更全的杂志信息网

应用鸟枪法LC-MS/MS鉴定烟粉虱唾液蛋白

更新时间:2009-03-28

烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)属于半翅目Hemiptera粉虱科Aleyrodidae,别名棉粉虱或甘薯粉虱,是典型的刺吸式口器昆虫。烟粉虱最早于1899年在希腊烟草上发现,随着全球气候变暖以及人类频繁贸易运输快速入侵到世界各地,现已广泛分布于除南极洲之外各大洲的90多个国家与地区。烟粉虱寄主广泛,可危害木薯、棉花、烟草、十字花科蔬菜以及一品红等园林花卉植物,是热带、亚热带与相邻温带地区的重要害虫(Perring,2001;Wang et al.,2005;De Barro et al.,2011)。烟粉虱是一个至少含有36个隐存种的复合群,其中Middle East Asia Minor 1(MEAM1)与Mediterranean(MED)隐存种具有很强的入侵能力。“超级害虫” MEAM1已被国际自然联盟列入全球100种最严重的入侵生物名单(Liu and Li,2012)。而MED烟粉虱具有较强的抗药性和寄主适应性,在一些蔬菜作物如番茄、辣椒、莴苣上的危害甚至比MEAM1更为严重,并在一些地方取代了MEAM1,成为当地唯一或主要的优势隐存种 (Chu et al.,2010)。国际重要学术刊物 Science和Nature曾对它们的危害进行详细报导 (Culotta et al.,1992;Dalton et al.,2006)。

烟粉虱对植物的危害方式主要有直接取食危害,诱发植物生理异常,排泄蜜露引起煤污病以及传播多种植物病毒 (Oliveira et al.,2001;Inbar et al.,2008)。作为刺吸式口器害虫,烟粉虱对植物的危害与其取食过程中分泌的唾液密切相关(Su et al.,2012;Yan et al.,2016)。分析烟粉虱的唾液组分,鉴定唾液中重要蛋白类物质,有助于推动烟粉虱-植物互作机制的研究。深入阐明唾液组分在烟粉虱致害过程中的分子机理,对于农业害虫的有效防治乃至植物与昆虫之间的协同进化关系的研究,都具有十分重要的意义。

半翅目昆虫的刺吸式口器以及它们的取食策略决定了其唾液成分的复杂性(Zhu et al.,2016)。半翅目昆虫唾液可分为胶状唾液(gel saliva)和水状唾液(watery saliva)。胶状唾液主要起到保护和润滑口针的作用,水状唾液具则有消化韧皮部营养物质、分解植物体内有毒物质、破坏植物防御系统以及传播病毒等功能。由于水状唾液功能的复杂性与重要性,蚜虫、飞虱、粉虱、叶蝉、蝽类等半翅目昆虫的唾液蛋白研究一直是热点。但目前的研究主要是通过唾液腺转录组分析预测分泌蛋白(Matsumoto et al.,2014;Li et al.,2016),通过质谱的方法鉴定小型半翅目昆虫唾液蛋白组分的研究仅见于蚜虫和褐飞虱等少数几个刺吸式植食性昆虫中 (Carolan et al.,2011;Huang et al.,2016)。

由于烟粉虱个体微小,成虫体长仅约0.8-1 mm(Liu et al.,2012),远不及蚜虫和褐飞虱的大小,收集足量唾液并非易事,迄今为止尚未有收集烟粉虱唾液进行蛋白鉴定的研究。在本研究中我们改进了双层膜饲喂装置以及人工饲料,收集到了足量的烟粉虱唾液,利用高精度质谱以及液质联用分析,结合烟粉虱基因组和转录组的序列比对鉴定出了多种烟粉虱唾液蛋白,证明了通过高精度质谱鉴定烟粉虱唾液蛋白的可行性。

