排脓散出自于《金匮要略》，由枳实、芍药和桔梗3味中药按3∶3∶1的配伍比例组成，具有排脓化毒、止痛、调理气血之功效，临床用于疮痈、肠痈等症的治疗[1]。目前关于排脓散提取工艺的研究报道较少，本试验选取排脓散中3个指标性成分柚皮苷、新陈皮苷、芍药苷的含量结合出膏率作为考察指标，采用Box-Behnken响应面法优化排脓散水提工艺，优选排脓散水提取工艺的最佳工艺参数，为本方的进一步开发研究提供借鉴。

1 材料

1.1 仪器 LC-20ADXR液相色谱仪：日本岛津仪器有限公司；电子天平(型号：PA1004B)：上海越平科学仪器有限公司；数显恒温水浴锅(型号：WB-2000)：郑州长城科工贸有限公司；数控超声波清洗器(型号：KQ2200)：江苏省昆山市超声仪器有限公司； CP2250分析天平(精度：0.01 mg)：奥豪斯国际贸易有限公司。

1.2 试剂与药材 柚皮苷对照品(批号 110722-201613)、新橙皮苷对照品(批号 111857-201102)、芍药苷对照品(批号 110736-201539)：中国食品药品检定研究院；枳实(批号 1612013183)、白芍(批号 1608018158)药材购于安徽省中医院，桔梗(批号 1611016176)药材购于安徽省安庆华氏中药饮片公司，按2015版《中华人民共和国药典》含量测定法检测，均符合要求；Milli-Q一体式超纯水机(美国Milipore公司)；甲醇(≥99.9%，批号 Me-12760216)、乙腈(≥99.9%，批号 AC-12960217)：瑞典Oceanpak公司。

2 方法与结果

2.1 指标成分的含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称定柚皮苷4.32 mg、新橙皮苷1.46 mg、芍药苷12.33 mg，分别加入甲醇溶解并定容至2 mL量瓶中，分别精密移取各对照品溶液适量混匀，加甲醇稀释制成含柚皮苷86.4 μg/mL、新橙皮苷43.8 μg/mL、芍药苷86 μg/mL的混合对照品溶液。

2.3.1 线性关系考察 分别精密量取“2.1.1”项下混合对照品溶液适量于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，制成柚皮苷浓度分别为86.4、43.2、21.6、10.8、5.4、2.7 μg/mL，新橙皮苷浓度分别为43.8、21.9、10.95、5.475、2.737 5、1.368 8 μg/mL，芍药苷浓度分别为86、43、21.5、10.75、5.375、2.687 5 μg/mL的一系列混合对照品溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过。按“2.2”项下方法进行测定。以进样量(x)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标，绘制标准曲线，分别得到柚皮苷、新橙皮苷和芍药苷的回归方程：y柚皮苷=25 235x-12 013(r=0.999 5)，y新陈皮苷=23 702x-5 000.7(r=0.999 5)，y芍药苷=16 661x-18 964(r=0.999 6)，表明柚皮苷进样量在0.05～1.73 μg，新橙皮苷进样量在0.03～0.88 μg，芍药苷进样量在0.05～1.72 μg范围内与峰面积的线性关系良好。

2.1.2 供试品溶液的制备 按处方比例称取中药饮片35 g，以水为提取溶剂，根据Box-Behnken试验设计表(见表1)回流提取，每次提取后滤过，合并滤液，浓缩定容至100 mL，精密量取5 mL，用纯水定容至25 mL，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得各提取液的供试品溶液。

表1 Box-Behnken试验因素及水平

因素水平-10+1x1060120x281216x3406080

2.2 色谱及检测条件 色谱柱：Kromasil 100-5 C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)；梯度洗脱程序：0～12 min，15%～20%(A)；12～15 min，20%～25%(A)；15～18 min，25%～20%(A)；18～21 min，20%～15%(A)；流速：1.0 mL/min；检测波长：283 nm(测定柚皮苷、新橙皮苷)，230 nm(测定芍药苷)；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。在上述色谱条件下，理论塔板数大于3 000，各指标成分与其他成分的吸收峰达到良好分离，分离度大于1.5。色谱图见图1。

图1 空白甲醇(A)、混合对照品(B)、供试品(C)的高效液相色谱图(1.芍药苷；2.柚皮苷；3.新橙皮苷)

2.3.4 重复性试验 按处方比例称取药材6份，每份35 g，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，依次进样，记录色谱图。计算柚皮苷的峰面积RSD为1.20%，新橙皮苷的峰面积RSD为1.29%，芍药苷的峰面积RSD为1.35%，表明该方法重复性良好。

教学名师培养要与教育教学改革相结合，注重教学内容、教学方法与教学手段的改革，争取高水平教学成果奖。同时，注重将教改成果有效转化。例如，自治区级重大教改项目《创新实践型艺术人才培养体系的研究与实践》，已纳入学校人才培养的顶层设计，有组织有计划地实施。

