槲寄生属(Viscum)植物系桑寄生科(Lorantheceae)半寄生常绿灌木，常寄生于梨、榆、杨、山楂、桑、茶、山毛茛、芸香、蔷薇科等植物上，我国大部分地区均有分布[1-3].由于特殊的寄生特性，可吸收寄主的内涵物，其化学成分与寄主密切相关，同时也有其本身的独特活性成分.槲寄生富含三萜类、甾醇类、黄酮类等化合物，其所含丰富的化学成分具有广泛的药理活性，具有祛风湿、补肝肾、强筋骨、养血、安胎、降血压等作用，近年来，在传统药用基础上不断发现其新疗效和新应用，如抗肿瘤、抗癌等作用[4,5].茶寄生是一种寄生在树龄较高的古乔木茶树上的寄生物，形状像小珊瑚，因寄生枝杆节状带毫，故此被称为“螃蟹脚”.梨寄生是寄生在梨树上的寄生物.国内外对槲寄生的研究发展较快，报道较多，而关于茶寄生和梨寄生的研究少见报道.本文对茶寄生和梨寄生中黄酮化合物进行分析，为茶寄生和梨寄生的开发利用提供科学依据.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

实验所用仪器与试剂见表1.

让学生的思维得到发散，是让学生对知识进行多方面的分析与研究，在这个过程中学生的主观能动性得到有效的激发，并在课堂上体现出自身的主体地位，让其成为课堂真正的“主人”。一般来说，传统的填鸭式教育是无法让学生的思维得到发散的，因为教师往往将已经准备好的“知识”，直接填入学生的脑海中，没有知识分解再重组的过程，学生对知识的理解大多停留在表面。我们教师应当认识到传统教学中的弊端，应注重启发性的教学模式。

表1 实验所用仪器与试剂

型号或规格名称生产厂家TU036紫外可见分光光度计美国Varian公司KQ-250B超声波清洗器昆山市超声波仪器有限公司HX-200A高速中药粉碎机浙江省永康溪岸五金药具厂AL204电子天平梅特勒-托利多上海公司202-2A数显电热恒温干燥箱上海阳光实验仪器有限公司分析纯甲醇天津化学试剂有限公司分析纯无水乙醇天津光复科技发展有限公司分析纯丙酮天津光复科技发展有限公司分析纯三氯化铝天津市大茂化学试剂厂标准品槲皮素中国药品生物制品检定所

1.2 样品及样品处理

茶寄生样品：取自福建.

梨寄生样品：取自辽宁鞍山.

分别将两种样品清洗洁净后放入烘箱中，于60 ℃干燥4 h，粉碎后过0.425 mm筛，装入干净的密封袋中备用.

因子分析、聚类分析、相关分析等统计方法，可以直观地反映出各元素之间的关系亲疏程度，能够实现土壤中元素的次生组合[8]。为此，对本区土壤中N、P、Al2O3、SiO2、TFe2O3、K2O、Na2O、Corg、CaO、MgO、B、Mo、Mn、Se、Ge、F、As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn、Sb、pH等元素(指标)进行统计分析，所述如下：

1.3 标准溶液及实验溶液的配制

4.2.2 场地材料的内部循环利用 绿道在规划设计时，挖掘并灵活运用场地废弃材料，针对不同的场地，运用合适的手段进行绿道景观营造，主要体现在线路设计的细节上。在建设过程中，利用场地内较多的构筑物基础作为绿道节点的基础进行改造设计，减少重复建设带来碳排放的同时也增加绿道节点的天然性(图6)；收集湖中造景效果较好的枯木作为绿道小品，可独立成景也可与景石组合成景；此外，在绿道视觉敏感处，将原有的构筑物或湖滩石改造设计，以较低的代价取得较好的景观意境，化腐朽为神奇(图7)。

准确吸取1.3标准储备液0.5 mL，置于10 mL容量瓶中，加1%的三氯化铝溶液，充分混合并定容至刻度，室温下静置10 min，在波长200～800 nm范围内扫描，绘制出其吸收曲线，如图1.

