脂肪液化(fat liquefaction,FL)表现为外源性及内源性因素所致大量脂肪细胞破裂后，细胞内脂肪颗粒向外渗出并聚集成液状油脂。手术切口发生FL是妇科开腹手术常见的术后并发症。由于术后手术切口可出现脂肪组织体积的增加，同时组织分泌的保护性因子减少及炎性因子活性的增高，导致脂肪组织局部血管的通透性增加及组织水肿。而脂肪组织血供能力降低可能是导致脂肪组织出现坏死并液化及脂滴外溢的原因。然而，目前关于导致切口FL的具体机制尚不完全清楚。另外，手术后切口的FL不仅能够增加切口的感染率，还可导致住院时间延长及患者经济负担加重等问题[1]。由于针对切口FL尚无固定治疗方法，因此，对有效预防FL发生的新方法的研究变得尤为重要。

将2018年2月—2018年6月期间在本院治疗的严重多发伤患者102例设为研究对象，其中男59例，女43例，年龄在22岁至71岁之间，平均年龄为（52.17±5.34）岁。

黄芪(Astragalus mongholicus，AM)作为多年生草本植物，具有广泛的药用价值，有补气升阳、益卫固表、托毒生肌和利水退肿之功效。已有研究表明，黄芪注射液可促进手术切口愈合及恢复[2-3]。这可能与黄芪具有扩张血管，改善血液循环等作用有关，通过为切口提供良好的血液供应，从而促进术后切口的愈合[3]。本研究拟通过改进黄芪注射液的使用方法，即通过将黄芪注射液外敷伤口，增加黄芪注射液在局部组织的浓度，观察新方法对于术后切口恢复的作用。同时，根据黄芪对于伤口血液供应的积极影响，以及血管内皮细胞生长因子A(vascular endothelial growth factor-A,VEGFA)在影响血管生成及发展方面的确切作用，本文还旨在探讨黄芪注射液是否通过影响VEGFA的表达来促进术后切口恢复及预防腹部切口FL发生。

材料与方法

一、研究对象

选取2016年6月至2017年3月在鄂东医疗集团黄石市妇幼保健院妇产科行开腹手术的34例妇女作为研究对象进行前瞻性研究分析。研究对象的纳入标准：(1)子宫肌瘤患者行横切口经腹肌瘤剔除手术；(2)体重指数(body mass index,BMI)>28 kg/m2；(3)年龄18～60岁；(4)无开腹手术史；(5)营养状况良好，无贫血等；(6)无甲亢、糖尿病、心血管疾病等其它疾病；(7)知情同意。将34例患者随机分成两组后，一组作为对照采用碘伏消毒处理术后伤口，另一组加用黄芪注射液外敷伤口。记录术后两组患者临床资料与切口FL发生情况(见表1)。其中切口FL的诊断标准参考苏明宝等[4]的标准。该研究已得到本院伦理委员会批准。

二、手术方法

所有入组患者手术均由高年资主治医师以上职称医生操作，皮下采用简单连续缝合法,皮肤采用可吸收线连续水平褥式外翻缝合法。对照组采用碘伏消毒处理术后伤口，研究组加用黄芪注射液外敷伤口。术后2天换一次药，无需拆线。

三、主要试剂和仪器

4.1.2 初中体育教学中运用合作学习法，能够更好地提高学生的足球基本技术。实验班学生在颠球、20m脚内侧运球过杆、脚内侧定点射门的成绩均高于传统的教学方法，说明合作学习模式优于传统教学法，合作学习法是一种值得推广的教学方法。

四、细胞培养及处理

脂肪液化是妇科开腹手术常见的术后并发症，成为了目前困扰妇产科手术医生的重要问题之一，其发病原因及具体机制尚不完全清楚，亦无固定的治疗方法。本文分析了术后可能导致切口FL发生的多个因素，包括年龄、BMI，同时为了探究黄芪对于切口FL的预防作用，进一步对临床患者进行了前瞻性研究分析。研究结果提示年龄与BMI对于切口FL的发生并无显著影响；同时，黄芪可显著预防切口FL的发生，其机制可能与黄芪能通过促进血管内皮细胞的增殖及VEGFA的合成来改善局部组织的血供有关。

