虫草是中国传统中药材，很多种类都具有重要的药食用价值，其药理活性体现在抗氧化、抗肿瘤、延缓衰老等多个方面[1]。在自然界中寄主昆虫被虫草菌的分生孢子感染后形成了虫菌结合的复合体，即为虫草。虫草野生资源有限，很多研究者用虫草真菌人工感染昆虫以研究其侵染机制[2～4]或培养人工虫草[5～6]，常用的代寄主有蚕蛹、黄粉虫等[3]。

野生兰坪虫草(Ophiocordyceps lanpingensis H.Yu&Z.H.Chen)寄生于钩蝠蛾幼虫上[7]。本研究用兰坪虫草菌感染代寄主黄粉虫、云南蝠蛾、人支蝠蛾的幼虫，以期为该虫草的人工培育提供一定参考价值。

1 材料与方法

1.1 材料

兰坪虫草菌株分离自兰坪虫草菌核部位。

代寄主：黄粉虫、云南蝠蛾、人之蝠蛾的幼虫。

孢子诱导培养基：0.2%黄豆粉、2%麦芽糖、0.1%硫酸镁、0.05%磷酸二氢钾、2%琼脂。

用注射法、涂布法、饲喂法3种活体感染方式处理3种代寄主。黄粉虫处理3瓶，每瓶放入10只，20℃培养，用灭菌胡萝卜块饲喂；云南蝠蛾和人之蝠蛾分别处理10瓶，每瓶放入1只，15℃培养，用灭菌胡萝卜块饲喂。持续观察60 d，每天统计昆虫死亡数量，计算死亡率。死亡虫体转入2%水琼脂培养基中，20℃培养一周后切片观察死虫体内菌丝，确定感染，计算感染率。

1.2 方法

1.2.4 灭菌昆虫培养基诱导子实体

将兰坪虫草菌接种到孢子诱导培养基平板上，20℃、弱光照培养20 d，获得足够量的分生孢子。用无菌水制作孢子悬液，使孢子浓度达到1.0×106个/mL，4℃保存。

1.2.2 代寄主的处理

饲喂法：在三角瓶中用子实体诱导培养基来培养兰坪虫草菌的菌丝体，当培养基表面布满菌丝体时接入昆虫进行饲喂感染（昆虫以含菌丝体的培养基为食）。处理虫体数量同前2种方法。

在料液浓度、料液体积流量、浓缩倍数等相同的条件下，研究了超滤时间对膜通量及压力的影响，结果如图5所示。

采用饲喂法感染代寄主对虫体的损伤小，但虫菌接触机会多，3种代寄主的感染率都明显提高。其中黄粉虫感染效果最好，达到43%；云南蝠蛾和人支蝠蛾的感染率较低，分别为20%和30%，但两种蝠蛾的死亡率均为100%，存活时间也短（表3，图1）。

子实体诱导培养基：20%鲜蚕蛹、0.6%黄豆粉、3%麦芽糖、0.05%石膏粉、0.1%MgSO4、0.05%KH2PO4、0.004% 烟 酸 、0.004%Vb6、0.002%Vb1。

IEEE 802.11n标准能够支持不同MCS，多种物理层速率.在空间流数目不变的情况下，MCS越大，物理层速率越大.实际使用中，更多的时候物理层速率是动态变化的.相同RSSI条件下，选择不同的MCS可能导致不同的丢包率，而丢包率的不同对AdaCode的编码率要求不同.因此在RSSI已知的条件下，能够得到多组MCS和AdaCode编码率选择方案.AdaCode将预估编码率和物理层速率选择相结合，从所有MCS中选择有效吞吐率最大的组合，在保证数据传输可靠性的同时尽可能地提高信道利用率.