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

烟粉虱MED隐存种(mtCOI GenBank Accession No. GQ371165)于2009年采集于浙江宁波的辣椒植株上,现在人工气候室中以棉花为寄主继代培养。人工气候室内设定参数:温度27℃±1℃,相对湿度70%±10%,光照周期L ∶D=14 h ∶10 h。棉花品种为浙棉1793(浙江大学作物科学研究所提供)。为保证烟粉虱MED种群纯度,每隔3代(约两个月)随机抽取30-50头烟粉虱利用mtCOI-RFLP方法结合mtCOI基因测序鉴定种群纯度(秦丽等,2013)。

  

图1 改良型烟粉虱唾液收集装置Fig.1 Whitefly saliva collecting device improved

1.2 唾液收集

在本实验室已有的饲喂装置的基础上,设计了改良型的烟粉虱唾液收集装置,以使其能够盛放更多的饲料并容纳更多的烟粉虱(图1)。在改良的烟粉虱唾液收集装置上端开口处蒙上双层Para膜,双层膜之间含有600 μL人工饲料(10%蔗糖水)。收集装置、Para膜及人工饲料经过无菌处理,覆膜过程均在无菌台中操作。共约3万头不同龄期的MED烟粉虱被释放到60个唾液收集装置中,每个装置中容纳约500头烟粉虱进行取食,用透气纱布对锥形瓶的侧面开口处进行封口。将锥形瓶置于人工气候室的温湿度条件下进行饲喂。24 h后用1 mL无菌注射器收集含有唾液的人工饲料。

1.3 LC-MS/MS样品前处理

在收集的含有唾液的人工饲料中加入等体积的SDS-Tris溶液(2% SDS,10 mM Tris-HCl,pH 8.0),混匀后沸水浴10 min以变性蛋白。用3 kDa的超滤离心管(美国Millipore公司)将样品浓缩至终体积300 μL。在浓缩样品中加入200 μL SDT溶液(4% SDS, 100 nM DTT, 150 mM Tris-HCl, pH8.0),沸水浴15 min后18000g室温离心15 min。收集样品上清,取少量进行BCA法定量。取处理后的样品蛋白质20 μg,向其中加入5×上样缓冲液,沸水浴5 min后进行12.5% SDS-PAGE电泳(恒流14 MA, 90 min),而后进行考马斯亮蓝染色,拍照。浓度的唾液蛋白采用FASP(Filter Assisted Smple Peparation) 法对样品进行Trypsin酶解(Wis' niewski et al.,2009)。取200 μL样品,加入DTT至终浓度为100 mM,沸水浴5 min,冷却至室温。加入200 μL UA buffer (8 M Urea,150 mM Tris HCl pH8.0)混匀,转入10 kDa超滤离心管,离心14 000 g 15 min。再加入200 μL UA buffer 离心14 000 g 15 min,弃滤液。加入100 μL IAA(50 mM IAA in UA),600 rpm振荡1 min,避光室温30 min,离心14 000 g 10 min。再加100 μL UA buffer,离心14 000 g 10 min 重复2次。加入100 μL酶解覆盖液(25mM NH4HCO3,10% 乙腈),离心14 000 g 10 min重复2次。加入40 μL Trypsin buffer (0.1 μg/μL Trypsin的酶解覆盖液),600 rpm振荡1min,37 ℃16-18h。换新收集管,离心14 000 g 10 min,收集滤液。肽段收集冻干后使用0.1%甲酸水溶液复溶,使用OD280进行肽段定量。

1.4 LC-MS/MS分析

取酶解后产物进行LC-MS/MS液质联用分析。采用纳升级流速 HPLC 液相系统Easy-nLC对样品进行分离。所用缓冲液:A液为 0.1%甲酸水溶液,B液为0.1%甲酸乙腈水溶液(乙腈为84%)。色谱柱以95%的A液平衡。自动进样器上样,先经上样柱EASY column(2 cm*100 μm 5 μm-C18,Thermo scientific),再经分析柱EASY column(75μm*100mm 3 μm-C18,Thermo scientific)分离,流速300 nL/min。相关液相梯度:0-50 min,B液线性梯度0-35%;50-55min,B 液线性梯度从35%到00%;55-60 min,B液维持在100%。

