银盾革蜱(Dermacentor niveus)为三宿主蜱，成蜱主要寄生于羊、骆驼、马、牛等家畜及部分野生动物，同时也危及人的健康[1]。该蜱是马泰勒虫的主要传播媒介，并能自然感染，携带立克次体、马孢子虫和纳塔尔氏病毒[2]。在国外，主要分布在土耳其、伊朗、阿富汗以及欧洲部分国家。在我国内蒙古、甘肃和新疆等地分布较多。据记载，银盾革蜱分布于南北疆的各个地区：克勒玛依、阿勒泰、伊犁、民丰等地平原和荒漠、半荒漠草原[3]。马泰勒虫病高发并不同程度地流行于新疆各地区[4]，主要流行于巴州、伊犁、塔城和阿勒泰等地[5]。目前国内对马泰勒虫病的检测以血源性病原体为主，而媒介蜱的鉴定及其携带病原情况未见相关报道[6]。因此，本试验通过采用形态学和分子生物学方法对银盾革蜱进行鉴定，并检测了其携带的马泰勒虫DNA，旨在为查清传播媒介和病原体之间的关系，为合理控制媒介蜱和蜱传疾病的发生和流行提供参考。

综合上述分析，成1井东三维J2t目的层段含油气砂岩为Ⅰ类AVO类型，且AVO反演含气储层的异常属性表现出与AVO正演模型的异常属性特征完全相似。属性平面、剖面分析证实了成2、成3井位于油气异常区，分析结果与该区的地质认识也基本相符。

假设X=(x(t),y(t),u(t),v(t))T和Y=(p(t),q(t),w(t),z(t))T是系统(1.1)的两个解，则有‖X‖≤C，‖Y‖≤C，其中

1 材料与方法

1.1 被检样品

银盾革蜱标本采自昭苏种马场疑似体表银盾革蜱侵袭181例病例，按地区和马烙号将蜱装入洁净的瓶内，编号标记后，带回待检。

1.2 试剂

琼脂糖、溴化乙锭、DL2000 Marker、2×Taq PCR混合液全血DNA提取试剂盒、2×Taq PCR混合液、脱氧核糖核胶回收试剂盒、质粒小量提取试剂盒等(北京鼎国生物技术有限公司)；pEASY-T1克隆试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)。

1.3 银盾革蜱形态学鉴定

以蜱虫DNA为模板，扩增银盾革蜱ITS-2基因，在825 bp左右处出现条带，结果见图2。

借助体视显微镜对银盾革蜱的特征部位(盾板、假头基、气门板、足基节)进行观察，根据文献记载进行形态学分类鉴定[2-3]。

1.4 银盾革蜱分子生物学鉴定及其携带马泰勒虫病检测

[2] 于心，叶瑞玉，龚正达.新疆蜱类志[M].乌鲁木齐:新疆科学技术卫生出版社，1997.

ITS-2所用引物参考文献[7]；18S rRNA根据GenBank中马泰勒虫基因序列(KF559357)设计1对引物。由北京鼎国生物技术有限公司合成(见表1)。

1.3 观察指标 分别比较两组疗效，治疗前后MAP、HR、SVV水平，不良妊娠结局发生情况以及不良反应发生情况。其中疗效主要是通过检测患者治疗前后蛋白尿水平进行评估。SVV采用Vigelo/FloTrac检测仪进行检测，MAP采用InteHivue MP50型检测仪进行检测。不良妊娠结局包括胎儿窘迫、新生儿窒息、剖宫产、产后出血等。不良反应包括头昏乏力、恶心呕吐、皮疹以及头痛等。

表1 引物序列

基因引物名称引物序列(5＇→3＇)片段长度/bpITS2FTCGTCTGTCTGAGGGTCGGA825RATCGTCTCGTGTAGCGTCG18SrRNAFGCCTGAGAAACGGCTACCAC789RGTGAGTTTCCCCGTGTTGAGTC

1.4.2 银盾革蜱基因组的提取

南京大学图书馆有“图宝”当前台的咨询馆员；第一、二代智能盘点机器人；智能书架；24小时自助借书机（含自助办证）；人脸识别技术的应用。

将保存好的蜱虫用蒸馏水清洗并等其表面水分蒸发后放入灭菌的研钵中充分研磨。根据CTAB法提取蜱虫DNA并进行检测。

1.4.3 银盾革蜱分子鉴定及其携带的马泰勒虫检测

反应体系：2×Taq PCR混合液12.5 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各1 μL，DNA 1.5 μL，灭菌双蒸水补足至25 μL。银盾革蜱ITS-2基因PCR反应条件为：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共35个循环；72 ℃延伸10 min。马泰勒虫 PCR反应条件为：94 ℃ 4 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共35个循环；72 ℃延伸5 min。将PCR产物进行电泳并观察结果。

