鹅膏菌属(Amanita)隶属于担子菌门（Basidiomycotina）、层菌纲(Hymenomycetes）、伞菌目（Agaricales）、鹅膏菌科(A-manitaceae)，是有毒大型真菌中较特殊、较有价值的世界广布性大属，其物种具有非常丰富的多样性.全世界已描述且被承认的约500种，我国约80种[1].主要特征为菌盖初期卵形，后期呈凸透镜形或平展，菌盖常有外菌幕碎片残留，菌褶离生或近离生，白色，菌柄中生，易与菌盖分离，柄基部常常膨大成球形，菌环有或无，菌托环状，苞状或鳞片状，孢子印白色，孢子椭圆形，近球形，光滑，往往含一大油滴[2].鹅膏菌多与树木形成外生菌根，促进森林的发育，该属也有许多优质食用菌，如橙盖鹅膏A.caesarea有鸡蛋菌的美名，营养丰富，十分鲜美.然而大部分种具有毒性，含鹅膏毒肽、鬼笔毒肽、毒蝇碱，产生神经精神型中毒症状[3]，还有少数为剧毒菌，如白毒伞A.verna，号称“毁灭天使”.在世界各地每年都有人误食毒菌而死亡，而大多数死亡原因是误食了有毒鹅膏，因此鹅膏菌的准确鉴定尤为重要.传统鉴定方法往往受到环境的影响较大，因此菌物学家纷纷引入分子生物学手段对该属真菌进行物种鉴别，以期结果更加准确可靠[4～9].笔者对2个赤峰地区鹅膏菌标本利用形态学和ITS片段测序相结合的方法进行分类鉴定，为鹅膏菌的准确鉴定提供依据和方法.

1 材料与方法

1.1 标本来源

供试标本CFSZ10041、CFSZ10261由田慧敏等采自赤峰地区巴林右旗和松山区，拍摄生境照片后，晾干、编号，超低温冷冻处理后存放于赤峰学院菌物标本室（CFSZ）.

1.2 形态鉴定

鉴定方法采用宏观特征、显微结构与化学试剂反应相结合的方法.宏观特征子实体大小用游标卡尺测量新鲜子实体2-5个，使用体式显微镜观察菌盖菌柄附属物，颜色的判断主要依据采集时拍摄的彩色照片，显微观察通常4-5%KOH作浮载剂，测量担孢子30个、菌丝、担子、囊状细胞以20个为限.

1.3 ITS鉴定

1.3.1 基因组DNA的提取

采用CTAB法：子实体干品菌盖部分(含菌褶)用液氮研磨，提取基因组DNA[2]，并使用北京鼎国公司的DNA纯化试剂盒对提取的DNA 1.3.2 rDNA-ITS区进行PCR扩增及测序.

PCR的扩增体系为：PCRcolorlessmix25μL，ITS1(TCCGTAGGTG AACCTGCGG)/ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)引物（20μmol/L）各 1μL，模板 DNA2μL，ddH2O22μL，反应总体积为50μL.扩增反应在德国eppendorf公司的5331型PCR扩增仪上进行，94℃预变性3min；95℃变性 40s；58℃退火40s；72℃延伸1min，共34个循环；最后于72℃补平5min，终止温度为4℃.PCR产物纯化后委托上海生工生物科技有限公司完成.

1.3.1 ITS序列比较和系统发育分析

将已测得的ITS序列利用DNAMAN等处理后提交UNITE网站进行检索，将所得的相似序列转换为FASTA格式，用MEGA5.1软件中的Alignment程序对序列进行多重对位排比，并利用Analysis程序采用最大似然法构建系统发育树，用Kimura2-parameter模式计算遗传距离，Bootstrap循环1000次.

2 结果与分析

2.1 形态学鉴定结果

经形态学鉴定结果CFSZ 10041为淡青灰鹅膏Amanita lividopallescens(Gillet)Bigeard&Guillemin，CFSZ 10261为杏黄鹅膏Amanita crocea(Quél.)Singer.

2.1.1 淡青灰鹅膏Amanita lividopallescens(Gillet)Bigeard&Guillemin

将4个标本测得的ITS序列与通过BLAST检索比对从NCBI的GenBank数据库获得32个与供试鹅膏科具有较高相似度的物种（见表1）

孢子 （7.2～）10.1～14.4×（6～）8.2～10 （～12.0）μm，[Q=1.00～1.57（～1.85），Q=1.23±0.21]，宽椭圆形或椭圆形，有的近球形，含一大油滴，有小尖，非淀粉质（图1～3）.担子33.6～57.6（～67.2）×10.1～14.4μm，无色，有黄色内含物，棒状，上部膨大，有四个小梗，基部无锁状联合（图1～4）.褶侧囊状体无，菌盖表皮由菌丝组成，往往顶端膨大，顶端细胞大小为 50.0～72.0×10.0～21.6μm（图 1～E）.菌幕由囊状细胞和菌丝组成，囊状细胞无色，20～42.4×14.0～18.0μm，无色薄壁菌丝，分枝，有隔膜，直径 2.9～4.8μm（图 1～F）.

