随着化石燃料的资源枯竭和其带来的气候变化问题日益严重，开发可再生能源取代化石燃料迫在眉睫[1]。微藻是生产天然油脂、蛋白质、类胡萝卜素、色素等物质的原料之一[2]。研究发现微藻还可用于生产生物柴油[3-4]，但相关技术还有待突破。前人研究表明，在有利条件下，三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)、小球藻、杜氏藻等微藻会积累大量脂质[5-6]。其中，三角褐指藻是生产生物燃料的有效原料[7]。与常规油料作物相比，三角褐指藻具有需要水资源少、生长快、易培养、无污染等特点[8-9]。前人针对如何提高三角褐指藻中脂质的含量进行了大量的研究，如叶丽等[10]与Chen等[11]研究发现，外界环境因素，如温度、光照，限制营养元素氮、磷等胁迫条件对三角褐指藻脂质含量的积累有促进作用；Tang等[12]与Yeesang等[13]研究表明，光照、氮磷限制等因素会影响藻类生物量的积累，从而影响微藻的生物燃料生产；Chen等[14]研究也表明，微藻的生物燃料生产与微藻的生长速率及其脂质含量相关。

花生四烯酸(arachidonic acid, AA)是一种可促进植物细胞中代谢产物合成的非生物诱导子[15]。Wang等[16]关于雨生红球藻的研究表明，AA可通过增强dxs基因的表达促进虾青素的积累。马颖瑞等[17]和周静等[18]研究发现，AA可促进绿色杜氏藻合成类胡萝卜素。此外，马云青等[19]研究表明AA处理小鼠腹腔巨噬细胞后，细胞脂质积累量增加。

虚拟化技术让智慧校园按需分配 很多高校的信息系统应急而建，一个应用运行在单台物理服务器上，服务器数量繁多。部分服务器资源空闲，部分服务器负载过重，且绝大部分服务器采用单机运行的模式，系统的高可用性得不到保障。数据大多数存放在服务器本地硬盘，安全性得不到保障。单机运行容易出现故障，虽然部分重要应用采用双机模式，但一般都采用冷备模式，造成服务器的巨大浪费。

目前关于微藻脂肪酸合成和代谢调控的研究报道并不常见。在脂肪酸合成途径中，乙酰辅酶A羧化酶 (acetyl-COA carboxylase, ACCase) 被认为是第一个关键限速酶[20]。Roessler[21]发现硅藻(Cyclotella cryptica)缺硅4 h和15 h后，体内ACCase的活性分别提高了2倍和4倍，促进了脂肪的积累。Iskandarov等[22]研究发现，缺氮条件下，甘油-3-磷酸乙酰转移酶 (glycerol-3-phosphateacyltransferase, GPAT) 的表达水平与绿藻的脂肪酸含量的积累呈正相关。王静[23]研究表明，在三角褐指藻中，过表达溶血磷脂酸酰基转移酶 (lysophosphatidic acid acyltransferase，LPAAT) 基因会极大提高过表达藻株积累脂肪酸的能力。冯佳[24]研究发现，硅藻油脂的积累量随着accase、β-酮脂酰-ACP合酶II(acyl carrier protein synthase II, KAS II)和二酰甘油酰基转移酶 (diacylglycerol acyltransferase, DGAT) 等关键基因表达量的上调而增加。刘美兰等[25]研究发现丙二酸单酰辅酶A酰基载体蛋白转酰基酶(malonyl-CoA：ACP transacylase, MCAT) 在叶绿体中参与油桐脂肪酸的合成代谢。 综上所述，基因ACCase、GPAT、LPAAT、KAS II、DGAT、MCAT在植物油脂合成通路中起一定作用。

目前关于提高三角褐指藻中脂质积累的研究主要是通过限制营养元素来实现的，关于利用AA提高三角褐指藻中脂质研究还尚未见报道。因此，本研究首次研究了AA对三角褐指藻的总脂与脂肪酸含量的影响，并对代谢产物合成通路中相关基因的表达差异进行了研究，以期为三角褐指藻提高脂质含量，实现微藻油脂的能源化提供理论支撑。

