图1 异丙嗪分子结构式

异丙嗪(promethazine)，又名非那根、抗胺荨，是吩噻嗪类衍生物，属抗组胺药，具有镇吐、抗晕眩及镇静催眠等作用[1-3].异丙嗪为手性分子，在药物中以外消旋体形式存在(分子结构如图1所示).由于药物对映体在药理、毒理和临床疗效等方面存在较大差异[4-8]，目前关于异丙嗪R、S构型对映体不同的药效、毒理研究尚未见文献报道，因此建立异丙嗪对映异构体的手性拆分方法尤为重要.异丙嗪的手性拆分通常采用高效液相色谱法[9]和毛细管电泳法[10]，采用卵类粘蛋白手性固定相拆分异丙嗪对映体尚未见文献报道.卵类粘蛋白是一类新型的蛋白质色谱填料，具有众多手性识别位点和较宽的对映选择范围[11，12]，已被应用于一些药物的手性拆分.本文建立了用卵类粘蛋白柱拆分异丙嗪对映体的高效液相色谱方法,考察了有机改性剂含量、流动相pH值、缓冲盐浓度、流速等因素对异丙嗪对映体分离的影响,优化了最佳分离条件.与其它分离方法比较，该方法分析时间短、重现性好、分析结果可靠，为异丙嗪对映异构体的药理、毒理研究提供一定的支持.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters 1525高效液相色谱仪；waters 2996型二极管阵列检测器；Agilent Ultron ES-OVM(5 μm,150 mm×4.6 mm)手性柱；PHS-3C精密数显酸度计(上海天达仪器有限公司)；电子天平(AL 204梅特勒-托利多公司(上海)有限公司).

双师协同教学模式一方面体现了开放的思想，不管是“学科双师”协同模式，还是“虚实双师”协同模式，都充分利用网络资源，使我们的课堂内容不再仅仅局限于教材；另一方面也体现了整合的思想，既是学科间的整合，又是人文、艺术、科学等跨领域的整合，不仅贯彻在课程上，更是贯彻在课堂上，做到了课程与课堂同步。

盐酸异丙嗪对照品购自上海江莱生物科技有限公司，纯度98%，批号：100422；甲醇为色谱纯，天津化学试剂有限公司；磷酸二氢钾、磷酸和氢氧化钾等试剂为分析纯，天津化学试剂有限公司；水为二次蒸馏水，实验室自制.

1.2 实验方法

精密称取盐酸异丙嗪对照品，用甲醇溶剂配制浓度为10 μg/mL的测试溶液.色谱条件：甲醇-磷酸二氢钾(0.01 mol/L)=6∶94(V/V)(pH=2.96)为流动相，色谱柱为Agilent Ultron ES-OVM(5 μm,150 mm×4.6 mm)手性柱，流速为0.7 mL/min，检测波长为250 nm，进样量10 μL，HPLC进行测定.

选择甲醇为有机改性剂，以磷酸二氢钾(0.01 mol/L)为缓冲溶液，流动相pH值为2.96，流速为0.7 mL/min，考察甲醇含量对拆分的影响.随着有机改性剂甲醇含量的增加，样品在固定相上的保留效应减弱，降低了固定相和手性药物的分子作用，拆分效果降低，分离度Rs和选择性系数α都发生变化，结果如图2所示.根据最佳分离效果，选择甲醇-磷酸二氢钾(0.01 mol/L)=6∶94(V/V)为流动相.

以甲醇-磷酸二氢钾(0.01 mol/L)=6∶94(V/V)为流动相，用磷酸和氢氧化钾调节磷酸二氢钾溶液的pH值，流速为0.7 mL/min，发现流动相pH值在2.96～3.82范围内时，样品能够得到拆分，结果如图3所示.流动相的pH值能够影响固定相和手性药物的分子状态.异丙嗪在酸性条件下为正离子状态，能够与卵类粘蛋白发生较强的作用力，拆分效果较好.但如果流动相的pH值过低，会破坏手性固定相，对色谱柱产生不可修复的损伤，因此选择流动相的pH=2.96.

2 结果与讨论

2.1 有机改性剂含量的选择

第一，虽然我国大多数的医院信息化建设已经历了一段时期，但信息化体系的建设还不够完善，各科室的信息化建设还不能很好的相互融合。第二，医院在内部控制管理中不能将信息及时有效的传递和收集起来。同时，一些管理人员对信息化系统还不够重视，甚至不习惯在信息网络间进行管理工作和办公，这严重影响了医院内部控制管理信息化发展的顺利进行。第三，在医院的一些信息化业务系统中，统计信息不全、缺失的现象较为严重，使得各科室之间因医疗信息建立不完善而导致缺乏有效的沟通和利用，这为医院的内部控制管理带来了许多的阻力和障碍。

2.2 流动相pH值的选择

嵌入式系统的教学方式要体现温故知新和学以致用。任课教师在充分理解教学内容的基础上，合理安排授课内容的次序，根据学情适时复习一些先导课程的内容，如C语言、51单片机、数字逻辑等。紧密结合就业市场需求和实际项目的教学方式，带动学生的学习兴趣，提高教学效率。

图2 甲醇含量对分离度Rs(▲---▲)和单旋体容量因子k1′(◆---◆)的影响 图3 pH值对分离度Rs(▲---▲)和单旋体容量因子k1′(◆---◆)的影响

2.3 缓冲盐浓度的选择

在甲醇-磷酸二氢钾溶液=6∶94(V/V)为流动相、pH值为2.96、流速为0.7 mL/min的色谱条件下，考察不同浓度的磷酸二氢钾缓冲溶液对异丙嗪对映体拆分的影响，结果如图4所示.当缓冲溶液的pH值不变，缓冲盐的浓度会影响固定相的离子效应，影响手性固定相的手性拆分能力.当使用0.01 mol/L的磷酸二氢钾作缓冲溶液时，异丙嗪的手性拆分效果较好.

2.4 流速的选择

以甲醇-磷酸二氢钾(0.01 mol/L)=6∶94(V/V)(pH=2.96)为流动相，考察不同流速对拆分的影响，结果如图5所示.当流动相流速为0.7 mL/min时有最佳的分离效果.

图4 缓冲盐浓度对分离度Rs(▲---▲)和单旋体容量因子k1′ (◆---◆)的影响 图5 流速对分离度Rs(▲---▲)和单旋体容量因子k1′ (◆---◆)的影响

2.5 异丙嗪手性拆分色谱图

图6 盐酸异丙嗪手性拆分色谱图

按照步骤2.1～2.4所确定的实验条件对异丙嗪对映体进行手性拆分，结果如图6，Rs=1.417.

3 结论

异丙嗪分子含有吩噻嗪、胺基、甲基等基团，能与卵类粘蛋白手性固定相的胺基、羰基、羟基等基团发生三点作用而被拆分.有机改性剂的含量影响了样品在固定相上的保留，合适的比例对手性拆分的效果非常重要.流动相pH值影响固定相和样品分子的存在形态和基团特性，在拆分过程中需要选择合适的流动相pH值.本文建立了采用卵类粘蛋白手性拆分异丙嗪对映异构体的方法，可以用于异丙嗪光学异构体药理、毒理等临床研究，还可以对其药物代谢等生理作用的研究提供一定支持.卵类粘蛋白官能团种类多，包括多种极性基团、非极性基团，并且具有立体结构丰富、能够与手性药物等发生多种包合和络合等作用，手性识别位点多，对手性药物具有强大的拆分能力，在手性拆分领域具有广泛的应用前景.

参考文献

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