涂布法：用蘸了分生孢子悬液的无菌棉球涂布虫体表面，重复涂布3次，每2次涂布间隔1小时，处理完后，将虫体放入无菌沙土培养瓶中。

用蘸无菌水的棉球轻轻擦拭清洗昆虫体表2次，再用酒精棉球体表消毒2次，接着用无菌棉球蘸无菌水清洗2次，最后用无菌滤纸吸取虫体表面的水分。

注射法：用无菌注射器取0.02 mL孢子悬液注入虫体内，处理过的虫体放入20%含水量的无菌沙土培养瓶内。

1.2.1 兰坪虫草菌孢子悬液制备

将子实体培养基中的鲜蚕蛹替换为等量的云南蝠蛾活体，高压灭菌30 min，冷却后接入兰坪虫草菌块，22℃、遮光培养10 d后，进行低温弱光刺激20 d（16℃、每天散射光照射 7 hr），转入 20 ℃，增加光照时间（12 hr）和强度培养。设5个重复。

本机制动管减压，平均管、作用管增压，机车制动缸充风产生制动作用。补机接收制动管压力减少的变化，通过DBTV模块停止制动管给辅助风缸充风，并将辅助风缸的风压传送到16TV作用管；补机接收平均管压力增高的变化，通过BCCP给制动缸充风，补机制动

2 结果与分析

2.1 注射法感染效果

采用注射法感染代寄主，死亡率均较高（＞80%），但虫草真菌感染率不高（表1）。尤其是云南蝠蛾和人支蝠蛾，约2天左右，全被杂菌感染而导致死亡，未能感染上兰坪虫草菌。黄粉虫用注射法相对较容易被感染（23%），但也多数都同时感染了杂菌。

表1 注射法感染效果

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2.2 涂布法感染效果

采用涂布法感染代寄主，黄粉虫不容易死亡，感染率也低（7%）。两种蝠蛾死亡率均较高，但平均死亡时间延长，说明涂布法对虫体的损伤较小；感染率也较低，有10%的个体能够感染兰坪虫草菌（表2）。

（一）引导学生进行学习反思。教师要引导学生多思考，在设定问题时要精心选择具有启发性的问题，使学生的思维发散，学生自然而然就会思考。还要鼓励学生对教学内容进行总结与反思，使学生能够进一步加深对知识的记忆。

表2 涂布法感染效果

感染率/%黄粉虫 5 2 45 17 7人支蝠蛾 10 1 7 100 10云南蝠蛾 10 1 7 100 10代寄主 死亡数/个感染数/个平均死亡时间/d死亡率/%

2.3 饲喂法感染效果

1.2.3 活体感染方法

表3 饲喂法感染效果

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图1 用饲喂法感染的代寄主

注：a,b为感染前后的黄粉虫；c,d为感染前后的人支蝠蛾；e,f为感染前后的云南蝠蛾。

图2 在灭菌后的人支蝠蛾上诱导兰坪虫草子实体

2.4 灭菌昆虫培养基诱导子实体

将兰坪虫草代寄主人支蝠蛾进行灭菌后替换培养基中的蚕蛹，用来培养兰坪虫草菌。结果表明（图2），经过温差和光照刺激，灭菌昆虫培养基较容易诱导兰坪虫草菌生长形成健壮的兰坪虫草，制备的5瓶重复处理全部长满子实体。

3 讨论

探索虫草菌接种感染昆虫的最佳方法，有助于提高虫草人工培养的成功率。廖志勇[8]报道了3种冬虫夏草菌感染虫草蝙蝠蛾的方法（注射法、饲喂法、喷淋法），其中饲喂法效果最差；注射法最好，感染率达14.34%，但存在昆虫死亡率太高的缺点。郑庆委等[9]认为蛹虫草菌感染桑蚕幼虫的较好方法是表面消毒浸染法和悬液注射法。

各地密切结合城市防洪实际需求，合理安排，统筹兼顾，有条不紊地推进城市河道治理、堤防建设、山洪灾害防治、水库涵闸除险加固等工程建设，进一步夯实了城市防洪减灾的工程基础。例如，福建省在全省72个县市开展了城区防洪工程建设，累计完成投资37亿元，建成县级城区防洪堤1 019km，使全省有防洪任务的县级以上城市基本达到国家规定的设防标准。武汉市完成397km长江、汉江干堤和123km府河、举水连江支堤堤防整险加固；建成总长195.16km的中心城区防洪保护圈；将防洪工程与城市滨水环境建设融合，建成长30km的两江四岸江滩。