1 材料与方法

1.1 藻种的获得与处理

用不同浓度的诱导子AA处理处于对数期的三角褐指藻 24 h，取 80 mL藻液，在 4℃, 5 000 r·min-1离心10 min后收集对数生长期的三角褐指藻。冲洗2～3次后按照 plant RNA kit试剂盒(OMEGA, 美国)说明书进行三角褐指藻总 RNA 提取。提取物-20℃保存备用。

1.2 三角褐指藻生长曲线测定

AA处理三角褐指藻后，藻体总脂相对含量大致呈先上升后下降的趋势，在浓度为62.5 mg·L-1时总脂相对含量最高(图3-A)；单位藻细胞总脂相对含量则呈先下降后上升的趋势，且在浓度为312.5 mg·L-1时达到最大值(图3-C)，推测该浓度的AA使三角褐指藻的生长受到胁迫，藻体积累总脂以增强抗逆性。游离脂肪酸含量(图3-B)与单位细胞中游离脂肪酸含量(图3-D)总体均呈先上升后下降的趋势，且浓度为12.5 mg·L-1时达到最大值，较CK极显著上升。

1.3 三角褐指藻脂质含量测定

由图1可知，随着AA处理时间的增加，不同浓度AA处理下的三角褐指藻细胞密度均呈先升高后降低的趋势，在第6天时其生物量达到最大值，第8天则处于衰亡期。

1.4 藻体总RNA的提取

三角褐指藻藻种来源于宁波大学海洋学院微藻室。将三角褐指藻细胞以1×105cells· mL-1接种到MVA培养基(pH值7.5)中，培养基配方参照蒋霞敏等[26]的方法。培养条件：温度15±0.5℃，光照强度62.5 μmol photons·m-2.·s-1，光暗周期比12 h∶12 h，每天摇瓶3次。培养2 d后，用不同浓度的AA处理藻体，AA浓度分别为0(CK)、0.5、2.5、12.5、62.5和312.5 mg·L-1，每个浓度设3次重复，诱导子处理6 d后的三角褐指藻用于脂质含量的测定。

1.5 三角褐指藻代谢通路基因表达分析

使用 PrimeScript RT Reagent Kit (TaKaRa，日本) 对诱导子处理下三角褐指藻RNA进行 cDNA 的合成。代谢通路基因引物详见表1。反应体系为 SYBR® Premix Ex TaqTM(2×)10 μL，F-primer (10 μmol·L-1)0.8 μL，R- primer(10 μmol·L-1)0.8 μL，模板2 μL，ddH2O 补足至20 μL。每组样品重复3次。反应程序：94℃ 预变性3 min，40轮扩增循环(94℃变性 30 s，53℃ 退火30 s，72℃ 延伸20 s)，72℃ 延伸10 min，16℃保存。运用2-ΔΔCt法[28]对荧光定量PCR结果进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 AA对三角褐指藻细胞生长的影响

总脂含量根据尼罗红染色法测定[27]；游离脂肪酸 (free fatty acid) 则采用游离脂肪酸试剂盒 (COMIN, 苏州) 进行测定。

随着动力系统和非线性科学的迅猛发展，对数学人才在微分方程知识方面的要求逐步提高，教师应该与时俱进，针对常微分方程课程的特点，用科学发展的眼光不断革新教学内容与方法。只有这样，才能提高学生学习常微分方程的积极性和主动性，培养学生的创新意识，提高学生应用知识解决实际问题能力，最终实现“学数学”、“用数学”的教育目标。

对不同浓度AA处理下的三角褐指藻在其生物量最大时(6 d)的细胞密度进行比较。结果表明，随着AA浓度的增加，三角褐指藻细胞密度呈先上升后降低的趋势。当AA浓度为0.5 mg·L-1 时，三角褐指藻细胞密度达到最大值；但在高浓度AA处理下(312.5 mg·L-1)，三角褐指藻细胞密度较CK减少了44%(图2)。表明高浓度的AA对三角褐指藻的生长有抑制作用，低浓度则促进其生长。

2.2 AA对三角褐指藻总脂与游离脂肪酸含量的影响

AA处理三角褐指藻后，每隔24 h分别取1 mL藻液用722型紫外分光光度计(上海元析仪器有限公司)测其在680 nm处的吸光值(A680)，并用血球计数法对各组样品计数，每组均设3次重复，建立经不同浓度AA处理三角褐指藻后的生长曲线。