由于烟粉虱唾液蛋白功能的多样性以及在研究昆虫—植物互作之间的重要性,利用质谱首次鉴定到唾液蛋白是研究烟粉虱—植物互作过程中的一大进展。同时,也需要进一步地完善试验,以收集和鉴定到更多的可能存在于唾液中的重要的低丰度蛋白。配置含有不同物质以及浓度的人工饲料,比较饲料成分对烟粉虱唾液分泌的影响也是需要关注的问题。通过质谱鉴定烟粉虱唾液蛋白,并深入研究其在危害植物过程中的作用,可以帮助我们找到一些靶标蛋白或是有效的植物次生代谢物质,可为烟粉虱的防治提供有效的新对策。

Liu SS,Colvin J, De Barro PJ. Species concepts as applied to the whitefly Bemisia tabaci systematics: How many species are there? [J]. Journal of Integrative Agriculture, 2012, 11(2): 176-186.

对于公民来说,有了成文的水法,并不意味着可以滥用法律赋予的权力,也不意味着其应有的权利可以得到保障,权利得到实现和维护的前提是依法办事,必须遵循正当的法律程序。以水行政过程中的行政处罚为例,水行政处罚机关在作出水行政处罚决定之前,在告知当事人处罚的事实、理由、依据和拟作出的水行政处罚决定时,当事人有权进行陈述和申辩。在符合《水行政处罚实施办法》第34条规定的情况下,当事人有要求听证的权利,在进行听证时,当事人应遵守《水行政处罚实施办法》第40条权利义务的规定等等。在处罚机关的行政处罚作出后,当事人对水行政处罚决定不服的,可以依法申请行政复议或者提起行政诉讼,依法维护自己的合法权益。

1.影响利润。增值税与营业税的不同在于:营业税是价内稅,增值税为价外稅。换言之营业税的合同金额包括商品原价与应缴纳税额;而增值税的合同金额则将原价与应缴纳税额分开。因此,在会计核算时由于增值税可抵扣进项税,从而影响账面金额,因此将会对企业利润产生一定的影响。

1.5 质谱数据分析及蛋白鉴定

下机后产生的原始数据去除低质量标签后,用Maxquant 1.3.0.5.2软件检索数据库。所选蛋白数据库包括MED烟粉虱全身转录组预测蛋白库和MED烟粉虱唾液腺转录组预测蛋白库。搜库参数设定为enzyme:Trypsin;missed cleavage sites:2;固定修饰为Carbamidomethyl(C); 动态修饰设定 Oxidation(M)和Acetyl(Protein N-term)。数据库检索FDR ≤0.01,鉴定蛋白进行信号肽分析软件为SignalP 4.1 Server(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)。

2 结果与分析

2.1 烟粉虱唾液蛋白收集与样品检测

  

图2 SDS-PAGE分析烟粉虱唾液蛋白Fig.2 SDS-PAGE analyzes whitefly saliva

为提高唾液收集的效率,本研究改进了烟粉虱唾液收集装置(图1)。经反复实验本研究发现烟粉虱唾液收集装置的双层膜覆盖方法对唾液收集影响较大,下层膜覆盖时需紧绷并尽量薄,以利于烟粉虱口器刺探,上层膜则需要一定的厚度以防止破裂。通过图1所述的饲喂装置,共收集了烟粉虱的唾液约60 mL。样品浓缩后利用BCA法测得蛋白浓度约为1.698 μg/μL,浓缩后样品中蛋白总量为509.4 μg。为检测浓缩后唾液蛋白的质量,利用SDS-PAGE对烟粉虱唾液蛋白进行了分析。如图2所示,唾液样品的蛋白质考染条带丰富、清晰,表明唾液蛋白在收集及处理过程中未发生明显的损失和蛋白降解。根据蛋白条带的分布情况,发现烟粉虱的唾液蛋白主要集中在20 kDa-70 kDa范围内,而小于20 kDa以及大于70 kDa的蛋白条带较淡且较少。以上数据表明烟粉虱唾液中蛋白含量丰富,收集的唾液蛋白样品质量较高,可以满足后续实验的要求。

