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清霾饮对细颗粒物PM2.5致大鼠肺损伤的干预作用研究

更新时间:2009-03-28

雾霾天气不单给气候、环境、经济等方面造成明显的负面影响[1],还严重影响人们身心健康。其罪魁祸首为大气细颗粒物PM2.5(particulate matter2.5)[2]。研究显示PM2.5不仅损害呼吸、心血管、免疫、神经等系统,而且导致肿瘤和出生缺陷[3]。2012年《柳叶刀》杂志上发表的《全球疾病负担2010年报告》中称大气细颗粒物PM2.5是导致中国人口死亡仅次于饮食风险、高血压和吸烟的第四大危害要素,并揭示2010年中国的室外空气污染导致120万人过早死亡,死亡人数几乎占全世界死亡总数的40%[4]。PM2.5对呼吸系统作用机制为颗粒物侵入肺组织,产生局部氧化应激和炎症反应,氧化应激可侵害生物膜脂质、蛋白质和DNA,与炎性因子协同作用损伤呼吸道,造成肺功能下降及呼吸系统疾病发病率升高[5]

有效干预PM2.5构成的健康风险已成为我国医药研究范畴亟需解决的重大科学问题[6]。依据中医传统“药食同源”的理论,选用药食两用的红景天、桔梗、野菊花、山银花、鱼腥草、荷叶、甘草,研制出益肺、利咽解毒的清霾饮并探究其对PM2.5致大鼠肺损伤的拮抗作用。本实验采集长沙市PM2.5,制备PM2.5悬液,以大气PM2.5气管滴注大鼠染毒构成肺损伤为模型,给予最高剂量清霾饮进行干预,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清中生化指标变化,探讨清霾饮对大气PM2.5致肺损伤的干预作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

自拟方清霾饮药材(红景天9 g,桔梗6 g,野菊花 6 g,山银花 6 g,鱼腥草 10 g,荷叶 10 g,甘草3 g)购自老百姓大药房连锁股份有限公司,按中药常规煎法进行煎煮,将以上饮片以500 mL水浸泡30 min,加热至沸腾,后保持微沸30 min,滤过;残渣加300 mL水,进行二次煎煮,保持微沸30 min,过滤,合并两次的过滤药液,将药液浓缩至生药量0.0625 g/mL;AKP 试剂盒(批号:20170308),LDH试剂盒(批号:20170310),MDA 试剂盒(批号:20170310),SOD试剂盒(批号:20170306),均为南京建成生物公司;崂应2020型空气采样器、玻璃纤维滤膜(青岛崂山应用技术研究所);MK3酶标仪(Thermo公司);H1850型台式高速离心机(湖南湘仪实验仪器开发有限公司)。

1.2 PM2.5悬液配制

PM2.5由湖南农业大学于2016年11月-2016年12月在湖南农业大学的八教前坪和长沙县规模化养殖场几个污染程度不同的采样点连续采样,用崂应2020型空气采样器(电子流量计)收集,记录气温、气压。把滤膜剪成小块,折半后投入超纯水,超声低温震动30 min,纱布过滤洗脱液后,滤液用4 ℃、10 000 r/min、15 min离心 3次,弃上清液,称量后-20℃冰箱保存,用生理盐水配成造模染毒所需浓度 37.5 mg/mL的颗粒物悬液,超声震荡15 min后混匀,4℃冰箱存好备用[7]

(4)安全监管压力大。全省水上安全监管设施设备薄弱、数量不足,尚未达到交通运输部《海事船舶配备管理规定》配备标准。应急救援能力有待提升,现有搜救力量主要依靠各级海事、渔政部门公务船舶,尚无专业应急救援力量。安全监管信息化水平不高,前端感知设备设施建设有待完善,全省码头及船载视频1 515个,渡口码头和客渡船覆盖率仅为25%,未实现全覆盖,与安全立体监管需求不匹配。

1.3 实验动物分组及给药方法

48只雌雄参半SD大鼠(湖南中医药大学实验动物中心供应),体质量180~220 g,许可证号:SCXK(湘)2013-0004,SPF实验室适应性喂养1月半。采用随机数字表法分为3组,分别为生理盐水组、PM2.5染毒组、清霾饮干预组,每组16只。生理盐水组大鼠用气管滴注0.9%氯化钠溶液(1.5 mg/kg),染毒组用设定浓度的PM2.5生理盐水混悬液(1.5 mL/kg)进行气管滴注,清霾饮干预组首次染毒后即给以清霾饮(37.5 mg/kg)进行干预。染毒每周1次,共4次。