1%三氯化铝溶液配制：准确称取1.756 7 g的AlCl3·6H2O,加水溶解并稀释，置于100 mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，备用.

1.4 黄酮化合物吸收曲线的绘制及测定波长的确定

槲皮素标准品，加乙醇使其溶解稀释，置于50 mL的容量瓶中定容至刻度，得到浓度为400 μg/mL标准品储备液，摇匀，备用.

对于高校实验室污染，不应该是被动地治理，而应是主动地消除，所以首先要形成绿色化学的观念。通过多种形式，加强师生的环保意识，树立正确的科学发展观。比如开设环保选修课、进行环保讲座、开展先进实验室评选活动和知识竞赛等，加大环保宣传力度，营造良好的实验室环保氛围[14]，重视与其他院校的沟通交流，借鉴先进经验，并根据实际情况制定科学有效的实验室废弃物安全管理制度，采取有效的措施做好实验室污染的防治工作。明确实验室环保安全责任，定期进行环保检查，充分调动全体实验人员的责任感，加大环保资金投入，有力地推动实验室环保工作的开展[15]。

图1 标准溶液的吸收光谱图

分别取0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20 mL的1.3槲皮素标准储备液，置于10 mL容量瓶中，用1%的三氯化铝溶液定容，室温放置10 min，以相应试剂为空白，用三波长光谱法测得相应的ΔA值，绘制成标准曲线，得回归方程：ΔA=17.118C+0.020，相关系数r=0.999 8，说明标准溶液在0.008～0.048 mg/mL范围内，ΔA与浓度C呈良好线性关系，可按标准曲线法进行定量分析.标准溶液浓度与吸光度的关系如表2所示.

图2 茶寄生样品的吸收光谱

用1.4的方法配制样品溶液进行稳定性实验，结果表明：样品放置120 min，测得其吸光度值基本不变，说明样品稳定性较好.

标准溶液配制：以槲皮素作测定样品中黄酮化合物含量的标准物质，精确称取0.020 g.

(3) 钢管塔地线挂点位移随地震烈度增大而增大,且从Ⅰ类场地到Ⅳ类场依次增大.钢管塔内最大应力随地震烈度增大而增大,且从Ⅰ类场地到Ⅳ类场依次增大.Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ类场地输电塔内应力最大的单元为塔头处斜材,Ⅳ类场地输电塔内应力最大的单元为中横担上第2节间主材.

图3 梨寄生样品的吸收光谱

2 结果与结论

2.1 标准曲线的绘制

分别称取经1.2处理的样品10.00 g置于250 mL锥形瓶中，用95%的乙醇在20 ℃下，超声波提取25 min，料液比1∶15.抽滤，滤渣重复提取1次，合并滤液，除去溶剂，得浸膏在60 ℃烘箱中干燥至恒重得样品浸膏[6,7].将浸膏用95%乙醇定容至50 mL容量瓶中，摇匀.取其1 mL溶液置10 mL容量瓶中，用1%的三氯化铝溶液定容，摇匀，室温放置10 min，以相应试剂为空白，在200～800 nm范围内扫描，绘制出其吸收曲线，如图2和图3.

表2 标准溶液浓度与吸光度的关系

编号123456浓度/(μg/mL)8.0016.0024.0032.0040.0048.00吸光度ΔA0.155 00.288 60.436 60.576 60.701 30.838 0

2.2 样品稳定性实验

由图1～3可知，标准溶液的吸收光谱图和样品的吸收光谱图图形相同，均在270 nm和420 nm有较强吸收.但峰形不对称，这样会给含量测定带来影响.采用三波长光谱法可有效地消除吸收峰不对称给定量分析造成的影响并校正基线倾斜，用作图法确定出3个测定波长分别为λ1=250 nm、λ2=270 nm、λ3=295 nm[8-14].

2.3 方法精密度实验

按1.4的方法配制样品溶液，在测定波长下测定ΔA，得到标准偏差和变异系数，结果列于表3.