参考文献(References)

中国改革开放40年来取得的巨大减贫成就,既内含着特定的时空因素和中国独特的政治制度与治理体系的影响,也形成了一些可与其他国家分享的经验。中国减贫经验中可复制、可分享和可持续的部分,应该成为中国未来减贫和世界减贫事业的重要知识财富。本文主要从扶贫者(政府)视角,基于官方公开数据,总结改革开放40年来中国农村扶贫开发所取得的成就,讨论和分析中国农村减贫的基本经验及其对世界减贫事业的意义。

2.2 LC-MS/MS分析与唾液蛋白鉴定

样品通过液相色谱分离后各个成份逐一到达QE二级质谱进行鉴定,质谱的Basepeak峰图见于图3。从图中可看出,整个样品经过液相色谱的高效分离后,在质谱中鉴定到的蛋白数量与丰度较大。下机后的原始质谱数据利用Maxquant软件鉴定共得到223条肽段,搜库筛选得42个唾液蛋白,其中包括36条MED烟粉虱全身库中的蛋白序列和6条MED烟粉唾液腺主腺转录组库中的蛋白序列(表1)。在所有搜库得到的唾液蛋白中,约30%的唾液蛋白含有两个以上的唯一肽段(Unique peptide)。对所有鉴定的唾液蛋白进行信号肽预测,发现仅有4个蛋白含有信号肽序列。以上这些数据表明,我们通过上述质谱方法得到的肽段数量多,鉴定得到的烟粉虱唾液蛋白种类丰富。

 

表1 烟粉虱唾液蛋白鉴定

 

Table 1 Identification of whitefly salivary proteins

  

蛋白编号ProteinID注释Annotation唯一肽段Uniquepeptide信号肽SignalPBtQ31455ABCprotein1NBtQ12880ADP/ATPtranslocase1NBtQ12893ATPsynthasesubunitbeta2NBtQ27926ATPsynthasesubunital-pha2NBtQ29807Cytoplasmaticactin7NBtQ39558Dsor11NBtQ32039Elongationfactor1alpha2NBtQ773401EukaryoticADP/ATPcarrier1NBtQ19451Heatshockprotein70isoform11NBtQ37494Kinesin-likeprotein1NBtQ41637Phosphoglyceratekinase1NBtQ37227PlasmamembranecalciumATPase1NBtQ41055Putativecalcineurinb22NBtQ110RibosomalproteinL341NBtQ31112RibosomalproteinS19e1YBtQ504631Ribulose-1,5-bisphos-phatecarboxylase1NBtQ30747Sodium/potassium-transportingATPasesubunitalpha4NBtQ33188Tubulinalpha-1chain4NBtQ29971Tubulinbetachain7NBtQ37304Tubulin,beta2C-like1NBtQ32116Tyrosine-proteinphospha-tase1NBtQ283710Ubiquitin/ribosomalpro-teinL40fusionprotein1NBtQ2462414-3-3epsilon1NBtQ10573Uncharacterizedprotein1NBtQ1063Uncharacterizedprotein1NBtQ15890Uncharacterizedprotein1NBtQ195Uncharacterizedprotein1NBtQ212Uncharacterizedprotein1NBtQ23324Uncharacterizedprotein1NBtQ24218Uncharacterizedprotein1NBtQ28451Uncharacterizedprotein1NBtQ29898Uncharacterizedprotein6YBtQ30592Uncharacterizedprotein1Y

续上表

  

蛋白编号ProteinID注释Annotation唯一肽段Uniquepeptide信号肽SignalPBtQ34989Uncharacterizedprotein1NBtQ35314Uncharacterizedprotein1NBtQ35588Uncharacterizedprotein1NBtQ37993Uncharacterizedprotein1YBtQ38930Uncharacterizedprotein1NBtQ40870Uncharacterizedprotein1NBtQ9284Uncharacterizedprotein2NBtQ935Uncharacterizedprotein4NBtQ795Uncharacterizedprotein9N