节水增粮行动项目规模化建设高效节水灌溉工程,覆盖范围广、资金投入大,涉及农民切身利益,能否长期运行发挥效益关系经济发展和社会稳定,因此项目建设过程必须要严格管控、建管并重,尤其是项目后期运行维护要严抓不怠。项目实施过程要加强督查指导,完善管理措施,确保工程质量;建成运行后要进一步完善工程运行管护机制,落实运行维护经费来源,配备专职人员对地下水水井、输水管线、微灌设施和电气化设备进行定期保养、维护和更新,保障节水增粮行动工程建设规范、使用便捷、管护得当、长期受益。

1.4 标本采集

在最后一次染毒48 h后,对大鼠用10%水合氯醛进行腹腔注射麻醉。先取腹主动脉血5 mL,3 000 r/min分离血清15 min(离心半径8 cm)。然后在大鼠主支气管处剪成小“V”形状,插入16号的灌胃针头,结扎固定,用PBS缓冲液3.5 mL反复灌洗2次肺部,共收集支气管肺泡灌洗液(BALF)10 mL,1 000 r/min离心10 min(离心半径8 cm),收取上清液放于-80℃冰箱保存。

1.5 指标检测

从1979年世界气候大会到2015年巴黎气候大会,中国的气候外交路线可划分为“跟随者”“参与者”“引领者”三个阶段,坚定发展中国家立场,落实减排目标责任,争取发展权益,有力地推动了全球气候治理进程。

1.6 统计学分析

全部数据均采用SPSS 21.0软件包进行统计分析。实验结果所有数据均采用“±s”表示,多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两比较方差齐者用LSD检验,方差不齐者用Dunnett’T3检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠支气管肺泡灌洗液中 AKP、LDH、MDA的变化

各组大鼠支气管肺泡灌洗液中AKP、LDH活力及MDA含量与生理盐水组BALF比较,PM2.5染毒组大鼠AKP、LDH活力及MDA含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与染毒组比较,给予清霾饮灌药后,干预组大鼠BALF中AKP、LDH活力及MDA含量均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结果如表1所示。

 

表1 肺灌洗液中生化指标测定结果 (±s,n=16)

  

注:与生理盐水组比较,*P<0.01;与染毒组比较,#P<0.01。

 

组别生理盐水组PM2.5染毒组清霾饮干预组F P AKP/U·L-1 0.25±0.14 0.60±0.10*0.43±0.11*#17.748 0.000 LDH/U·L-1 85.55±13.32 167.16±17.94*117.99±21.68*#37.092 0.000 MDA/nmol·mL-1 4.17±0.67 8.89±1.23*5.45±1.75#25.460 0.000

2.2 各组大鼠血清中MDA、SOD的变化

与生理盐水组血清比较,PM2.5染毒组大鼠血清中MDA含量明显升高(P<0.01),与染毒组相比,其干预组大鼠血清中MDA含量明显降低(P<0.01)。与生理盐水组相比,染毒组中SOD活力低于生理盐水组(P<0.01),与染毒组相比,干预组大鼠血清中SOD活力稍降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结果如表2所示。

 

表2 血清中生化指标测定结果 (±s,n=16)

  

注:与生理盐水组比较,*P<0.01;与染毒组比较,#P<0.01。

 

组别生理盐水组PM2.5染毒组清霾饮干预组F P MDA/nmol·mL-1 22.26±8.48 49.64±10.3*18.59±5.98#37.396 0.000 SOD/U·L-1 81.57±6.60 53.14±11.76*41.90±4.58*#40.693 0.000