定量PCR研究不同浓度的AA对三角褐指藻脂类生物合成途径相关基因ACCase, KAS II, MCAT, DGAT, GPAT 和 LPAAT 的相对表达量差异。结果表明，LPAAT、GPAT、KASII、ACCase 4个基因均在AA浓度为312.5 mg·L-1时达到最大值，且该浓度下均极显著高于CK(图4-A、B、E、F)；基因DGAT和MCAT均在AA浓度为0.1 mg·L-1时达到最高值，分别为CK的4倍与2.5倍，且均极显著高于CK(图4-C、D)。

 

表1 三角褐指藻代谢通路基因引物设计Table 1 Gene primers used in metabolism pathway of Phaeodactylum tricornutum

  

Pathway通路基因名称Genename基因Gene引物序列Primesequence退火温度Meltingtemperature/℃内参基因Housekeepinggene看家基因Housekeepinggeneβ⁃actinF：AGACCATTATGAAGTGCGAT55 0R：ACCCTCCAATCCAAACAG54 0游离脂肪酸Freefattyacids二酰甘油酰基转移酶Diacylglycerolacyltransferasedgat甘油-3-磷酸乙酰转移酶Glycerol⁃3⁃phosphateacyltransferasegpat溶血磷脂酸酰基转移酶LysophosphatidicacidacyltransferaselpaatF：GGTATGTTTGCGTAGACTTGT52 3R：TCGTTATTTACTTCGGAGATT51 8F：ACAAGTTCAAAGAAGGTGGTG54 3R：GGTTTTAGAGTCAAAGGGTG51 5F：ATCAAAAGTGGGCAGAAAA53 0R：GATACCAAAACGAACAACG51 2脂质Lipid乙酰辅酶A羧化酶Acetyl⁃COAcarboxylaseAccaseβ-酮脂酰⁃ACP合酶IIAcylcarrierproteinsynthaseIIKasII丙二酸单酰辅酶A酰基载体蛋白转酰基酶Malonyl⁃CoA：ACPtransacylasemcatF：ATCTTGGGGACTTTAGCC51 2R：AGTGCCGTTATTGGATGT50 3F：GGTTTGGAAGCGGTTGT53 2R：TCCGAGGTTGGTACTCATG53 4F：TCGTCGTCTCGGATGG52 1R：GCTTGGGCTTTGGGTA51 5

  

注：*表示差异显著(P<0.05)；** 表示差异极显著(P<0.01)。下同。Note: * indicates significant difference at 0.05 level, ** indicates significant differences at 0.01 level. The same as following.图1 AA对三角褐指藻细胞生长的影响Fig.1 Effect of AA on the cell growth of Phaeodactylum tricornutum

  

图2 不同AA浓度对三角褐指藻细胞生长的影响(6 d)Fig.2 Effect of different concentration of AA on the cell growth of Phaeodactylum tricornutum (6 days)

  

图3 不同AA浓度对三角褐指藻脂质与游离脂肪酸含量的影响Fig.3 Effect of different concentration of AA on the lipid and fatty acid content in Phaeodactylum tricornutum

2.3 AA对三角褐指藻脂类相关基因表达的影响

58 分段空场嗣后充填采矿方法在谦比希铜矿中的应用 ………………………………………………………李 辉，马浩吉，张晋军，张东红，李占炎，杨清平

  

图4 不同AA浓度对三角褐指藻脂类合成关键基因酶的相对表达量的影响Fig.4 Effect of different concentration of AA on relative expression of lipid recated genes in Phaeodactylum tricornutum

3 讨论

王海堂等[29]认为AA是一种诱导植物代谢产物积累的重要因子，其可以直接参与细胞内信号转导或者影响其他信号转导通路以调控细胞的生命活动。Gong等[30]在银杏的研究中发现，AA可调控DXS基因的表达，促进银杏内脂的积累。苗志奇等[31]在培养红豆杉细胞时添加AA，发现在适宜浓度的AA诱导下，紫杉醇的产量提高近3倍。本研究结果表明，较低浓度AA作用下，三角褐指藻的生长活动强，其总脂与脂肪酸含量也增加，即适宜浓度的AA对三角褐指藻的脂肪酸(12.5 mg·L-1)与总脂(62.5 mg·L-1)积累有促进作用。但随着AA浓度的增加(312.5 mg·L-1)，藻细胞生长受到胁迫，代谢产物含量降低。推测可能存在两方面原因：一是合成的大量代谢物反馈抑制了该合成途径的酶，使合成受阻；二是AA与次生代谢物竞争结合三角褐指藻细胞的位点，使其无法识别诱导信号，诱导物的作用减弱[32]。