2.3 烟粉虱唾液蛋白注释与功能分析

在鉴定得到的42个烟粉虱唾液蛋白中,有23个蛋白为有功能注释的蛋白,而剩余约45%的唾液蛋白为功能未知的蛋白。与蚜虫的唾液蛋白质组比较发现,烟粉虱唾液蛋白中含有多种功能相近的蛋白,例如ATP合成酶、ADP/ATP转移酶、磷酸甘油酸激酶、核酮糖二磷酸羧化酶、热激蛋白70,14-3-3蛋白、延伸因子1、核糖体蛋白、肌动蛋白、微管蛋白、泛素蛋白(Chaudhary et al.,2015;Harmel et al.,2008;Rao et al.,2013)。值得注意的是烟粉虱和蚜虫唾液中都发现多种与能量代谢有关的酶,如ATP合成酶、ADP/ATP转移酶、磷酸甘油酸激酶等,推测其可能参与植物中某些耗能反应,但这些昆虫唾液中的酶在进入植物组织后所行使的功能有待进一步研究。此外,核糖体蛋白、肌动蛋白、微管蛋白等一些维持细胞功能的基本蛋白也存在于多种刺吸式昆虫的唾液中(Huang et al.,2016),推测其可能参与维持被穿刺细胞存活,以利于刺吸式口器昆虫的取食。有趣的是,在烟粉虱的唾液中发现了与蛋白磷酸化有关的酶,如14-3-3蛋白和络氨酸蛋白磷酸激酶。由于蛋白磷酸化在植物信号传导中的重要作用,推测这些蛋白可能参与刺吸式昆虫对植物防御信号途径的调控。然而,在鉴定的唾液蛋白中仍存在大量功能未知的蛋白,这些蛋白也可能发挥着重要的作用。

  

图3 LC-MS/MSBasepeak 质谱图谱Fig.3 Basepeak mass spectrogram of LC-MS/MS

3 结论与讨论

3.1 烟粉虱唾液成份的复杂性

本研究收集了大量烟粉虱唾液样品,结合液相色谱与QE高精度质谱,采用LC-MS/MS对唾液样品进行首次蛋白鉴定,共获得42个烟粉虱唾液蛋白质。其中多种唾液蛋白普遍存在于刺吸式口器昆虫的唾液中。本研究证实了利用改良的唾液收集装置收集小型昆虫唾液并进行质谱分析的可行性,为今后研究烟粉虱唾液中重要分泌蛋白的功能提供了基础。

烟粉虱分泌胶状唾液形成唾液鞘,具有保护口针和封闭穿刺伤口的作用,而水状唾液的功能多样,主要包括体外消化,解毒作用,以及调控植物防御反应。在本研究中,主要鉴定的是烟粉虱的水状唾液。从实验结果来看,烟粉虱唾液中的蛋白组分十分丰富,尤其是在20-70 kDa范围内的蛋白含量较高,类似的现象在蚜虫唾液蛋白的质谱分析中也有发现(Chaudhary et al.,2015)。但是有研究表明,蚜虫唾液中大于10 kDa的唾液组分不能诱导拟南芥的抗虫性,而小于10 kDa的蛋白则显著的激活拟南芥对蚜虫的抗性(De et al.,2009)。虽然烟粉虱和蚜虫中小分子量的唾液蛋白含量较低,但是这些唾液蛋白可能在昆虫与植物的互作过程中发挥着重要的作用,因此,对烟粉虱小分子量唾液蛋白的收集和鉴定有待进一步的尝试。

刺吸式植食昆虫的唾液中还含有一类在昆虫-植物互作中起作用,并能显著影响昆虫取食行为的蛋白,即效应因子蛋白。这是一类种类丰富,进化较快的重要唾液蛋白。目前对半翅目的效应因子的研究较少,已发现的仅有蚜虫C002、Armet、Mp10、Me23以及褐飞虱中的NlSEF1等。在本研究的质谱数据中未鉴定到蚜虫与褐飞虱唾液中已知的效应因子,这可能是由于唾液效应因子的进化速度快(Carolan et al.,2011;Hogenhout et al.,2009),烟粉虱形成了自己特异的取食策略。在鉴定得到的蛋白中含有大量的功能未知蛋白,这些蛋白可能参与烟粉虱与植物的互作,其蛋白功能与分子机制值得我们深入研究和探索。

