近年来，随着养牛业的发展，牛呼吸道疾病综合征(BRDC)流行普遍、发病严重，给养殖业及养殖户造成巨大的损失。BRDC俗称运输热，是由多种病毒、细菌单独或混合感染引起的肺炎、支气管炎等疾病的统称，在机体健康状态低下、环境刺激或应激条件下引起严重的临床症状[1-2]。通常发生于犊牛、新引进的育肥牛群。

2017年6月，江苏一肉牛养殖户从北方某省购入40余头肉牛，经长途运输到达，饲养10余天后陆续发病，使用多种药物治疗无效，发病20多天内死亡8头。发病牛多精神沉郁、食欲减退，主要表现为发热、咳喘、流浆液性及脓性鼻涕等呼吸道症状，并伴有腹泻。急性病例突然倒地，口鼻流出白色泡沫，迅速死亡。通过临床症状、病理变化观察、细菌学及病毒学检测、药敏试验等，对感染病原进行分析，并据此提出防治措施。

Research on seismic performance of frame rocking wall structure based on SAP2000

1 材料与方法

1.1 主要试剂

RNA提取试剂TransZol Up、EasyTaq DNA聚合酶、一步法RT-PCR试剂盒、DNA分子量标准DL2000 plus购自北京全式金生物科技有限公司；DNA提取试剂盒购自康为世纪生物科技有限公司；血平皿、麦康凯平皿、药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司；其他试剂均为国产分析纯。

《方案》提出，要坚持扶贫开发与生态保护并重，采取超常规举措，通过实施重大生态工程建设、加大生态补偿力度、大力发展生态产业、创新生态扶贫方式等，切实加大对贫困地区、贫困人口的支持力度，推动贫困地区扶贫开发与生态保护相协调、脱贫致富与可持续发展相促进，使贫困人口从生态保护与修复中得到更多实惠，实现脱贫攻坚与生态文明建设“双赢”。到2020年，贫困人口通过参与生态保护、生态修复工程建设和发展生态产业，收入水平明显提升，生产生活条件明显改善。

1.2 病理变化观察

剖检病死牛，观察各脏器病变情况。

1.3 细菌学检查

机器人的位姿估计是移动机器人要实现自主导航的一个重要环节。移动机器人的位姿是指移动机器人的位置和姿态，需要解决移动机器人定位和姿态获取问题。

BRDC对我国养牛业影响巨大，我们需要立足国情，借鉴国外防控经验，制定合理的防控策略；同时开展系统研究，开发有效的疫苗和诊断制剂，以保障我国养牛业的健康发展。

1.3.2 细菌的基因序列测定

挑取纯化的菌落，采用16S rRNA通用引物进行菌落PCR扩增， 预期扩增片段为1 500 bp。引物序列如下：F:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；R：5′-GGWTACCTTGTTACGACTT-3′。反应体系为20 μL：10×Easy Taq buffer 2 μL，上、下引物各为1 μL，dNTPs 2 μL，Easy Taq 0.25 μL， ddH2O 13.75 μL。反应条件为：94 ℃预变性5 min；94 ℃循环变性30 s，54 ℃退火复性30 s，72 ℃延伸1 min 30 s，进行35个循环；72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。扩增后PCR样品于10 g/L琼脂糖凝胶中电泳。凝胶用核酸染料染色，紫外线透射观察。用琼脂凝胶回收试剂盒将PCR扩增产物回收后，送南京金斯瑞生物科技有限公司进行测序。

1.3.3 药敏试验

这样的文字的确能给人想象的空间，她是要向恩师表达自己内心的爱慕之情吗？是不是已有家室的胡适，冷静及时地制止了学生在感情上的延伸？还是怕他们之间的交往连累了恩师？

根据流行病学、临床症状、病理观察和实验室检测，综合判定为BVDV、BPIV3和大肠杆菌的混合感染。

1.4 病毒检测

1.4.1 核酸的提取

分别取200 μL血液、鼻拭子、气管黏液样品，加入800 μL TransZol Up，振荡混匀，室温静置5 min。加入200 μL氯仿，剧烈震荡30 s，室温静置3 min。12 000 r/min、4 ℃离心15 min。转移上层水相于新的离心管中，加入等体积(600 μL)异丙醇，颠倒混匀，室温孵育30 min。12 000 r/min、4 ℃离心10 min。去上清，加入500 μL 无水乙醇洗涤，12 000 r/min，4 ℃离心 5 min。弃上清，室温干燥10 min。取40 μL RNA溶解液溶解核酸。

剖检病牛进行病变观察，结果：胃、肠发生以水肿、充血、溃疡为特征性的病变；肺部可见实质性病变，实变区域颜色加深，呈斑块状分布，且与胸腔壁粘连；气管内充满大量白色泡沫状分泌物，心包积液，胆囊肿大，约为正常的2～3倍；其他脏器未见异常。

1.3.1 镜检

1.4.2 PCR和RT-PCR扩增

染色后镜检可见大量革兰阴性杆菌。挑取单菌落接种麦康凯培养基可见粉红色菌落。菌落PCR后电泳结果显示，得到的扩增的核苷酸片段与预期结果大小相符。测序表明，该菌株16S rRNA基因部分序列与大肠杆菌相符。

表1 病毒检测所需引物

检测病原引物名称序列(5′→3′)片段大小/bp退火温度/℃BVDVFATGCCCWTAGTAGGACTAGGARTCAACTCCATGTGCCATGTAC28954BPIV3MFGCAATCCACCAAAGCATGGGGTMRGGGGCAAGTGCTACTTTTTGAGCA32950BEFVBEFFAGAGCTTGGTGTGAATACBEFRCCAACCTACAACAGCAGATA42048IBRVTKFTGGTACGGACGCCTTAAGTGGTKRGTTGATCTCGCGGAGGCAGTA29863