2011-2015年台湾对大陆水产品贸易主要是鱼类及其制品，其贸易总值虽逐步下降，但其在对大陆水产品贸易总值中所占的比重远大于其他水产品；软体类及其制品的贸易总值排名第二；而甲壳类及其制品和饲料用鱼粉等其他产品贸易总值均较少，且连续五年基本不变(见图3)。

采取综合防控措施，减少动物疫病的发生。坚持“预防为主、治疗为辅”的方针，散养户采取“集中免疫与适时补针”相结合，规模养殖场按程序进行免疫注射。在抓好春秋两季强制免疫工作的同时，要严格落实防疫工作责任制，切实落实免疫、监测、检疫和应急管理等各项防控措施。另外，要抓好布病、结核病、狂犬病等人畜共患病的防控和小反刍兽等外来动物疫病的防控。要引导养殖场逐步做好动物疫病的净化工作，如牛羊布病、结核病、猪伪狂犬病的净化工作。发现动物疫情严格按“早、快、严、小”的要求处理，努力确保不发生区域性重大动物疫情[2]。

图1 A.lividopallescens(Gillet)Bigeard&Guillemin子实体形态及微观结构

〔3〕卯晓岚.中国毒菌物种多样性及其毒素[J].菌物学报，2006，25(3)：345～363.

独立学院开设的商务英语专业学制为4年，每学年为一个阶段。一年级应把重心放在语言知识和技能上，主要开设听、说、读、写及入门类商务课程，打好英语基础。二、三年级应该集中开设商务类课程，其中二年级侧重商务知识，培养学生的语言运用能力和交际能力，为后面学习进阶课程做好准备；三年级侧重实践技能，重点提高学生运用语言和商务知识的能力。四年级的时候大多数学生已经开始实习或就业，因此，这一阶段应该侧重就业引导和实训，进一步增强学生的就业竞争力。

2.1.3 杏黄鹅膏Amanita crocea(Quél.)Singer

子实体中等大，菌盖直径4.5～6.0cm，平展，湿时稍粘，橘黄色或杏黄色，中央色深，无菌幕，边缘有条纹，菌肉厚，白色，无特殊气味.菌褶白色，后变淡黄色，密，不等长.菌柄长 12.5～17.5cm，粗 0.7～1.3cm，圆柱形，基部稍膨大，白色，中空.无菌环，菌托白色，苞片状（图 2～A,B）.

孢子 9.6～12（～14.4）μm×（7.2～）8.4～10.0（～11.4）μm，[Q=1.50～2.14，Q=1.76±0.18]，椭圆形，近球形，表面光滑，有小尖，无色，无淀粉质反应（图2～C）.担子36.0～57.6×8.6～10.1μm，短棒状，中部膨大，（图 2～D），无囊状体，菌盖表皮由辐射状排列的菌丝组成，菌丝无色透明，直径8.4～14.4μm，有的顶端膨大，膨大细胞大小为36～50.4×11.5～15μm（图 2～E），菌柄表皮菌丝无色，常见 H 形，有的菌丝膨大成倒梨形，大小为 25～42×10.5～16μm（图 2～F）.

研究标本：内蒙古赤峰市巴林右旗，赛罕乌拉自然保护区，荣升景区，桦林地上散生CFSZ 10261，2013年8月14日，刘铁志、田慧敏等.

自我国进行改革开放以来，国民经济种类发生了重大改变，保险行业迅速成为我国重要的社会保障体系组成部门，并逐渐发展成我国重要的经济金融体系。保险不仅就有一般金融工具所具有的经济属性，还具有补偿和促进社会和谐发展的社会管理职能。

图2 杏黄鹅膏A.crocea(Quél.)Singer子实体形态及微观结构

〔4〕戴沩田，张平.中国几种剧毒鹅膏菌的ITS序列分析[J].生命科学研究，2006(S2)：110～113.