3.2 烟粉虱唾液蛋白研究中待解决的问题

其次,教师除了在平时对学生进行鼓励以外,还要让学生自身形成良好的自我鼓励模式。当遇到困难的时候应该鼓励自己,树立良好的自信心,并勇敢的投入到英语口语学习挑战中。学生的自我勉励对于提高口语交际能力有着极为重要的功效,教师应当让学生正确面对口语学习的过程。此外,教师还可以在平时,多去了解学生,通过谈心的方式,引导学生突破心理困境。

红细胞分布宽度(RDW)是一种反映外周血红细胞大小离散程度的指标。大量研究表明,RDW可作为心血管疾病危险分层和预后评估的标志物[11]。左房内径扩大是快速性心律失常的独立危险因素[12-13]。赵强等[14]的研究显示,快速性心律失常患者RDW与左房内径呈正相关,随着RDW的增大,左心室舒张末内径及左房内径均增大。氧化应激也会导致RDW升高[15]。而左房内径增大会导致心房结构性重构,进而引起心功能不全。

Liu YQ, Liu SS. Species status of Bemisia tabaci complex and their distributions in China [J]. Journal of Biosafety, 2012, 21(4): 247-255. [刘银泉, 刘树生. 烟粉虱的分类地位及在中国的分布[J]. 生物安全学报, 2012, 21(4): 247-255]

Bretschneider A, Heckel DG, Vogel H. Know your ABCs: Characterization and gene expression dynamics of ABC transporters in the polyphagous herbivore Helicoverpa armigera[J]. Insect Biochemistry and Molecular Biology, 2016, 72: 1-9.

Culotta E. “Superbug” attacks california crops [J]. Science, 1992, 254(5037): 1445.

Chu D, Wan FH, Zhang YJ,et al. Change in the biotype composition of Bemisia tabaci in Shandong Province of China from 2005 to 2008 [J]. Environmental Entomology, 2010, 39(3): 1028.

Carolan JC, Caragea D, Reardon KT, et al. Predicted effector molecules in the salivary secretome of the pea aphid (Acyrthosiphon pisum): A dual transcriptomic/proteomic approach [J]. Journal of Proteome Research, 2011, 10(4): 1505-1518.

Chaudhary R,Atamian HS, Shen Z, et al. Potato aphid salivary proteome: Enhanced salivation using resorcinol and identification of aphid phosphoproteins [J]. Journal of Proteome Research, 2015, 14(4): 1762.

Dalton R. Whitefly infestations: The Christmas Invasion [J].Nature, 2006, 443(7114): 898-900.

De VM,Jander G. Myzus persicae (green peach aphid) salivary components induce defence responses in Arabidopsis thaliana [J]. Plant Cell and Environment, 2009, 32(11): 1548-1560.

De Barro PJ, Liu SS, Boykin LM, et al. Bemisia tabaci: A statement of species status [J]. Annual Review of Entomology, 2011, 56(1): 1.

Harmel N, Létocart E, Cherqui A, et al. Identification of aphid salivary proteins: A proteomic investigation of Myzus persicae [J]. Insect Molecular Biology, 2008, 17(2): 165-174.

Hogenhout SA, Ra VDH, Terauchi R, et al. Emerging concepts in effector biology of plant-associated organisms [J]. Molecular Plant-Microbe Interactions, 2009, 22(2): 115.

Huang HJ, Liu CW, Huang XH,et al. Screening and functional analyses of Nilaparvata lugens salivary proteome [J]. Journal of Proteome Research, 2016, 15(6): 1883.