本研究用兰坪虫草菌感染3种代寄主，在3种活体感染方法中，注射法对昆虫的损伤较大，且容易引起杂菌污染，3种代寄主的死亡率都高，但感染率都较低，2种蝠蛾的生命力较脆弱，死亡率100%，但感染率却为0。涂布法对昆虫的损伤较小，但3种代寄主的感染率都只有10%左右。饲喂法感染效果最好，黄粉虫的感染率达到43%，人支蝠蛾的感染率达到20%，云南蝠蛾的感染率达到30%。这与廖志勇[8]的研究结果不一致，可能是因为虫草菌和寄主昆虫的差异造成的。

靠业余时间“爬格子”是件很辛苦的事情，因此，过去我很少参加文学方面的社会活动，湖北省作家协会每年春节前开一次茶话会，有一次我的车开到长江大桥上被书记叫回来。我一向认为，作家拿作品“说话”就行了，别的都不重要。尤其是在杂文创作方面，几十年中除了参加过河北的杂文报刊召集的三次会议，我与杂文界没有其他“面对面”的交往，可谓埋头写作，孤军奋战。

用虫草菌感染昆虫的过程中，虫体表面所带杂菌，例如拟青霉属真菌比虫草菌生长速度快得多，其生长处于优势地位，较容易感染昆虫导致高死亡率，而降低虫草菌感染率。本研究中，2种蝠蛾用3种活体感染法，死亡率都达到100%。要降低虫体表面的杂菌，通常需要对虫体进行消毒处理，但水或酒精等液体容易堵塞虫体气孔而提高昆虫死亡率；或是虫体消毒不彻底也会降低兰坪虫草菌的感染率。另一种减少或避免杂菌干扰的方法就是将昆虫进行灭菌处理后用作培养基来培养虫草菌。本研究采用兰坪虫草菌的代寄主进行灭菌处理后制作子实体诱导培养基，成功诱导获得生长旺盛的子实体。与用活体昆虫感染相比，寄主灭菌培养具有操作方便，培养成功率高的优点。

她抱着我，在我耳边哈着热气，远处就是红房子，烟花一样的灯光打亮景色和她半个侧脸。第二天我搀扶着她去叩拜神灵，背着氧气瓶。我们脱鞋踏上观音庙冰凉的地板，双手转过写满藏文的经筒，数着天花板上的佛陀，在佛像前满怀敬畏地躬身施礼。我们爬上千米的阶梯，一步一停地回首俯瞰那深深浅浅的红色僧舍，它们在飘扬的彩旗里显得异常庄重，而周遭与它有关的一切都令人有种说不上来的敬畏。虽然我们知道，这些红房子要被拆掉了，连天的红色文化，佛泪守着的寸土砖城，要一间一间地被推倒。然后人们会遗忘满目疮痍的旧址，埋下举杯酒肉的潇洒，重建更有“特色”的乐园。

参考文献：

[1]丘雪红，曹莉，韩日畴.冬虫夏草的研究进展、现存问题与研究展望[J].环境昆虫学报，2016,38(1):1～23.

[2]谢雪钦.蛹虫草液体产孢条件优化及其侵染过程的初步研究[D].福州：福建农林大学，2007.

[3]韩玉梅，金莹，孔怡，等.泰山虫草对黄粉虫的侵染特性研究[J].菌物研究，2012,10(1):45～48.

[4]李春如，夏成润，林英任，等.台湾虫草的被毛孢无性型新种及其对黄粉虫的侵染研究 [J].菌物学报，2005,24(3):349～355.

[5]张秀波.自然野生泰山虫草资源调查及其虫草菌的研究[D].济南：山东农业大学，2009.

[6]张泽锦，叶萌，周祖基，等.冬虫夏草寄主昆虫饲养研究进展[J].中草药，2009,40:85～87.

[7]Chen ZH,DaiYD,Yu H,etal.Systematic analyses of Ophiocordyceps lanpingensis sp.nov.a new species of Ophiocordyceps in China[J].Microbiol Res.2013,168(8):525～532.

[8]廖志勇.冬虫夏草的染菌技术研究 [J].食用菌，2005(6):18.

[9]郑庆委，康冀川，高淑娴，等.蛹虫草对幼虫期家蚕感染的探究[J].安徽农业科学，2008,36(8):3253～3254.