德国现行的垃圾处理技术政策，已经从单一的无害化向“减量化、资源化、无害化”转变：①进一步完善分类收集系统，确保将生活垃圾在源头有效分类，从而保证垃圾回收利用的效果；②开发先进的机械生物处理技术，对混合生活垃圾进行合理分选，以提高垃圾资源利用的效果；③对焚烧技术进一步优化，以适应各种垃圾的性质、降低污染物排放、提高能源利用效率的目标；④充分发挥创新精神，将科技运用到各种细节中，如垃圾收运车采用混合动力或绿色动力等。同时，德国部分垃圾处理设施是以园区的形式建设的，集垃圾处理、环保公园、动物饲养、休闲娱乐等设施于一体，园区边界与居民区之间没有防护距离，取得公众的高度信任。

（1）抓基础，强化水运提档升级。坚持将加快发展作为四川水运的第一要务。加快实施长江、岷江、嘉陵江、金沙江、渠江等5条国家高等级航道达标升级工程，沱江、涪江等2条省内高等级航道升级改造工程，全省高等级航道全线达标，干支航道全面提档升级，构建起干支衔接、通达通畅的航道体系，实现通江达海。实施全省重点港口集疏运通道完善工程完善港口功能，优化港口集疏运体系，拓展发展新空间。

前人研究发现，环境胁迫下，微藻细胞能进行储能，促进脂质的积累[33]。Fan 等[34]研究营养缺乏对小球藻脂质积累的影响时发现，ACCase、DGAT 2个基因的表达与小球藻脂质的积累高度相关。本研究中，ACCase和DGAT 基因在AA作用下，其表达量均有所增加，进一步证实了ACCase与DGAT基因在脂质合成过程中起关键作用。Miersch 等[35]研究表明，在逆境胁迫下，番茄过氧化物酶体β-氧化途径中的多功能蛋白基因MFP过量表达，游离脂肪酸被氧化，同时产生AA等信号分子。本研究发现，不同浓度AA处理下，基因表达水平与游离脂肪酸含量无直接关系，这可能是由于游离脂肪酸合成通路的关键基因DGAT、GPAT、LPAAT在AA作用下表达量极显著上升，游离脂肪酸转化成油脂。Khozin等[36]、唐建新等[37]研究表明，贮存脂的主要成分三酰甘油，由于受到分子信号转导的影响被转化成甘油二脂和其他极性脂类，甚至可以再转化为乙酰CoA被用于合成膜脂和萜类物质。本研究中，在不同浓度AA处理下，脂质合成相关基因LPAAT、KAS II、ACCase、GPAT等基因表达大部分显著上升，在AA浓度为312.5 mg·L-1时达到最大值，且该浓度下单位细胞中总脂相对含量也达到最大值，即这4个基因对脂质的积累均有促进作用，但总脂含量则在62.5 mg·L-1时达到最大值，表明在高浓度的AA(312.5 mg·L-1)作用下，由于AA参与藻细胞信号转导，导致三角褐指藻合成的三酰甘油转化成了其他次生代谢产物，如萜类物质等；此外，高浓度(312.5 mg·L-1)的AA抑制三角褐指藻的生长，生物量降低，导致总脂含量降低，即当AA浓度为62.5 mg·L-1时，单位细胞中脂质含量虽然不是最高，但该浓度生物量较大，使总脂含量达到最大值。

本试验通过研究不同浓度AA对三角褐指藻油脂与代谢通路相关基因表达变化情况，探讨了AA对三角褐指藻油脂代谢产物的调控。结果表明，适宜浓度的AA对总脂与脂肪酸产物合成具有促进作用，且代谢产物含量与其代谢通路中的部分关键基因呈现一定关系，即AA可通过调控代谢通路中关键基因的表达从而促进油脂的积累。本研究结果为今后利用藻类工程提高三角褐指藻油脂含量提供了新思路。