Inbar M, Dan G. Plant-mediated interactions between whiteflies, herbivores, and natural enemies [J]. Annual Review of Entomology, 2008, 53 (53): 431-448.

1.附加型的共享税模式,即中央和地方分别就某特定商品具有独立的消费税征收权。在中央政府统一课税后,地方政府以一定税率附加课税,收入归课税主体所有。在美国,联邦政府对烟、酒、燃料类商品征收统一的消费税,所有州政府也对烟、酒、燃料类商品独立地加征消费税,根据各州具体的税收政策不同,适用的税率亦有差异,中央和地方都配置完整的税权。但这一模式只能适合在财政分权彻底,地方税权较大的联邦制国家中实施。并且,地方政府在消费税的具体税收政策上存在差异,由此可能产生政府间纵向和横向税收政策的矛盾,诱发相应的税收竞争。[22]

大型民企借钱越来越难,中小民企更是难上加难。“我们公司规模小,除了用土地、厂房、设备等做抵押担保以外,银行还要求我用家庭资产甚至个人财产做担保,才能批给我贷款,‘有限责任’变成了‘无限责任’。”某农业设备公司负责人何森说。

肽段经色谱分离后使用Q-Exactive质谱仪(Thermo Scientific)进行质谱分析。分析时长:60 min;检测方式:正离子;母离子扫描范围:300-1 800m/z;一级质谱分辨率:70 000 at m/z 200; AGC target:3e6;一级Maximum IT:50 ms;多肽和多肽碎片的质量电荷比按照下列方法采集: 每次全扫描(full scan)后采集20个碎片图谱(MS2 scan),二级质谱分辨率:17 500 at m/z 200,Microscans:1,Isolation window: 2 m/z,二级 Maximum IT: 60 ms,MS2 Activation Type:HCD,Normalized collision energy:27 eV,Dynamic exclusion:60.0 s,Underfillratio:0.1 %。

Li Z, An XK, Liu YD,et al. Transcriptomic and expression analysis of the salivary glands in white-backed planthoppers, Sogatella furcifera [J]. PLoS ONE, 2016, 11(7): e0159393.

Rao SA, Carolan JC, Wilkinson TL. Proteomic profiling of cereal aphid saliva reveals both ubiquitous and adaptive secreted proteins [J]. PLoS ONE, 2013, 8(2): e57413.

Oliveira M,Henneberry TJ, Anderson P. History, current status, and collaborative research projects for Bemisia tabaci [J]. Crop Protection, 2001, 20(9): 709-723.

Perring TM. the Bemisia tabaci species complex [J]. Crop Protection, 2001, 20(9): 725-737.

QL,Wang J, Bing XL, et al. Identification of nine cryptic species of Bemisia tabaci ( Hemiptera: Aleyrodidae) from China by using the mtCOI PCR-RFLP technique [J]. Insect Science, 2013, 64(2): 186-194. [秦丽, 王佳, 邴孝利, 等.利用 mtCOI PCR-RFLP 技术鉴定中国境内九个烟粉虱隐种 [J] . 昆虫学报,2013, 64(2): 186-194]

Matsumoto Y,Suetsugu Y, Nakamura M, et al. Transcriptome analysis of the salivary glands of Nephotettix cincticeps (Uhler) [J]. Journal of Insect Physiology, 2014, 71: 170-176.

专家先看病理报告后看片,看了足足有十分钟,这才放下片子下结论对老婆说:他什么都没有。老婆愕然:他什么都没有?那他为什么咳嗽气喘?专家说:可能是气候变冷造成的,也有可能是吃什么过敏造成的。我插嘴说:不能吧?我以前从来没得过这种病呀?再说我最近也没吃什么呀?专家说:以前没得过的病,不代表你今后不得;以前吃某种食品不过敏,不代表你今后吃这种食品也不过敏。老婆问:医生,那得给他打点儿什么药?专家说:不用滴流,吃点儿口服药就行。说着,就开了两副药,一副是化痰止咳胶囊、一副是罗红霉素片。

Su YL, Li JM, Li M,et al. Transcriptomic Analysis of the salivary glands of an invasive whitefly [J]. PLoS ONE, 2012, 7 (6): e39303.

