其XIAP的表达水平有统计学意义 （P=0.023），即低分化的癌组织中XIAP表达较高，与课题组前期研究结果一致。肿瘤临床分期、性别、年龄与XIAP的表达无相关性，同时发现，XIAP的表达与患者的吸烟史、饮酒史无关（表 1）。

2 结果

2.1 口腔鳞状细胞癌组织中XIAP的表达

所有数据均使用SPSS 17.0软件包进行统计学分析，XIAP表达与各临床参数的关系使用nonparametric秩和检验方法进行分析，P＜0.05为有统计学意义。

  

图1 免疫组化染色显示XIAP在口腔鳞癌组织中的表达(×400)A：阴性对照；B：弱阳性；C：强阳性Figure 1 Immunohistochemical expression of XIAP in OSCC(×400)A:Negative expression;B:Weak reaction;C:The highest reaction

2.2 XIAP表达与患者预后的关系

2.3.4 响应面模型验证。根据所得到的模型，预测最佳提取工艺条件为提取温度77.04 ℃、提取时间137.91 min、液料比27.33∶1，在该条件下GASP提取率的理论值可达2.76%。考虑到试验的实际操作性，将提取条件修正为提取温度77 ℃、提取时间138 min、液料比27∶1。试验重复3次，所得GASP实际提取率为2.57%±0.05%，该结果与理论值较为吻合。

3 讨论

IAP为一类高度保守的抗凋亡基因家族,主要成 员 包 括 ：c-IAPl、c-lAP2，NAIP、XIAP、Ts-IAP、Apollon、Survivin、Livin。其抗凋亡机制主要通过抑制caspase活性,调节肿瘤坏死因子（TNF）介导的信号转导来发挥抗细胞凋亡作用[4]。 XIAP作为IAP家族的主要成员之一，可能参与了肿瘤的发生发展，并与肿瘤的耐药相关[5-8]。Zhou等[9]证实XIAP能促进肿瘤的发生。XIAP在正常组织中低表达，而在多种恶性肿瘤中表达明显升高[10]，认为 XIAP可能在细胞的增殖过程以及向肿瘤的恶性转化过程中发挥重要作用，同时也参与了肿瘤的局部淋巴结转移。

 

表1 XIAP表达与患者临床病理的关系（例）Table 1 The correlations between XIAP expression and patient characteristics(cases)

  

项目 XIAP表达阴性(n=38)阳性(n=14) P值性别 男 26 7 0.221女12 7年龄 <60 23 9 0.805≥60 15 5临床分期 Ⅰ 3 0 0.680Ⅱ4 4Ⅲ11 4Ⅳ20 6病理分级 高分化 24 11 0.023中分化 11 3低分化 3 0吸烟史 是 17 5 0.559否21 9饮酒史 是 14 6 0.693否24 8

  

图2 XIAP表达与无病生存时间曲线（P＜0.05）Figure 2 XIAP expression and DFS （P＜0.05）

XIAP在口腔组织中的表达具有特异性。高文信等[2]证明XIAP在正常口腔黏膜角化细胞中的表达很低，但在舌鳞癌细胞系中的表达显著增强。Hoch等[5]发现从多形性腺瘤（PA）发展到多形性腺癌(CXPA)的病变过程中，癌细胞中XIAP的表达显著增加。这些研究表明XIAP在口腔恶性肿瘤的发生发展中可能起重要作用。我们的前期研究证实，XIAP基因口腔鳞癌顺铂耐药密切相关，其高表达促进了肿瘤细胞的耐药性，沉默XIAP的表达，能显著增强口腔鳞癌细胞系对药物的敏感性[3]。

近年来，越来越多的研究证实IAP家族成员的表达水平与肿瘤患者的预后相关，IAP家族成员高表达，患者预后较差[6-8]。我们的前期研究证实，在接受了化疗的晚期头颈鳞癌病人中，XIAP高表达的病人预后较差，对于接受了化疗的病人，其预后的影响因素可能是XIAP高表达，也可能是化疗本身的影响，需在非化疗病人中进一步确证[3]。Ren等[11]研究发现XIAP表达与鼻咽癌患者预后相关，其高表达是鼻咽癌患者预后的一个高危因素。有研究证实XIAP是结肠癌和甲状腺癌患者预后的一个独立预测因子[12-13]。我们的研究结果发现XIAP的表达水平与患者总生存率 （P=0.003）和无病生存率（P=0.01）均显著相关，提示XIAP的表达水平可以作为判断口腔鳞癌患者预后的一个预测因子。

  

图3 XIAP表达与总生存时间曲线（P＜0.05）Figure 3 XIAP expression and OS（P＜0.05）

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周平等[14]发现XIAP表达水平与肝癌的分化程度相关。我们前期曾报道IAP家族主要成员CIAP1和Livin均与口腔鳞癌的病理分化程度相关[6,15]。我们的研究结果显示，XIAP的表达主要定位于胞质，在不同组织样本之间表达差别较大。XIAP在口腔鳞癌组织中的表达与口腔鳞癌的病理分级密切相关，但与临床分期、性别、年龄等无关。提示IAP家族的抗凋亡特性可能参与了肿瘤细胞分化。

在本研究中，由于纳入研究的样本量偏少，我们并没有观察到性别、年龄、吸烟史和饮酒史等临床参数与XIAP蛋白表达的相关性，可能由于样本量偏少对这些临床参数的统计产生影响。由于实验条件所限，缺乏在新鲜的组织标本中检测XIAP蛋白的表达，仅进行了少量样本的回顾性研究。为了增加实验的准确性和可靠性，需要进一步在新鲜的组织标本中对XIAP进行定量分析，以进一步明确XIAP在口腔鳞癌组织中的表达率。有关XIAP影响口腔鳞癌预后，促进口腔鳞癌发生的机制研究，值得进一步探究。

总之，本研究发现，XIAP的表达与口腔鳞状细胞癌的细胞分化程度密切相关，提示其可能促进了口腔鳞状细胞癌的发生发展。同时，XIAP的表达与患者的预后密切相关，或许可以做为判断患者预后的一个指标。XIAP促进口腔鳞癌发生发展的机制值得进一步深入研究。

2.3.3 空间环复。通过交通流线的设计，使得游览路线不断曲折回环，增加游览的时间，园内的景色也是逐渐呈现的，获得小中见大的园林空间体验。

参考文献：

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apoptosis protein family (IAPs):an emerging therapeutic

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