输血是手术患者重要的治疗手段之一,同种异体输血是临床上最常用的方式，但异体输血可能导致溶血、过敏和疾病传播等不良反应，临床报道一直较为谨慎。随着先进医疗技术的发展，自体输血已经发展成为一项重要的血液保护措施，其能避免输错血型导致的溶血和异体输血引起的疾病传播等，具有异体输血无法比拟的优点[1]。自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是淋巴细胞谱系中的一类大颗粒淋巴细胞,其不同于T、B淋巴细胞，无需抗原预先致敏即可发挥杀伤作用，是天然免疫系统的主要效应细胞，其能通过早期分泌多种细胞因子和趋化因子来调节获得性免疫，是机体抵御感染的第一道防线，也是连接天然免疫与获得性免疫的桥梁[2]。本研究以围手术期胃癌患者为研究对象，观察异体NK细胞与预存式自体输血NK细胞杀伤功能的不同，探讨对患者细胞免疫功能的影响，分析两种方法的联合治疗对肿瘤患者免疫功能的调控活性，为肿瘤患者术后采用该治疗方法提供理论依据。

(1)现场检查法:在对同一批次的内镜进行抽样检查之前,需要由专业人员事先进行现场检查,并对经过清洗、消毒后的内镜实行编号,需要注意的是,针对特殊疾病患者使用的内镜,需要进行严格分类。与此同时,详细记录内镜具体的清洗与消毒过程,以及现场检查结果,最后结合有关规范对内镜清洗消毒存在的主要问题进行研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2013年4月至2015年4月于北京大学深圳医院进行治疗的胃癌患者为研究对象。纳入标准： 1)符合西医诊断[3]；2)无内分泌及免疫性疾病，Hb>120 g/L，Hct> 0.35，无放疗、化疗和激素治疗史。排除标准： 1)失血量>600 mL；2)手术时间>4 h；3)应用血管活性药物后持续时间>10 min，术中血压超过基础值40%。共纳入符合标准的患者120例，其中男72例，女48例；年龄18～50岁，体质量46～85 kg。按照随机数字表法将120例患者分为对照组和观察组，各60例。对照组采用异体输血，观察组采用预存式自体输血联合同种异体NK细胞输注。本研究经医院伦理委员会批准，患者在术前均签署知情同意书，

其二，我喜《杂文月刊》，是因她是“一本有良知、讲真话的杂志”。她不同于某些网页戴着墨镜看世界，所载尽是唯恐天下不乱的“愤青文”；也不同于某些脱离实际，不接地气的“伪高调”“假大空”的“鸡汤文”。她是和党中央在政治上保持高度一致的大前提下，联系当今社会人民群众身边的真人真事，针砭时弊，激浊扬清。不仅提出问题、分析问题尖锐、泼辣，有精辟独到的见解，而且也有解决问题的建设性意见，把话说到了老百姓的心坎上，自然引起了老百姓的共鸣。不仅有令人荡气回肠之感，还能让人深思，自己应该怎么做，实现杂文“以文化人”传播正能量的使命。

1.2 方法

观察组：经患者同意并签订自体输血同意书后，于手术前1周内釆血400 mL，釆集后在血袋上标记清楚并置血库专用冰箱内保存，在手术中止血完毕后用以回输；同种异体NK细胞，委托深圳市北科生物公司(ISO9001质量管理体系认证；AABB认证)提取、纯化、培养、检测后100 mL(106/mL细胞)输注。对照组：采集亲属(子女、兄弟、姐妹)外周血，手术中止血完毕后回输；手术前配滤白悬浮红细胞400 mL，手术完毕后输入。

采用SPSS 16.0统计软件进行数据处理，定量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，定性资料比较采用2检验，检验水准α除特别说明外均设定为0.05。

1.3 观察指标

1.3.1 体液免疫 检测治疗前后血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平采用速率散射比浊法，使用迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BS-120全自动生化分析仪测定；补体C3、C4水平采用单向免疫扩散法测定，使用北京生物制品研究所生产的标准血清和上海翊圣生物科技有限公司生产的(货号：10208ES60)琼脂糖凝胶。