可以看到，传统CSCOPF模型故障后把所有潮流约束考虑进去，约束条件的规模相比于基态OPF扩大了C+1倍，这会给大系统带来极大的求解困难。考虑到实际系统故障后，无功就地补偿可以快速控制节点电压，因此本研究只考虑故障后潮流约束，即在上一节OPF模型的基础上仅增加线性可靠性约束，相比传统CSCOPF模型得到了简化，优化问题求解将更为简便。下面分别介绍基于转移系数的可靠性约束和校正控制对可靠性约束的修正。

享乐价格法,又称特征价格法、效用估价法,是目前研究绿地对住宅增值作用常用的方法之一,其优点在于全面考虑影响因素,采用真实数据模拟市场,避免主观意识的干扰,具有很强的灵活性[9]．决定住宅价格的因素很多.住宅价格可以看作是住宅各项特征价格的总和,所以计算出各个影响要素的价格后,在控制其他要素不变的前提下,就能将影响房价变动的各要素分离开,以剔除其他因素的影响．常用的特征价格模型主要有线性、半对数、对数3种表现形式[29]:

2.2 ITS序列分析

菌盖直径3.8～5.0cm，半球形或平展，灰白色至浅青灰色，中央色深，被白色，不规则形状的菌幕残片，易脱落，菌盖边缘有长条纹，干后条纹处稍变棕黄色，边缘撕裂，（图1～A），菌肉白色，薄，约 1～2mm，无明显气味，菌褶近离生，白色，有短菌褶，菌柄 8.0～11.3cm，粗 0.5～0.7cm，白色，有不明显的绒毛，干后绒毛变黄色，基部膨大近球形，菌托袋状或苞状，分裂成两瓣或多瓣，白色，具微细绒毛，有稀疏的黄褐色小疣，地下生，菌环缺如（图1～B）.

还可以利用多媒体将一些破坏环境的图片或视频播放出来，将环境受到破坏的情境展现出来，如水污染、土地沙化、臭氧层空洞等。通过这些触目惊心的图片，让学生明白环境保护的重要性。同时给出一些利用化学知识保护环境的方法，如，尽量减少塑料袋的使用、少用或不用一次性筷子等。或是组织学生讨论化工厂选址问题，通过亲自参与活动的方式，加深对化学知识的理解，树立起可持续发展理念，完成传统文化元素的渗透，提高化学教学质量。

研究标本：内蒙古赤峰市巴林右旗，赛罕乌拉自然保护区，东沟蒙古栎林CFSZ 10041，2013年8月12日，刘铁志、田慧敏等.

2.3 系统发育分析

〔1〕杨祝良.中国真菌志[M].北京：科学出版社，2005.239～258.

表1 与供试鹅膏属4个标本rDNA～ITS序列相似的物种

物种 登录号 物种 登录号A.sinensis KF017946 A.pantherina AB096044 A.friabilis UDB003218 A.pantherina AB096043 A.beckeri JF90775 A.pantherina AB080974 A.argentea UDB015180 A.pantherina KM052551 A.muscaria DQ060895 A.subglobosa KX810031 A.muscaria EU071922 A.subglobosa KU248106 A.muscaria EU071890 A.albocreata KU248129 A.farinosa AF024450 A.ibotengutake KF017937 A.muscaria DQ060895 A.parvipantherina FJ375330 A.muscaria EU071922 A.manginiana KT779083 A.lividopallescens UDB015175 A.magnivolvata UDB001514 A.lividopallescens KX834245 A.vaginata KM658299 A.lividopallescens UDB002334 A.orientifulva AY436464 A.crocea UDB002186 A.pseudovaginata KM658285 A.crocea FJ441033 A.stenospora UDB024006 A.crocea JQ912665 A.melleiceps KF017939

综合上述，形态学鉴定方法和ITS测序法相结合，将CFSZ10041鉴定为A.lividopallescens(Gillet)Bigeard&Guillemin,CFSZ10261为杏黄鹅膏A.crocea(Quél.)Singer.

图3 供试标本和其最相似物种的ITS序列构建的系统发育树

3 讨论

赤峰地区鹅膏科真菌资源丰富，鉴定方法主要以形态为主，本研究将传统形态鉴定法和rDNA～ITS序列测序分析法相结合鉴定两个常见鹅膏菌，鉴定结果相互补充印证，较为准确、科学，同时本研究发现了一个中国新记录种，该研究不仅对于认识我国东北地区鹅膏属的物种多样性具有较重要的科学意义.

参考文献：

以鳞鹅膏组的A.manginiana作为外群，对CFSZ 10041、CFSZ 10261的ITS序列及相关序列等36个ITS序列构建系统发育树，结果聚为三类，分别为鹅膏亚属（Subg.Amanita）的鹅膏组（Sect.Amanita）、和鞘托鹅膏组（Sect.Vaginatae）和鳞鹅膏组（Sect.Lepidella），CFSZ 10041 和 A.lividopallescens聚在一起，支持率70%，CFSZ 10261与A.crocea聚在一类，支持率86%，都属于鞘托鹅膏组（Sect.Vaginatae）.