大梁又喑了。半天才说:“我还是觉得不靠谱。狼剩儿是东洋人带大的,兴许连中国话都不会讲,那你么样认得他?”

Wang FH, Zheng XB, Guo JY. Biology and Management of Invasive Alien Species in Agriculture and Forestry [M]. Beijing: Science Press, 2005: 69-128. [万方浩,郑小波,郭建英. 重要农林外来入侵物种的生物学与控制 [M]. 北京:科学出版社, 2005: 69-128]

Wis'niewski JR, Zougman A, Nagaraj N, et al. Universal sample preparation method for proteome analysis [J]. Nature Methods, 2009, 6 (5): 359-362.

Wang XW, Li P, Liu SS. Whitefly interactions with plants [J]. Current Opinion in Insect Science, 2017, 19:70-75.

总之,田子坊内挪移了国外多国和国内多地的民俗文化。这里以本地,包括吴越文化圈内的各种民俗(如油纸伞或丝绸,或旧时的化妆品)为底色,增添了一些突兀的外地如苗族和藏族文化元素,以及全国各地已经旅游商品化了的特色小吃。而符合当下中国人心理,能够代表时尚前沿和奇风异俗的外国民俗,也充斥其中。这种文化往往充当一种对异文化的体验而被接受。如前述各国特色风味餐厅和小饰品或玩偶,对于国人,尤其是当下已经广泛接触西方文化而具有开放包容心态的年轻人来说,会在产生新鲜感和好奇心之后进行消费。

与会专家表示,企业首先要做好全球供应链评估与市场多元化,其次加强技术性贸易壁垒的行业应对,还要积极参与贸易救济调查。同时要抓住结构性的机会,例如中国和印度市场消费升级蕴藏巨大机会,如中国的全自动烘干机、烤箱、洗碗机市场以及印度的冰箱、全自动洗衣机、空调市场都将快速成长。智能产品的出口也有很大潜力。中国企业还可以在欧洲、中东非地区寻找并购机会,拓展市场;同时可以在物联网、人工智能、机器人、云计算、增强现实/虚拟现实等领域开展合作或收购,从而增强自身的技术实力。

Yan Y, Zhang HJ, Yang YT,et al. Plant defense responses induced by Bemisia tabaci Middle East—Asia Minor 1 salivary components [J]. Entomologia Experimentalis et Applicata, 2016, 159(3): 287-297.

作为一个工程设计人员,绝大多数的工作时间都是在和图纸与规范打交道,在和同事的沟通中也是以交流技术问题为主。而对于技术问题,绝大多数都是有一个绝对正确的答案的。在沟通中,决定说服与被说服的,其实很简单,就是看你掌握的相关知识是否丰富。加之自己比较内向的性格,可想而知,我的沟通能力是比较差的,单纯的动之以情、晓之以理的技巧性说服,在平时的工作和生活中并不多。

Zhu YC, Yao J, Luttrell R. Identification of genes potentially responsible for extra-oral digestion and overcoming plant defense from salivary glands of the tarnished plant bug (Hemiptera: Miridae) using cDNA sequencing [J]. Journal of Insect Science, 2016, 16(1): 60.

 
邵若玄,徐红星,刘树生,王晓伟
《环境昆虫学报》 2018年第02期
《环境昆虫学报》2018年第02期文献

服务严谨可靠 7×14小时在线支持 支持宝特邀商家 不满意退款

本站非杂志社官网,上千家国家级期刊、省级期刊、北大核心、南大核心、专业的职称论文发表网站。
职称论文发表、杂志论文发表、期刊征稿、期刊投稿,论文发表指导正规机构。是您首选最可靠,最快速的期刊论文发表网站。
免责声明:本网站部分资源、信息来源于网络,完全免费共享,仅供学习和研究使用,版权和著作权归原作者所有
如有不愿意被转载的情况,请通知我们删除已转载的信息 粤ICP备2023046998号