表3 方法精密度 (μg/mL)

序号样品浓度测定值(n=9)测定平均值标准偏差变异系数/%112.009.964 9-9.976 69.970 10.005 40.054216.0013.432 7-13.508 813.469 80.026 70.198320.0017.508 8-17.584 817.537 40.025 60.146424.0020.982 5-21.029 221.008 50.017 80.085528.0024.883 0-24.964 924.919 40.028 90.116632.0028.713 0-28.789 528.743 90.031 00.108

2.4 方法回收率实验

按1.4的方法配制3 个不同浓度样品溶液，按标准加入法加入等量的1.4标准储备液，在测定波长下测定ΔA，得到回收率，结果见表4.

表4 方法回收率 (μg/mL)

编号样品浓度加入量/μg应测值实测值回收率/%112.00800.498 80.500 6101.9216.00800.611 20.609 298.7320.00800.727 70.724 497.5

由表4可知，实验方法回收率为97.5%～101.9%.

按照1.4的方法处理茶寄生和梨寄生样品，在三波长下分别测定其ΔA值3次，黄酮化合物的含量结果为：茶寄生黄酮化合物含量13.7 mg/g，梨寄生黄酮化合物含量8.05 mg/g.

2.5 结论

本实验采用超声提取茶寄生和梨寄生黄酮化合物，用三波长光谱法测定黄酮化合物的含量.方法的回收率为97.5%～101.9%，变异系数小于0.054%，方法的准确度与精密度均较高.由于ΔA值与黄酮的浓度成正比，在所选择的3个波长处，其相应的吸收光谱曲线上3点在一条直线上，有效地消除吸收峰不对称和基线漂移给定量分析造成的影响，因此三波长光谱法为测定茶寄生和梨寄生的黄酮化合物含量提供了更准确的方法.

参考文献

[1] 孙艳秋,刘珂,王守愚.槲寄生的研究进展[J]．中草药,2000,31(6):471-474.

[2] 龚祝南,王铮涛,徐珞珊．中国桑寄生科Loranthaceae 药用植物研究[J]．中国野生植物资源，1996(1):11-15．

[3] 朴香兰,柏晓清,邓长芹.桑寄生科植物及彝药桃树寄生[J]．中央民族大学学报(自然科学版),2011,20(3):55-58.

[4] FRESE S，FRESE-SCHAPER M，ANDRES AC，et al．Cardiac glycosides initiate Apo2L /TRAIL-induced apoptosis in non-small cell lung cancer cells by up-regulation of death receptors 4 and 5[J].Cancer,2006,66(11):5867-5874．

[5] 刘丽娟.桑寄生现代临床应用研究进展[J].检验医学与临床,2009，6(6):1001-1002．

[6] 侯冬岩,回瑞华,刘晓媛.洋葱皮中黄酮化合物的超声提取与光谱分析[J].食品科学，2006(9):150-152.

[7] 王延峰,李延清,郁永红，等.超声法提取银杏叶黄酮的研究[J].食品科学，2002，2(8)：166-167.

[8] Hui RH,Hou DY.Quantitative determination of rifampinumby three wavelength spectrophotometry[J].Spectroscopy and spectral analysis，1995,15(5):95-98.

[9] Hui RH,Hou DY,Hui YL.Quantitative determination of beraxinate hydrochloride by three wavelength spectrophotomatry[J].Chemical Research in Chinese Universities,1994,10(4):297-300.

[10] 回瑞华,侯冬岩.三波长分光光度法测定红茶及其饮料中黄酮的含量[J].食品科技，2004(2)：67-69.

[11] 回瑞华,侯冬岩,关崇新,等.三波长-光谱法测定沙棘果汁中黄酮的含量[J].光谱学与光谱分析,2005(2):108-111.

[12] 侯冬岩,回瑞华,杨梅,等.苦丁茶中总黄酮的三波长-光谱法定量分析[J].分析化学,2004(6):89-92.

[13] 回瑞华,侯冬岩,关崇新,等.三波长分光光度法测定沱茶中茶多酚的含量[J].分析测试学报,2003(6):60-63.

[14] 回瑞华,侯冬岩,刘晓媛,等.绿茶及其饮料中茶多酚的光谱分析及抗氧化性能测定[J].卫生研究,2005(6):113-115.