观察组治疗后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+细胞异常例数均较治疗前明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组治疗后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+细胞异常例数较治疗前明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)(表3)。治疗后两组CD8+细胞水平均下降，CD3+、CD4+及CD4+/CD8+细胞水平均升高，差异有统计学意义(P<0.05)(表4)。

两组治疗后血清TNF-α下降，IL-2、IL-10水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；观察组治疗后TNF-α水平低于对照组，IL-2、IL-10水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)(表5)。

1.4 统计学方法

“你这些玉器阴气很重，我看多半是陪葬的冥器。”老道嘴上说着，手上也没停下，他灵巧地调整着那些便宜的玉石珠宝的摆放位置。“从款式上来看，也不像是‘九窍塞’，多半是墓主生前喜欢的器物，死后一起下葬了。大概是墓主死得不甘，内有蹊跷，才使得这批玉器沾染上了晦气啊。”

2 结果

2.1 两组治疗前IgG、IgA、IgM、C3及C4检测情况比较

第二，网红体验与宣传。我们可邀请一些网络红人来当地旅行，拍照，将客家文化弘扬出去，并且以此和大学生达成客家生态文化的美好共识。同时也以此宣传我们的公众号，通过精致低价的服务打造品牌效应。

治疗后观察组和对照组IgG、IgA、IgM、C3及C4异常例数较治疗前都有减少趋势，观察组比对照组减少趋势更明显，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后两组血清C3和C4水平升高，IgG、IgA、IgM水平下降，差异均有统计学意义(P<0.05)(表1～2)。

表1 两组治疗前后IgG、IgA、IgM、C3及C4检测情况比较(例，n=60)

分组时间IgGIgAIgMC3C4异常正常异常正常异常正常异常正常异常正常对照组治疗前134765475316441941 治疗后8524563579511050 观察组治疗前124875385217432040 治疗后2 58*#0 60*#1 59*#2 58*#357*#

注：与治疗前比较，*P<0. 05；与对照组比较，#P<0.05

表2 两组治疗前后IgG、IgA、IgM、C3及C4水平比较

组别时间 IgG IgA IgM C3 C4对照组治疗前12.05±1.962.08±0.841.98±0.720.65±0.280.43±0.25治疗后8.84±1.57*1.77±0.73*1.70±0.66*0.78±0.33*0.57±0.29*观察组治疗前12.13±2.022.10±0.812.01±0.790.66±0.310.44±0.26治疗后7.51±1.52*#1.69±0.72*1.66±0.68*0.92±0.35*#0.77±0.31*#

注：与治疗前比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

2.2 两组治疗前后CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+检测情况比较

1.3.2 T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+) 治疗前后采用贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司CytoFLEX流式细胞仪法检测T细胞亚群，各检测1次。

表3 两组治疗前后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+检测情况比较(例，n=60)

组别时间CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+异常正常异常正常异常正常异常正常对照组治疗前2634194116442040治疗后1446*1050951951*观察组治疗前2535204017432139治疗后555*#258*#258*#159*#

注：与治疗前比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

表4 两组治疗前后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平比较

组别时间 CD3+ CD4+ CD8+CD4+/CD8+对照组治疗前56.6±5.7431.4±4.7230.1±4.851.10±0.44治疗后58.7±5.69*33.9±4.82*27.9±4.43*1.22±0.47*观察组治疗前56.5±5.7731.6±4.6930.3±4.861.09±0.42治疗后61.6±5.58*#36.8±5.37*#25.1±4.42*#1.47±0.55*#

注：与治疗前比较，*P<0. 05；与对照组比较，#P<0. 05

2.3 两组治疗前后血清IL-2、IL-10及TNF-α水平比较

1.3.3 酶联免疫吸附剂试剂盒测定 酶联免疫吸附剂试剂盒由深圳欣博生物科技有限公司提供，检测治疗前后血清白细胞介素-10(interleukin-10，IL-10)、白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平。

表5 治疗前后两组血清IL-2、IL-10及TNF-α水平比较

组别时间IL-2/(μg/L)IL-10/(pg/mL)TNF-α/(μg/L)对照组治疗前3.37±0.6432.52±7.782.24±0.38治疗后4.23±0.72*64.49±9.81*1.58±0.26*观察组治疗前3.32±0.6733.57±7.862.21±0.40治疗后4.85±0.75*#75.51±10.29*#1.20±0.27*#