3 讨论

近年来,人们日益重视大气PM2.5对健康的危害,许多科学家都专研大气颗粒物对机体的毒害机制,但是迄今为止仍不清楚确切的损伤机制。大气颗粒物对肺组织的损伤机制主要包括氧化损伤和炎性损伤这两大类。大气PM2.5进入机体后直接作用于呼吸道,损坏肺泡腔毛细血管膜、血管基底膜,变换或破损肺泡Ⅰ型、Ⅱ型细胞形态,改变细胞通透性,致使细胞内容物如各种蛋白、AKP、LDH等漏出[8]。AKP是反映肺泡Ⅰ型和Ⅱ型细胞受损程度的特异标志物[9]。LDH归属胞浆酶,来源于血液或肺损伤后组织渗漏,是细胞膜损伤的早期敏感指标,为细胞毒性标志物[10]。SOD能够抵制机体内的超氧阴离子损伤,MDA是细胞发生脂质过氧化反应的代表性产物[11],机体的抗氧化应激水平增加后,会增加体内的氧自由基,脂质过氧化产物MDA的含量也会增加,而超氧化物歧化酶SOD属于体内防止氧化自由基重要酶类,能制止脂质过氧化从而保护机体和组织,脂质过氧化物能够不可逆地损害细胞膜结构和功能,体内MDA的含量能反映机体的氧化应激水平,SOD反映机体抗氧化水平[12]。本研究显示,染毒组大鼠BALF中的AKP、LDH活力及MDA含量均高于生理盐水组,阐明PM2.5经过气管滴注的染毒形式能加大细胞通透性而使细胞酶渗出增多,并对肺泡上皮-毛细血管发生毒性作用,导致肺损伤,与刘平安等[7]研究结果一致。干预组大鼠BALF中的AKP、LDH活力及MDA含量比染毒组明显下降,干预组大鼠血清中MDA含量明显降低(P<0.05),揭示清霾饮干预对PM2.5引起的肺应激损伤有减轻作用。清霾饮干预组大鼠血清中SOD活力稍降低,考虑清霾饮只能轻量提高机体的抗过氧化水平(P<0.05)。这些结果都提示清霾饮干预对PM2.5引起的肺损伤有一定减轻作用。

李青海明白自己早晚要调离五棵树镇,那块为了套取国家粮食补贴虚报的土地和已被其占有的粮食补贴款成了他的心病。为了掩饰自己的违法行为,2014年6月,李青海指使他人篡改了该镇党委会会议记录,并与他人订立攻守同盟。之后,他急切想换一下工作环境,把已经实施的违法犯罪行为像翻书一样翻过去。不久后,他如愿以偿地调离五棵树镇,到洮南市任副市长,但恐惧如影随形,一直高兴不起来。2015年1月至2018年2月,他在填报《领导干部个人有关事项报告》时,故意隐瞒了其实际持有的房产,而且一有风吹草动便如惊弓之鸟。

[1]程丑夫.雾霾的中医认识与防治思路[J].湖南中医药大学学报,2014,34(5):1-5.

综上所述,本实验证明,清霾饮可拮抗细颗粒物PM2.5造成的呼吸道损伤,其保护性机制与其抗氧化性和抗炎性有关联,为清霾系列药膳产品的开发提供了新思路,可产生一定的社会和经济效益,对促进中医药膳事业发展有着重要意义,也是中医药现代化与标准化发展的需要。

[4]LOZANO R,NAGHAVI M,FOREMAN K,et al.Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010:a systematic analysis for the global burden of disease study 2010[J].Lancet,2012,380(9859):2095,2128.