4 结论

本研究结果表明，低浓度的AA促进三角褐指藻的生长，高浓度则抑制其生长。在适宜浓度AA诱导下，三角褐指藻总脂与脂肪酸含量均显著升高，且脂质合成相关基因也与其呈现一定关系。因此，一定浓度的AA可通过调控代谢通路中关键基因的表达从而促进油脂的积累，本试验结果为今后生物柴油的发展提供了新思路。

参考文献：

[1] Deng X D, Fei X W, Li Y J. The effects of nutritional restriction on neutral lipid accumulation in Chlamydomonas and Chlorella[J]. African Journal of Microbiology Research, 2011, 5(3): 260-270

[2] Michalak I, Chojnacka K. Algal extracts: Technology and advances[J]. Engineering in Life Sciences, 2015, 14(6): 581-591

[3] Hu Q, Sommerfeld M, Jarvis E, Ghirardi M, Matthew P, Seibert M, Darzins A. Microalgal triacylglycerols as feedstocks for biofuel production: perspectives and advances[J]. Plant Journal, 2008, 54(4): 621-639

[4] Sheehan J. A Look Back at the US Department of Energy′s Aquatic Species Program: Biodiesel from Algae[D]. Washington: Aquatic Plants & Algae, 1998

[5] Gómez-Loredo A, Benavides J, Rito-Palomares M. Growth kinetics and fucoxanthin production of Phaeodactylum tricornutum, and Isochrysis galbana, cultures at different light and agitation conditions[J]. Journal of Applied Phycology, 2016, 28(2): 849-860

[6] Li Y, Horsman M, Wang B, Wu N, Lan C Q. Effects of nitrogen sources on cell growth and lipid accumulation of green alga Neochloris oleoabundans[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2008, 81(4): 629

[7] Lee J Y, Chan Y, Jun S Y, Ahn C Y, Oh H M. Comparison of several methods for effective lipid extraction from microalgae[J]. Bioresource Technology, 2010, 101(1): 75-77

[8] Brennan L, Owende P. Biofuels from microalgae—a review of technologies for production, processing, and extractions of biofuels and co-products[J]. Renewable & Sustainable Energy Reviews, 2010, 14(2): 217-232

[9] Chisti Y. Biodiesel from microalgae[J]. Biotechnology Advances, 2007, 25(3): 294-306

[10] 叶丽, 蒋霞敏, 毛欣欣, 高秀芝, 张泽凌. 温度、光、盐对三角褐指藻紫外诱变株生长、总脂及脂肪酸的影响[J]. 生态学杂志, 2015, 34(2): 454-462

[11] Chen Y, Qiu Y J, Zhang W, Juan S L, Liu T Z. Effect of nutrient elements on growth and lipid accumulation of Phaeodactylum tricornutum[J]. Biomass Chemical Engineering, 2011, 45(5): 1-6

[12] Tang H, Abunasser N, Garcia M E D, Chen M, Simon K Y, Salley S O. Potential of microalgae oil from Dunaliella tertiolecta, as a feedstock for biodiesel[J]. Applied Energy, 2011, 88(10): 3324-3330

[13] Yeesang C, Cheirsilp B. Effect of nitrogen, salt, and iron content in the growth medium and light intensity on lipid production by microalgae isolated from freshwater sources in Thailand[J]. Bioresource Technology, 2011, 102(3): 3034-3040

[14] Chen M, Tang H, Ma H, Holland C T, Simon K Y, Salley S O. Effect of nutrients on growth and lipid accumulation in the green algae Dunaliella tertiolecta[J]. Bioresource Technology, 2011, 102(2): 1649-1655

[15] 李烜赫, 杨坤. 诱导子对红豆杉培养细胞紫杉醇产量的影响[J]. 生物学通报, 2006, 41(6): 55-58

[16] Wang L L, Li H Y, Gong Y F. The effects of arachidonic acid (AA) on the cell growth and astaxanthin content in alge Haematococcus pluvialis[J]. Fisheries Science, 29(3): 142-146

[17] 马颖瑞, 龚一富, 周静, 刘浩, 朱帅旗, 王何瑜. 绿色杜氏藻香叶基焦磷酸合成酶基因生物信息学与诱导表达分析[J]. 核农学报, 2017, 31(2): 248-254