国内储罐火灾情况下不对油品进行导出处理，只是停止一切收发油品作业，防止油蒸气遇到明火发生更大火情。一般方法是将着火油罐的收油和发油阀门关闭，隔断事故储罐与相连工艺设施，断绝着火罐的油量补充，为集中力量扑灭着火油罐创造良好条件。在火势熄灭和罐体冷却后将油品导出，在检测剩余油品是否可回收再利用后，转至其他油罐或将油品注入管道输送。

2.5.1 设计方案 以水为提取溶剂，以料液比(x1)、提取时间(x2)、提取温度(x3)3个考察因素，以柚皮苷(y1)、新橙皮苷(y2)、芍药苷(y3)及浸膏得率(y4)为评价指标，采用Box-Behnken响应面优化提取工艺，考虑提取次数为非连续型变量，回归处理较困难，因此固定提取次数为2次。试验结果见表2。

2.4 出膏率的测定 精密吸取供试品溶液20 mL，置已干燥至恒质量的蒸发皿中，水浴蒸干，于真空干燥箱中烘干至恒质量，取出，移置干燥器中，冷却，迅速称质量，计算出膏率。

2.3.3 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液6份，分别放置0、2、4、6、8、12、24、36 h后进样。计算柚皮苷的峰面积RSD为0.50%，新橙皮苷的峰面积RSD为0.67%，芍药苷的峰面积RSD为0.31%。结果表明供试品溶液在36 h内稳定。

2.3 方法学考察

沃尔顿链[10]是一个结合硬件的IoT应用项目，考虑了IoT数据的产生和管理问题。该团队开发出了区块链读写器，可以把标签数据的哈希值通过读写器直接写入区块链中。同时读写器与标签具有双向认证的功能，可以确保数据的来源是经过认证的。对于数据量较大的问题，该团队构思了跨链架构，希望该架构能承载众多不同形态、不同应用场景的子链。该项目的跨链思路还需要实践检验。

2.3.5 加样回收率试验 精密吸取已知含量的样品6份，分别精密加入一定量的柚皮苷、新橙皮苷、芍药苷对照品溶液，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样，测定。柚皮苷平均回收率为102.6%，RSD为2.24%；新橙皮苷平均回收率为101.4%，RSD为1.98%；芍药苷平均回收率为103.9%，RSD为2.16%。结果表明本方法回收率良好。

1.5.3 初烤烟叶外观质量评价。各重复合并后随机选20片(3个重复6∶7∶7)进行外观质量评价，以颜色、成熟度、叶片结构、身份、油分和色度6项指标依据我国现行42级国际为标准进行评定，色度值采用JP61M/ZE6000色度仪测定。依据四川省烟草公司烟叶质量评价体系，对泸州烟叶外观质量进行定量评价。

2.5 Box-Behnken响应面法优化提取工艺

2.3.2 精密度试验 精密吸取“2.1.3”项下混合对照品溶液20 μL，连续进样6次，计算柚皮苷的峰面积RSD为0.13%，新橙皮苷的峰面积RSD为0.12%，芍药苷的峰面积RSD为0.48%，表明仪器精密度良好。

应用Design-Expert 8.0.5软件对OD值进行多元线性回归和二次项拟合,得到浸润时间料液比(x1)、提取时间(x2)、提取温度(x3)与OD值之间的二次多项回归方程：OD值=0.86+0.12x1+0.034x2+0.25x3-0.018x1x2-0.063x1x3+0.030x2x3- 0.23x12-0.065x22-0.17x32。

表2 用于提取工艺优化的Box-Behnken设计结果

编号x1x2x3含量/(mg/g)y1y2y3y4/%总评“归一值”(overalldesirability，OD)1-1-101．121．131．4928．940．4121-101．591．271．5229．990．683-1101．151．251．5630．860．5041101．541．291．5231．430．695-10-11．010．501．1618．570．00610-11．441．141．2923．710．387-1011．781．261．4828．070．6881012．101．221．7626．290．8190-1-11．350．891．3327．140．391001-11．550．651．4628．710．41110-111．791．461．5728．860．78120111．951．521．7030．890．93130001．891．481．6529．530．86140001．861．461．6830．290．87150001．811．441．6829．890．85

注：OD =(d1×d2×…×dn)1/n，n为指标数；di=(yi-ymin)/(ymax-ymin)，yi为实测值，ymin和ymax为某一指标在不同试验中的最小值和最大值