ITS-2处于5.8S rRNA基因与28S rRNA基因间的内转录两区，作为非编码区，承受的选择压力较小，相对变化较大，并且能够提供详尽的系统学分析所需要的可遗传性状，更适合于种间遗传差异的分析[8]。因此本试验参考Moshaverinia等[7]设计的银盾革蜱ITS-2基因序列引物，经PCR鉴定后，对所测定的基因序列进行分析，结果表明，所测定的基因序列为银盾革蜱。

图2为两类吸收式热泵AHP和AHT的基本示意图，图中发生器和吸收器分别为解吸和吸收发生场所，冷凝器和蒸发器为辅助被吸收剂完成从发生器到吸收器的循环（高压至低压）。发生器中的解吸为吸热过程，吸收器中的吸收过程为放热过程，吸收剂和被吸收剂组成的工质对较低的沸点（常压下低于水沸点）使得AHP和AHT能够对低温余热进行回收利用。从直观上可以看出，由于两者的发生器/冷凝器、吸收器/蒸发器分别处于泵的入口侧和出口侧，故AHP中的发生器和冷凝器操作压力高于蒸发器和吸收器而AHT则反之。因而使得发生器在AHP中比在AHT中操作温度更高，吸收器在AHT中比在AHP中操作温度更高。

将PCR产物纯化，连接并转化到DH5α大肠杆菌感受态细胞中，将菌液涂布LB培养基上培养。次日挑取单个菌落，将菌液送上海生工进行测序，在Blast上进行同源性分析。

2 结果

2.1 银盾革蜱形态学鉴定

根据有关资料，借助体视显微镜对所采集到的181只蜱虫的躯体、假头基、盾板表面珐琅彩的分布、气门板及肢节等部位进行鉴定，鉴定结果为银盾革蜱(图1)。雄蜱珐琅彩浓厚而银白，中部褐斑形成的三角形中最小锐角向上。假头基略似方形，基突发达。盾板卵圆形，前部渐窄，后部宽圆。腹面足基节Ⅰ至Ⅳ渐次增大，气门板呈逗点形，背突较长而窄，向背方弯曲。背缘有明显的几丁质增厚部，其上带去珐琅彩。足基节Ⅰ外距比内距稍短，基节Ⅱ，Ⅲ外距细窄，呈锥状。肢节Ⅳ股节，胫节和前跗节腹面具有3个的齿状突。雌蜱假头基矩形，后缘平直。盾板近心形，长稍大于宽。生殖孔有翼状突。基节Ⅰ外距粗壮，较内距略短。基节Ⅱ，Ⅲ后角稍突出，略呈矩状，其外矩粗大，末端尖细。基节Ⅳ外距稍窄，略向外弯。

A.雄蜱背面盾板(1.假头基，2.褐斑；7.6×)；B.雌蜱背面盾板(3.近心性；8.1×)；C.第Ⅰ基节(4.内距；5.外矩；118×)；D.气门板(6.杯状体；88.4×)；E.股节、胫节、前跗节齿状突(7.齿状突；26.8×)；F.雄蜱第Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ基节(8、9、10外矩；30.9×)；G.雌蜱第Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ基节(11、12、13外矩；28.2×)

图1 银盾革蜱形态学特征

2.2 分子生物学鉴定

2.2.1 银盾革蜱ITS-2基因PCR扩增

将蜱进行清洗处理，根据肉眼观察到的外观形态进行分类，然后将蜱置于含5%甘油的70%酒精中，待后续进行形态学鉴定及分子生物学鉴定用。

M.DL2000 Marker；1-2.银盾革蜱扩增产物

图2 ITS-2基因片段PCR扩增结果

2.2.2 蜱源性马泰勒虫PCR扩增

将提取的蜱虫组织DNA作为模板进行蜱源性马泰勒虫的PCR检测，电泳检测部分样品在789 bp处出现条带，结果见图3。携带马泰勒虫的蜱虫样品13只，阳性率为7.1%(13/181)。

传统的管理模式已跟不上电力发展的要求，安全工器具管理制度不完善，使得安全工器具的入库存放、出库使用、检测维修等方面得不到细致的管理，并且没有对安全工器具的具体情况进行相应的记录；管理体系中存在很多不足，例如素质水平低，考核制度缺乏，运作效率低等。

2.2.3 ITS-2基因序列测定与比对

经测序所采集蜱虫ITS-2基因序列长度为825 bp，经Blast软件分析，测序结果与GenBank中登录的伊朗株(GQ144706.1)同源性为99%，判定该蜱虫为银盾革蜱。

2.2.4 18S rRNA序列测定与比对

蜱的传统分类通过光学显微镜和扫描电镜观察蜱的形态学特征以其完成初步鉴定。但由于蜱遗传变异速度快,试验者的主观性,环境因素的影响,传统分类会遇到不易鉴定问题,形态相似种的区分和鉴定尤为突出,存在较大困难[7]。杨晓军等[8]报道,蜱类系统发育问题是只靠单一检测方法不能从根本去解决的，需要多种方法对比检测。因此本研究将传统的形态学和现代分子生物学结合在一起进行了鉴定。