[18] 周静, 龚一富, 马颖瑞, 刘浩, 朱帅旗, 王何瑜. 绿色杜氏藻DvGGPS生物信息学及转录差异研究[J]. 核农学报, 2017, 31(4): 635-642

[19] 马云青, 沈梓盈, 冀中豪, 粟楠, 唐小春, 任文陟. 花生四烯酸对RAW264.7细胞脂质积累及细胞增殖的影响[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版), 2016, 37(1): 27-30

[20] 谢禄山，谭晓风. 乙酰辅酶A羧化酶基因研究综述[J]. 中南林业科技大学学报，2005，20(14)：89-95

[21] Roessler P G. Changes in the activities of various lipid and carbohydrate biosynthetic enzymes in the diatom Cyclotella cryptica in response to silicon deficiency[J]. Archives of Biochemistry & Biophysics, 1988, 267(267): 521-528

[22] Iskandarov U, Sitnik S, Shtaida N, Didi-C S, Leu S, Khozin G I. Cloning and characterization of a GPAT-like gene from the microalga Lobosphaera incisa (Trebouxiophyceae): overexpression in Chlamydomonas reinhardtii enhances TAG production[J]. Journal of Applied Phycology, 2016, 28(2): 907-919

[23] 王静. 三角褐指藻LPAAT基因表达对脂肪酸代谢影响的研究[D]. 深圳: 深圳大学, 2015

[24] 冯佳. 核诱变和盐度驯化硅藻生长富集油脂的机理研究[D]. 杭州: 浙江大学, 2014

[25] 刘美兰, 谭晓风, 龙洪旭, 王哲, 刘璐, 王僳僳. 油桐丙二酰单酰CoA:ACP转酰基酶的克隆与序列分析[J]. 经济林研究, 2014, 32(4): 1-7

[26] 蒋霞敏, 郑亦周. 14种微藻总脂含量和脂肪酸组成研究[J]. 水生生物学报, 2003, 27(3): 243-247

[27] 张敬键, 吕雪娟, 李爱芬, 万凌琳, 吴洪, 尹顺吉. 微藻细胞油脂含量的快速检测方法[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(1): 64-72

[28] Livak K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCTmethod[J]. Methods, 2001, 25(4): 402-408

[29] 王海堂, 袁成凌. 新型功能因子——花生四烯酸[J]. 食品工业科技, 2003, 24(3): 76-77

[30] Gong Y F, Liao Z H, Guo B H, Tang K X. Molecular cloning and expression profile analysis of Ginkgo biloba DXS gene encoding 1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase, the first committed enzyme of the 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate pathway[J]. Planta Mediea, 2006, 72(4): 329-335

[31] 苗志奇, 未作君, 元英进. 花生四烯酸在紫杉醇生物合成途径上作用位点的研究[J]. 中草药, 2000, 31(6):418-421

[32] 刘春朝, 王玉春, 赵兵, 欧阳藩，叶和春，李国凤. 生物诱导子调节植物组织次生代谢的研究[J]. 植物学通报, 1999, 16(2): 131-137

[33] Cakmak T, Angun P, Demiray Y E, Ozkan A D, Elibol Z, Tekinay T. Differential effects of nitrogen and sulfur deprivation on growth and biodiesel feedstock production of Chlamydomonas reinhardtii[J]. Biotechnology and Bioengieering, 2012, 109(8): 1947-1957

[34] Fan J, Cui Y, Wan M, Wang W, Li Y. Lipid accumulation and biosynthesis genes response of the oleaginous Chlorella pyrenoidosa under three nutrition stressors[J]. Biotechnol Biofuels, 2014, 7(1): 1-17

[35] Miersch O, Wasternack C. Octadecanoid and jasmonate signaling in tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) leaves: endogenous jasmonates do not induce jasmonate biosynthesis[J]. Biological Chemistry, 2000, 381(8): 715-722

[36] Khozin G, Cohen Z. The effect of phosphate starvation on the lipid and fatty acid composition of the fresh water eustigmatophyte Monodus subterraneus[J]. Phytochemistry, 2006, 67(7): 696-701

[37] 唐建新, 陈卓, 胡晗华. 利用抑制差减杂交技术分离三角褐指藻在缺氮条件下上调表达的基因[J]. 遗传, 2009, 31(8): 865-870