〔2〕毕志树，郑国扬，李泰辉.广东大型真菌志[M].广州：广东科技出版社，1994.870～879.

应用蛋鸡绿色生态养殖技术，有效解决传统蛋鸡养殖中环境污染大、疫病多、污染物危害性强的特点。通过积极应用绿色蛋鸡生态养殖技术，能够及时转变传统生产模式，提高养殖效益，实现蛋鸡养殖经济效益、生态效益和社会效益的有效结合，具有重大现实意义。

与该种相似的其他灰色菌盖的鹅膏有A.vaginata、A.malleata和A.fraudolenta，但是A.vaginata菌盖深灰色，菌托袋状纯白色，有微细绒毛[10～11]，A.malleata 菌托质脆，易碎，A.fraudolenta菌柄具有褐色的线状覆盖物.而A.lividopallescens鉴别特点菌盖有碎片状菌幕残留，菌柄基部袋状有黄褐色小疣，且菌幕由囊状细胞和无色菌丝组成，孢子宽椭圆形至近球形Q=1.00～1.57[12～13].分子鉴定结果显示A.beckeri与该种亲缘关系近，但是从形态学角度，A.beckeri菌盖很黏，易剥离，灰棕色或赭褐色，菌盖菌幕片状，多，且由菌丝组成，故将该标本鉴定为A. lividopallescens，该种为鹅膏亚属（Subgenera Amanita）灰鹅膏组（Section Vaginatae）主要分布于欧洲橡树下，在我国首次发现，属中国新记录种，记载高温烹调后可食用[12].

该标本与A.fulva外形很像，但A.fulva菌盖具褐色色调，且有片状菌幕，而杏黄鹅膏A.crocea菌盖偏于橘黄色，菌盖无菌幕残留，记载可食[2,11,12].

〔5〕李海波，吴学谦，魏海龙.基于形态特征和ITS序列对7个鹅膏菌属菌株的分类鉴定[J].菌物研究，2007，5(1)：14～19.

〔6〕蔡箐，唐丽萍，杨祝良.鹅膏科真菌的分子系统发育研究[A].中国菌物学会学术年会，2015.50.

〔7〕Parnmen S,Sikaphan S,Leudang S et al.Molecular identification of poisonous mushrooms using nuclear ITS region and peptide toxins：a retrospective study on fatal cases in Thailand[J].J.Toxicol Sci.,2016,41(1)：65～76.

〔8〕Francisco A,Gonzalo P,Gonzalo P.Molecular typing of Spanish species of Amanita by restriction analysis of the ITS region of the DNA[J].Mycological Research,2002,106(8)：903～910.

〔9〕Takashi O,Chihiro T,Mitsuya T.Molecular phylogeny of Japanese Amanita species based on nucleotide sequences of the internal transcribed spacer region of nuclear ribosomal DNA[J].Mycoscience,1999,40(1)：57～64.

爬坡高度h=5 m、混合物流速Vm=6 m/s、泥浆体积分数Cv=20%工况下，爬坡管段部分截面处混合物切向速度云图和矢量图见图5，其中图5a)～图5f)分别为弯头1入口、弯头1出口、弯头2入口、弯头2出口、X=5D和X=20D处的截面。速度云图与矢量图相对应，云图反映垂直主流动方向的分速度数值大小，矢量图反映分速度的方向和相对大小，明显出现叠加于主流之上的流动，这称为二次流现象，在管道内横截面内形成反向的涡流，涡核的位置在管道截面中对称分布。[12]

2018年6月15日，在河南省郑州市郑东新区，位于七里河南路与康平路交叉口的宏光意中大厦配楼同文酒店的门前人潮涌动。所有的来宾都满怀期待地迈向二楼，在两侧摆满祝贺花篮的大厅正中是一面墙，墙上呈现河南著名书法家王澄所题的“国学博览馆”五个行楷大字。这一天是宏光集团公司历时5年，由王澄呕心沥血、殚精竭虑担纲策划，开创国学博览馆开馆揭幕的大喜之日。

〔10〕邵力平，项存悌．中国森林蘑菇[M].哈尔滨：东北林业大学出版社，1997.650～652.

〔11〕卯晓岚．中国大型真菌[M].郑州：河南科学技术出版社，2000.700～708.

〔12〕Marco C.A revised key to Amanita section Vaginatae(Fr.)Quél.in Europe[J].Mycology,2003,4(4)：128～186.

〔13〕Vizzini A,Zotti M,Traverso M,et al.Variability,host range,delimitation and neotypification of Amanita simulans(Amanita section Vaginatae)：collections associated with Helianthemum grasslands,and epitypification of A.lividopallescens[J].Phytotaxa,2016,280(1)：1～22.