如何利用中医药特有的优势有效防控PM2.5对大众健康的潜在影响已开始成为国民基本的民生需求之一。黄耀生[13]称雾霾的病性可解释为湿、浊,通常与风、寒、热之邪联合随口鼻侵犯身体。肺处上焦,为华盖,雾霾湿浊之邪侵入,首先侵袭肺系,肺失宣降发为咳嗽。中医认为雾霾伤肺的防治除了“避之有时”,做好防御措施外,更应提高机体抵抗能力,使“正气存内,邪不可干”。程丑夫[1]认为雾霾病机是寒热转化和损伤正气。清霾饮主要药理作用体现了“未病先防”和“已病防变”的思想,具有益肺、解毒利咽、抗炎、抑制肺损伤、调节免疫作用,对雾霾所致的肺系病有着防治和改善作用。清霾饮主要成分为红景天、桔梗、甘草、野菊花、山银花、鱼腥草、荷叶,本方由张仲景《伤寒论》“桔梗汤”加味而来。桔梗汤最早源于张仲景《伤寒论》311条:“少阴病,二三日,咽痛者,可用甘草汤。不瘥者,给桔梗汤”,后世又称“甘桔汤”(《小儿药证直诀》卷下)。桔梗辛苦且平,辛则散,苦则降,直入肺脏,宣肺止咳、祛痰排脓,故为君药;甘草甘平,泻火解毒、润肺化痰。二药合用,标本兼顾,能加强宣肺止咳、利咽解毒、祛痰排脓之功[14]。鱼腥草味辛而寒,专入肺经,具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋的功能,主要用于肺痈吐脓、痰热喘咳[15],以助君力,故为臣药。红景天,其“味甘性寒、归脾肺经,有润肺、清肺止咳、健脾益气之效”,拮抗长期活动引起的LDH活性升高,还可提高小鼠血浆中SOD活性和显著降低小鼠血浆中MDA含量,红景天有抑制肺组织中炎症因子表达,抗肺损伤作用,具有祛邪扶正之功[16-17],故为佐助药。野菊花和山银花属花类,且苦辛性寒,具有凉散风热、清热解毒功效,其黄酮类成分是目前国内外公认的具有抗氧化活性的成分之一,具有抗炎症、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、增强免疫及对内皮细胞和心肌细胞的抗氧化保护作用,减少氧化应激等多种药理活性[18-21],故为佐助药。荷叶苦涩性平,归肝、脾、胃经,具有清暑利湿、凉血止血等功效,用于暑热烦渴,脾虚泄泻,主要活性成分为黄酮类,具有抗氧化活性和抗炎性、抗衰老、抑菌等药理活性[22-23],有“善治痰者治其生痰之源”之意,亦为佐助药。生甘草其性甘寒,既可清热解毒、利咽祛痰以助君力而寓“甘桔汤”之意,又可调和诸药,故为佐使药。诸药合用,切合病机,随证加减,疗效显著[24]

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式中:r1表示系统总体牛鞭效应,是生产、再制造、订货的波动量方差与库存波动量方差之和与需求的波动量方差之比;r2表示正向渠道牛鞭效应,是常规生产、订货波动量方差之和与顾客需求的波动量方差之比;r3表示逆向渠道牛鞭效应,是再制造生产的波动量方差与需求的波动量方差之比,其中表示与式(6)中的C选取不一致,只选取再制造生产部分。

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乐视的主要收入归根到底来自其影视版权的收入,广告、终端业务、付费收入等皆是乐视影视版权收入的附加扩展影响的,乐视的多元化布局之下实际盈利模式还是依靠付费高清与广告收入为主,版权的购入已经占有了企业大量支出,但是上下游利润分割压榨,版权分销与用户业务收入带来的收入规模还是较小。

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支气管肺泡灌洗液和血清中生化指标的测定:测定支气管肺泡灌洗液中的碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)的活力及丙二醛(MDA)的含量,测定血清中的超氧化物歧化酶 (SOD)活力及丙二醛(MDA)的含量测定,采用南京建成生物制品研究所提供的测定试剂盒。按试剂盒说明书要求严格操作。

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[21]徐望龙,李云贵,孙林军,等.山银花黄酮粗提物抗氧化活性的体外观察[J].中成药,2014,36(6):1292-1294.

[22]周健鹏.荷叶化学成分和药理作用研究进展[J].天津药学,2014,26(2):65-68.

式中:I为城镇居民生活用电量;P为人口因素;A为财富因素;T为技术因素;α为模型系数;ε为误差项;b、c、d为影响因素的指数。

滚动轴承试验台如图2所示.滚动轴承类型及相关参数如表2所示.滚动轴承外圈、内圈及滚动体上所加工的故障如图3所示.根据表2相关参数及式(6)~式(8)滚动轴承故障特征频率计算公式得到试件的外圈、内圈及滚动体故障特征频率分别为fo=64.41 Hz,fi=95.38 Hz,fb=5.38 Hz.

[23]陈 曦,戚 进.荷叶中黄酮和生物碱的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(18):211-214.

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田珺,匡骁,赵群菊,刘蓉芳,蒋俊和
《湖南中医药大学学报》2018年第04期文献

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