黄芪注射液(10 mL/支)购于成都地奥九泓制药厂，人脐静脉内皮细胞(HUVECs)购于上海中国科学院细胞银行，RPMI 1640培养基及胎牛血清购于美国Hyclone，CCK-8试剂盒采购于中国碧云天公司，引物由上海生工生物工程技术有限公司合成，逆转录PCR和实时荧光定量PCR试剂盒购于大连TaKaRa公司，酶标仪购于澳大利亚TECAN公司。Applied Biosystems Step One实时定量PCR及普通 PCR仪购于美国Applied Biosystems公司。

五、细胞RNA提取与实时荧光定量PCR检测

综合文献报道的脂肪液化发生率在10%左右[5-6]，切口FL的发生可明显导致术后拆线时间及住院时间延长，从而增加了患者的心理与经济负担[1]。既往研究已广泛报道的能够影响切口FL发生的因素，包括肥胖、糖尿病等，不同中心、样本量以及运用的处理方法不同导致得到的研究结论具有一定差异性[7-9]。然而，本研究结果显示BMI并非导致FL发生的高危因素，这与前人的研究并不一致。通过对原始数据的分析，可知这一结论的出现可能与人为挑选病例有关。虽然研究中患者的分组通过随机方法进行，但是本研究有目的地纳入了BMI大于28的患者。这一纳入标准的选定与通过有限的样本量对黄芪的预防作用进行验证有关。本研究中Logistic回归分析中与BMI相关的P值为0.093，综上即可说明BMI的非相关性可能是假阴性结果。BMI较高的患者易出现切口FL可能与内分泌及代谢异常有关[10]。脂肪组织体积的增加可导致保护性因子的分泌减少，以及炎性因子活性的增高，从而造成局部血管的通透性增加及组织水肿，因此脂肪组织出现坏死并液化，脂滴外溢。虽然有报道认为随着年龄的增长，机体日渐退化的自我修复的能力可能不足以有效完成对切口的修复，而且高龄患者常常合并有其他基础疾病，这些因素易导致切口愈合不良[11]，但是本研究结果证实年龄因素并非导致FL发生的高危因素。

六、统计学分析

采用SPSS 22.0统计软件进行统计分析，实验结果以均数±标准差方式呈现。针对两组患者的临床资料，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验分析；运用logistic回归分析逐步对影响切口FL的危险因素进行筛选，其中包括年龄、BMI、AM；运用单因素方差分析对细胞增殖及VEGFA表达进行分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、切口FL发生率及可能影响因素的Logistic多因素回归分析

采用CCK-8检测黄芪对于HUVECs增殖能力的影响，同时运用qRT-PCR检测黄芪处理后的VEGFA的mRNA表达情况。结果显示，随着黄芪浓度的增加，被处理的HUVECs增殖能力显著增强(P<0.05，图1A)，并且VEGFA的表达量亦随着黄芪浓度的增加而显著增加(P<0.05，图1B)。提示黄芪可能通过促进血管内皮细胞的增殖及VEGFA的合成来促进术后切口血液供应的恢复及减少FL的发生。

表1 两组患者临床资料及脂肪液化发生情况

组别年龄(岁)BMI切口脂肪液化发生(%)对照组45±7.532.58±3.2511(64.71)研究组47±5.933.55±2.38 4(23.53)χ2/t值0.86420.32825.8460P值0.39390.99280.0156

图1 黄芪可促进血管内皮细胞增殖及VEGFA合成

二、黄芪可促进血管内皮细胞增殖及VEGFA合成

对照组患者FL的发生率为64.71%，研究组FL的发生率为23.53%，χ2分析结果示P<0.05(见表1)，表明两组患者切口FL发生率有显著差异，且研究组FL发生率远低于对照组。运用logistic回归(logistic regression)分析筛选可能影响切口FL发生的年龄、BMI、AM三个因素，结果提示切口FL的发生与年龄和BMI不具有显著相关性(r=0.12,P>0.05;r=0.08,P>0.05)，而与AM均具有相关性(r=0.456，P<0.05)。上述结果说明切口FL的发生与AM具有相关性，而与年龄及BMI不具有相关性。