M.DL2000 Marker；1-23.部分银盾革蜱扩增产物；24.阴性对照

图3 蜱源性马泰勒虫的PCR扩增结果

3 讨论

将所测蜱源性马泰勒虫新疆株与国际流行株18S rRNA序列(登陆号分别为HM229407.1、JQ657703.1、KF559357.1、KJ801928.1、KM046922.1)利用Blast软件进行核苷酸的同源性分析，结果表明，所测新疆株与韩国株、蒙古株、肇源株、沙特阿拉伯株、匈牙利株同源性为99%。

1.4.4 PCR产物的克隆及序列测定

[1] 李佳.马泰勒虫荧光定量PCR检测方法的建立及伊犁马泰勒虫病的分子流行病学调查[D].乌鲁木齐：新疆农业大学，2013.

马泰勒虫病是一种蜱传性血液原虫病，其研究要从病原体、媒介蜱和易感动物三者间的关联进行综合分析。目前对马泰勒虫病的血源性病原检测，Ogunremi等[9]和Camacho等[10]分别建立了补体结合试验和间接免疫荧光抗体检测。国内，罗金[5]和李佳[1]分别建立了该病的常规PCR和RT-PCR方法。媒介蜱方面，形态学鉴定和分布研究等相关报道较为常见，但对于蜱源性病原的检测报道较少。特定的蜱种携带特定的病原，银盾革蜱是马泰勒虫病的主要传播媒介和优势蜱。昭苏独特的自然生态环境，丰富的动物资源，为蜱和蜱传病原的传播提供了非常便利的自然条件，也造成了马泰勒虫病在此地区的广泛流行。故本试验对昭苏草原疑似马体表的寄生媒介蜱进行了分子生物学鉴定，并检测其携带马泰勒虫病情况，对该区域蜱类及蜱源性病原的研究提供参考依据。

参考文献：

使用MATLAB工具包中的非线性约束优化函数fmincon对与R相关的设计变量进行优化求解，即求得目标函数[-(F=F1+F2)]的最小值，其中：其几何约束为式(4)、(12)和(13)，外部约束为式(14)至式(19)；设计变量取值范围参考表4。

1.2.3 使用弹力袜。弹力袜通过在腿部产生梯度压力,可促进下肢静脉血回流,降低DVT的发生。需在术前根据患者腿部测量数据选择合适型号的弹力袜,持续穿至手术结束,

1.4.1 引物的设计与合成

其他特征变量对住宅价格也有一定的影响．建筑面积每增加1%,住宅价格增加0.213%;建筑年龄每减少1%,住宅价格增加0.032%;小区容积率每增加1%,住宅价格增加0.059%;装修程度每提升一个等级,住宅价格增加3.05%;朝南的住宅比其他方向的住宅价格高出6.18%;住宅至最近商圈距离每增加1%,住宅价格降低0.033%;住宅至CBD距离每增加1%,住宅价格降低0.078%;物业水平每增加1%,住宅价格增加0.075%．

[3] 黄兵，沈杰.中国畜禽寄生虫形态分类图谱[M].北京：中国农业科学技术出版社，2006.

[4] 瓦热斯·吐尔松，李永畅，朱玉涛，等.新疆昌吉部分地区马梨形虫病检测初报[J].中国动物传染病学报，2016(3)：75-79.

我院从2015年5月—2016年4月确诊的70例乳腺肿块患者，年龄为20～65岁，平均年龄为（42.0±7.2）岁，病史最大直径为3.5～79.0mm，平均直径为（18.05±9.25）mm。入选标准：均经超声检查、病理确诊，存在皮肤病变、乳腺肿块体征、乳腺胀痛等。排除认知功能障碍、精神疾病、影像学不适、妊娠哺乳期女性者。

[5] 罗金, 刘光远, 田占成，等.基于18SrRNA基因序列的我国马梨形虫分类学地位分析[J].动物分类学报，2011, 36(1):99-103.

[6] 王冰洁，朱玉涛，刘梦丽，等.新疆小亚璃眼蜱的鉴定及其携带牛环形泰勒虫病原检测[J].中国兽医学报，2015(12)：1939-1342.

[7] Moshaverinia A，Shayan P，Nabian S，et al.Genetic evidence for conspecificity between Dermacentor marginatus and Dermacentor niveus[J].Parasitol Res, 2009, 105(4)：1125-1132.

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[9] Ogunremi O，Georgiadis M P，Halbert G，et al．Validation of the indirect fluorescent antibody and the complement fixation tests for the diagnosis of Theileria equi[J]．Vet Parasitol，2007，148(2)：102-108.

[10] Camacho A T，Guitian F J，Pallas E，et al．Theileria(Babesia) equi and Babesia caballi infections in horses in Galicia，Spain[J]．Trop Anim Health Prod，2005，37：293-302.