2 结果与分析

2.1 病理变化

同时使用DNA提取试剂盒按照说明书提取血液、鼻拭子、气管黏液样品中的DNA。

2.2 细菌学检查

分别使用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛流行热病毒(BEFV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)引物进行RT-PCR或PCR检测。引物序列如表1所示。一步法RT-PCR与PCR反应均参照北京全式金生物科技有限公司相关试剂说明书进行。取PCR产物于1%琼脂糖凝胶电泳测定。

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M.DL2000 plus DNA Maker；1. 菌落样品；2. 阴性对照

图1 菌落检测结果

2.3 药敏试验

结果显示此菌耐药性较强，仅对丁胺卡那与氟苯尼考轻微敏感；对青霉素、恩诺沙星、头孢曲松、庆大霉素、阿奇霉素、阿莫西林和克林霉素耐药。

2.4 病毒检测

结果显示，所有样品均检测到BVDV为阳性(图2)，在鼻拭子和气管黏液样品检测出BPIV3为阳性(图3)，实际扩增大小与预期大小相符合，其他病原(BEFV、IBRV)未检出(图略)。

气象台台长哆哆嗦嗦地说：“报告陛下，大家看了告示都害怕极了，我手下的人谁都不想犯‘破坏建塔罪’，所以谁也不愿播天气预报啦。”

M.DL2000 plus DNA Maker；1. 血清样品；2. 鼻拭子样品；3. 气管黏液样品；4. 阴性对照

图2 BVDV检测结果

M.DL2000 plus DNA Maker；1. 血清样品；2. 鼻拭子样品；3. 气管黏液样品；4. 阴性对照

图3 BPIV3检测结果

2.5 诊断与防治

挑取纯化培养的菌落，密集涂布麦康凯平板上，用纸片法进行药敏试验。37 ℃培养24 h，观察结果。

德国罗森伯格，一家拥有60年历史的、拥有顶尖技术优势的无线射频和光通信技术制造商，其在移动通信、汽车电子、测试计量以及光传输等领域以领先的技术优势、先进的生产工艺和严苛的品质保证而享誉世界。罗森伯格FAKRA®、HSD®的信号传输技术作为行业标准被殴美日系全线车型上广泛采用；在HVR®高电压和大电流的传送技术上具有屏蔽性好、稳定性高的技术优势；全新MTD®技术，完美诠释了车载以太网解决方案。

建议对发病牛隔离饲养，使用专用的器具与饲料等，限制发病牛活动，禁止其他人员接触发病牛群，防止疫病的扩散；对死亡牛尸体及垫草、粪便等污染物全部进行无害化处理。对整个牛场进行全面消毒，尤其对发病牛接触的牛舍、器具等加大消毒的时间与消毒次数；对发病牛使用丁胺卡那或氟苯尼考，配合氨基比林、维生素C 肌肉注射，每天1次，连用 3～5 d。同时在饮水中加入黄芪多糖、电解多维。

3 讨论

BRDC主要致病因素包括BVDV、BPIV3、IBRV等病毒以及巴氏杆菌、大肠杆菌和牛支原体等细菌性病原，疾病的严重程度与应激强度、饲养管理、自身免疫力及病原感染谱有关[1-2]。其中BVDV与BPIV3均是重要的致病病原，BVDV感染可产生免疫抑制及持续性感染，BPIV3感染也可引起免疫抑制并造成呼吸道上皮损伤，引起混合感染或继发感染而导致严重的临床疾病[3-5]。目前，针对BVDV、BPIV3等尚无特效药物，宜采取检疫、监测、淘汰感染牛的净化措施，并根据各地疫病流行情况适时进行疫苗免疫[5-7]。对发病牛应尽早采集相关样品进行实验室检测，明确病原，以便采取针对性的防治措施，病程拖延越久,治疗效果越差。

取肺、肝、肠等组织病料，涂布于绵羊血平板，37 ℃恒温过夜培养，24 h后取出。挑取典型菌落涂片并进行革兰染色、镜检。

1）实施阶梯泵改造，使泵站运行组合的种类增加[3]。为了便于管理，原设计一座泵站只配置一种型号的注水泵，在排量不匹配的注水泵站能源浪费较为严重。

参考文献：

[1] 王洪梅，赵贵民，侯佩莉，等.牛呼吸道疾病综合征流行现状及防控技术研究进展[J]. 中国畜牧杂志，2015，51(16):33-39.

有人说“困难像弹簧，你弱它就强”，压力也不例外。在工作压力面前，校长如何自我调适呢？我认为多想多做，脚踏实地地朝着目标前行；与压力为伴，多修炼自身，多读书，读好书。在学校管理实践中，不断打磨自己，不断提高自己的工作素质和能力，才能出色完成学校的管理工作，从而减轻工作给自己带来的压力。

[2] 马春霞，李军，覃勇，等.牛呼吸道疾病综合征病例的病原分析[J].中国畜牧兽医，2015，42(9):2481-2486.

[3] 师新川，温永俊，王凤雪，等. 牛副流感病毒3型RT-LAMP检测方法的建立及应用[J]. 中国畜牧兽医，2012，39(11):31-34.

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[7] 赵静虎，王华欣，朱战波. 牛病毒性腹泻-黏膜病的流行状况及防控研究进展[J]. 黑龙江八一农垦大学学报，2016，28(6):122-125.