讨 论

将HUVECs接种于混有1%胎牛血清的RPMI1649培养基的培养瓶中，培养瓶随后放置于条件为37℃，5%CO2的无菌培养箱中，观察细胞生长情况。将处于对数生长期的HUVECs用胰酶消化为细胞悬液，用RPMI1649培养基调整细胞终浓度为1×104个/mL，并将细胞接种于96孔板中。向96孔板中分别加入不同浓度(0、25、50、100 mg/L)的黄芪，另设空白组(孔内不加细胞，只加培养液)，复孔均为3。待生长3 d后，向小孔中加入CCK-8，孵育2 h后用酶标仪在450 nm波长条件下进行检测并读取OD值。

HUVECs细胞通过6孔板培养后收集。总RNA的提取步骤参考操作说明，即运用TRIzol提取胞内总RNA，通过测定A260 nm和A280 nm计算RNA的浓度及纯度，调整RNA浓度为1 g/L，再进行逆转录等步骤，最后进行实时荧光定量PCR检测。QRT-PCR检测在96孔板中进行，反应体积为10μL，其中包括1μL cDNA原液，0.2 μL VEGFA引物，3.6μL 超纯水和5μL SYBR荧光染料，其中引物使用Premier 6.0设计：VEGFA，forward 5-ACCATGAACTTTCTGCTGTCTTGGGTGCAT-3和reverse 5-TCACCGCCTCGGCTTGTCACATCTGCAAGT-3；GAPDH，forward 5-GAAATCCCATCACCATCTTCCAG-3和reverse 5-ATGAGTCCTTCCACGATACCAAAG-3。通过变性、退火、延伸即可对目的基因进行扩增。以GAPDH的 mRNA表达量标准化VEGFA的mRNA表达，采用2-ΔΔCt法进行计算。

本部分着重研究在制度资本参与下回归式产业推动落后欠发达地区经济发展的逻辑和机理。李国平 （2016）［30］指出由于家乡经济发展水平较低，大多数人为生计所迫去发达地区打工，打工也并不是单纯的打工，在打工的过程中逐渐成长为技术骨干，实现了一定的技术和资金积累，其回归的动力除了具有普通出于成本因素考虑的 “有形”成本节约外，也包括亲情、乡情、非正式制度等制度资本构成的无形成本节约。正是由于制度资本的介入，这些回归企业的目标函数和生产方式可能会发生改变，因此在大量数据的基础上采用回归模型进行实证分析具有重大的理论价值和现实意义。

正如上述研究所提到的，各种因素导致切口FL发生率增加的原因往往都离不开血供匮乏的影响。术后切口FL发生的病理过程表现为切口处脂肪细胞因缺血发生无菌性变性坏死导致脂肪细胞内的脂滴外溢[12]。因此，在进一步的实验中，本研究探讨了黄芪是否能够通过增加局部组织血液供应而预防切口FL的发生。既往研究显示[13]，黄芪作为多年生草本植物，能够促进血管的生成从而增加血液供应。本研究结果同样显示黄芪注射液能够促进HUVECs的增殖，同时增加VEGFA的mRNA表达，提示黄芪可能是通过增加局部组织血液供应而促进了局部组织的修复，从而减少了脂肪组织的坏死与液化。其机制可能是VEGFA可促进组织的修复与重建，明显改善创面局部微环境，从而激发血管再生和细胞增殖分化，促进创面的愈合[14]。尚有其他因素如高频电刀的使用也是切口FL发生的高危因素，电刀使用期间的高温一方面可引起局部皮下脂肪组织的碳化、变性、坏死，另一方面可导致脂肪组织内毛细血管的热凝固而出现栓塞后血运不畅[15]。

综上所述，脂肪局部组织因各种因素所致的局部血液供应不良是导致脂肪细胞变性坏死及液化的重要因素。本研究在术后切口护理中加用黄芪注射液外用后可显著减少切口FL的发生率，这一机制在实验中证实可能与黄芪能够促进血管内皮细胞增殖及VEGFA的表达有关。因此，黄芪注射液的局部外用在预防术后切口FL的发生方面具有一定的临床应用价值。

新课程改革倡导以学生为主体，但并不抹杀教师的作用，教师的示范和引导能有效增强学生学习的有效性。例如，进行品诗品人，走近“诗圣”—杜甫诗歌鉴赏专题的教学设计时，就如何理解“诗圣”这一称谓的内涵，教师首先示范分析了《登高》。

参 考 文 献

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