2.5.2 试验结果与数据分析 采用Hassan公式将上述4个指标进行“归一化”处理[2]，得各指标的几何均数OD值。

为了检验融资约束对企业对外直接投资的影响，本文选择OFDI作为被解释变量，企业有投资记录记为1，没有投资记录记为0。

对OD值模型进行方差分析，结果方程决定系数R2=0.994 2，表明该回归模型的拟合情况良好。由二次回归模型方差分析结果(见表3)可知，该模型具有高度显著性(P<0.000 1)，可信度高，失拟项不显著，说明该模型拟合度较好，可以对不同条件下的目标指标进行预测。此外，一项式中x1、x3达到极显著水平(P<0.01)，x2达到显著水平(P<0.05)，x1、x3交互作用显著(P<0.05)。二项式中x12、x32达到极显著水平，x22达到显著水平。

表3 二次回归模型方差分析结果

来源离均差平方和自由度均方F值P值模型0．9490．1094．920．000A0．1210．12109．630．000B9．50×10-319．50×10-38．680．032C0．5110．51461．840．000AB1．28×10-311．28×10-31．170．328AC0．0210．0214．550．012BC3．62×10-313．62×10-33．310．129A20．1910．19173．060．000B20．0210．0214．310．013C20．1010．1095．740．000残差5．48×10-351．10×10-3失拟项5．20×10-331．73×10-312．530．075纯误差2．76×10-421．38×10-4总误差0．9414

2.5.3 响应面优化提取工艺 根据拟合的二次回归模型，采用Design-Expert 8.0.6软件绘制OD值随因素变化的三维曲面图和等高线图，如图2、图3、图4所示。图2显示提取时间为60 min时，浸润时间和料液比对OD值的影响。液料比的最优区域是12～14倍，浸润时间的最优区域是60～90 min。图3显示在料液比为2倍的条件下，浸润时间和提取时间对OD值的影响，浸润时间的最优区域是60～90 min，提取时间的最优区域是64～80 min。图4显示浸润时间在60 min条件下，液料比和提取时间对OD值的影响，料液比的最优区域是12～14倍，提取时间的最优区域是64～80 min。

图2 液料比(x1)和浸润时间(x2)对OD值影响的等高线图(左)与响应面图(右)

图3 浸润时间(x2)和提取时间(x3)对OD值影响的等高线图(左)与响应面图(右)

图4 液料比(x1)和提取时间(x3)对OD值影响的等高线图(左)与响应面图(右)

2.5.4 验证试验 结合二次回归方程，求解得到最佳提取工艺条件为14.85倍水，浸润67.29 min，提取74.03 min。考虑实际生产工艺，求得的最佳工艺条件均取整数，即15倍水，浸润67 min，提取74 min。按上述工艺制备3份样品溶液，测定指标成分含量和出膏率。结果见表4，实测OD值与预测值之间的RSD均小于3%，说明该工艺稳定可靠。同时预测值与实测值偏差较小，表明建立的数学模型预测性较好，可用于筛选出的排脓散水提取工艺。

表4 验证试验结果

编号含量/(mg/g)y1y2y3y4/%实测OD值预测OD值RSD/%11．971．491．7030．850．932．2421．981．511．7331．540．950．960．7431．961．521．7029．980．932．24

3 讨论

排脓散方剂中君药枳实和芍药是常见的药对，现代研究表明，枳实、芍药配伍后发挥散结止痛、缓解痉挛、调节血气作用的主要活性成分是枳实中黄酮类化合物柚皮苷、新橙皮苷，芍药中的芍药苷[3-6]。浸膏是中药药效的物质基础，出膏率的变化往往影响有效成分的含量变化[7]，从而影响中药复方的药效。因此，本实验选取了柚皮苷、新橙皮苷、芍药苷3个活性成分含量与出膏率作为考察指标，并将指标进行归一化处理，得到OD值，避免了中药复方提取工艺研究中单一指标评价提取工艺的片面性，较全面地反映指标成分在整体方剂中的作用。

本试验遵照传统煎服中药复方汤剂的方式，选择水为提取溶剂，回流的方式提取药液，采用高效液相色谱法测定排脓散中柚皮苷、新橙皮苷、芍药苷含量，参考文献[8-10]，考察了乙腈-0.05%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.2%磷酸水、乙腈-0.3%磷酸水共4个流动相系统，综合考虑色谱峰峰形和磷酸酸度对色谱柱的影响，最终选择乙腈-0.1%磷酸水作为流动相。采用Box-Behnken设计优化水提工艺，将数据进行多元二次回归方程拟合，得到因素与响应值之间的函数关系，解决了非连续、多变量函数处理问题，具有精度高、预测性较好的优势[11-12]。该法合理、可行，可为进一步开发利用排脓散提供参考依据。

从时间看，工科新教师培训应该是一项较为长期的过程，至少应有3年左右。但在培训实践中，绝大部分高校将岗前培训、入职培训、职初培训等合并进行，仅仅用三至六个月时间就全部完成，追求“短平快”，忽视培训质量。

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