注：与治疗前比较，*P<0.05，与对照组比较，#P<0.05

3 讨论

NK细胞无需抗原预先致敏，是天然免疫系统的主要效应细胞，可发挥杀伤作用，是机体抵御感染的第一道防线，在机体免疫调节、造血调控、抗肿瘤和抗感染等方面发挥着重要作用，其又能分泌多种细胞因子和趋化因子来调节获得性免疫[6-7]。机体抗肿瘤免疫中细胞免疫是关键，细胞的数量及质量是宿主对肿瘤细胞免疫监控异常重要的指标[8]。本研究在前期研究基础上，观察预存式自体输血和增强其对同种异体NK细胞杀伤“自亡和它杀”相结合的方法。通过对患者治疗前后细胞免疫功能检测发现，两种方法联合治疗对肿瘤免疫功能具有调控活性，为肿瘤患者术后采用该方法治疗提供了理论依据，对肿瘤患者术后免疫调控具有重要意义。

随着社会进入老龄化阶段及血液需求量日益增加，自体输血已成为一项重要的血液保护措施，预存式自体输血是在术前几天或几周前釆集自身的全血或者有效的血液，将成分保存到适当的环境下，当患者需要输血时再将保存的自体血进行回输以发挥治疗作用[4-5]。

免疫细胞的数量及质量是宿主对肿瘤细胞免疫监控异常重要的指标，在机体抗肿瘤免疫中细胞免疫是关键，手术抑制了机体免疫功能，肿瘤患者免疫状态低下，加之可能导致术后感染和肿瘤扩散，易造成多器官功能衰竭[9-11]。在免疫调节方面本研究结果显示，两组血清C3和C4水平升高，IgG、IgA、IgM水平下降；观察组IgG、IgA、IgM、C3及C4异常例数少于对照组；观察组C3和C4高于对照组，IgG水平低于对照组；观察组CD8+低于对照组，CD3+，CD4+及CD4+/CD8+水平高于对照组；两组TNF-α下降，观察组低于对照组；观察组CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+异常例数均少于对照组；治疗后两组血清IL-2、IL-10水平升高，观察组高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

血液中血红细胞的ATP及2.3-DPG含量均高于库血，有较好的携氧功能，自体输血已经发展成为一项重要的血液保护措施，其能避免异体输血引起的艾滋病、肝炎的传播；输错血型导致的溶血危险[12-14]；避免操作过程中配型及疾病检验出现的失误，同时可避免异体输血所致高钾、低钾血症及代谢性酸中毒[15-16]。NK细胞是天然免疫系统的主要效应细胞，即可发挥杀伤作用，无需抗原预先致敏，能通过早期分泌多种细胞因子和趋化因子来调节获得性免疫，是机体抵御感染的第一道防线，同时也是连接天然免疫与获得性免疫的桥梁，在机体造血调控、免疫调节、抗肿瘤和抗感染等方面发挥着重要作用。在自体输血的同时联合输注NK细胞可增强患者的免疫力，利于疾病的康复，抵抗术中、术后可能出现的感染风险[17]。

方法：两手五指并拢，手臂前伸，勿弯腕关节，用力做手指屈伸动作，重复10～15次；双手五指分开，连续用力做伸展和并拢手指的动作，重复5～10次；双手五指交叉，两拇指彼此围绕对方转动，先由里向外，再由外向里，重复15～20次；模仿弹钢琴的手指动作，先由左至右，再由右至左，重复15～20次；两手手指分开，向各个方向活动；最后左右手交替抬起，做放松动作。

综上所述，预存式自体输血联合同种异体NK细胞输注能调节肿瘤手术患者体液免疫，还能调节炎性细胞因子水平，促进其平衡，调节T细胞亚群，有利于疾病的康复。

参考文献

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[7]屈常伟,骆喜宝,刘志贵, 等.预存式自体输血对结直肠癌患者围术期细胞免疫功能的影响[J].实用医学杂志,2013,29(18):2986-2988.

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