冠心病的发病机制是体内脂质代谢功能紊乱，引起血液中脂质沉积在冠状动脉管壁上，导致冠状动脉粥样斑块的形成和相应冠状动脉管腔的狭窄，使血流受阻、心肌缺血[1-2]。2型糖尿病是一种全身代谢紊乱性疾病，机体在遗传因素和环境因素的共同作用下，会出现多个器官损害。2型糖尿病患者罹患冠心病的风险是正常人群的5倍，且冠状动脉病变程度较严重，多为弥漫性多支冠状动脉病变[3-4]。2型糖尿病患者并发冠心病的机制尚不明确[5-7]。白细胞介素(interleukin，IL)-8及其受体是趋化性细胞因子超家族的成员，有研究发现，其在冠心病的发病过程中发挥着重要作用,IL-8可与受体CXCR2结合，引起炎性细胞，如单核巨噬细胞、中性粒细胞的聚集和释放，导致冠状动脉粥样硬化不稳定斑块形成[8-11]。有研究报道，在冠心病患者的血清中，IL-8及其受体的大量表达；在CXCR2-/-/ApoE-/-双基因敲除的小鼠主动脉中，斑块中脂质表达程度明显降低[12]。这说明趋化因子IL-8及其受体CXCR2的结合，可促进炎性细胞活化，参与动脉粥样硬化的发生和发展。本研究以IL-8为候选基因，采用病例对照的关联研究方法，探讨IL-8 rs4073单核苷酸多态性与冠心病合并2型糖尿病发病的相关性，以期发现冠心病合并2型糖尿病的早期诊断遗传学分子标记物，为冠心病合并2型糖尿病的治疗提供靶位点。现报道如下。

英格曼神甫说：“还有坏下去的余地吗?”他绝不会放这群穿黄军服的疯狗们从正门进来。让他们从正门进来，就把他们抬举成人类了。

1 对象与方法

1.1 研究对象 将自2015年3月至2017年8月于沈阳军区总医院就诊的冠心病合并2型糖尿病患者349例纳入研究组，将同期冠状动脉造影结果阴性且血糖正常者385例纳入正常组。冠心病诊断标准：冠状动脉造影显示至少存在1支心外膜下冠状动脉或其主要分支(右冠状动脉、左前降支、左回旋支)血管内直径狭窄≥70%。糖尿病诊断标准：空腹血糖浓度≥7.0 mmol/L或葡萄糖耐量餐后2 h血糖浓度≥11.1 mmol/L。研究组患者口服降糖药物治疗均有效。两组患者一般资料见表1。患者及其家属均签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会批准。

 

表1 两组患者一般资料比较

  

组别年龄/岁性别(男性/女性)体质量指数/kg·m-2高血压比例/%吸烟比例/%甘油三酯/mmol·L-1总胆固醇/mmol·L-1低密度脂蛋白/mmol·L-1高密度脂蛋白/mmol·L-1正常组(n=385)59.6±9.2245/14024.3±7.335.324.91.54±1.134.44±1.152.18±0.781.61±0.67研究组(n=349)60.5±9.8216/13325.1±5.557.952.71.95±1.345.42±1.382.73±0.921.10±0.69P值>0.05>0.05>0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05

1.2 基因型检测 空腹状态下，抽取研究对象的外周静脉血5 ml，在乙二胺四乙酸二钠抗凝管中，-70℃冰箱保存。采用北京天根生物试剂公司生产的DNA提取试剂盒提取外周血基因组DNA，样本收集完毕后进行浓度测定[13-14]。采用PCR法扩增基因组DNA，IL-8 rs4073引物按照Primer 5.0软件设计如下：上游引物F：5′-CTGCTCTGTCGTACTTTCTG-3′，下游引物R：5′-CAGAAAGTACGACAGAGCAG-3。PCR的扩增体系为25.0 μl，包括上游引物、下游引物各10.0 pmol，基因组DNA 0.2 μg，10×PCR缓冲液2.5 μl，dNTP 1.5 μl，rTaq酶3 U，去离子水加至25 μl。PCR扩增产物片段长度为1 781 bp。PCR反应在美国BIO-RAD公司生产的PCR仪器上完成。反应参数为：95℃ 3 min，94℃ 30 s，57℃ 30 s，72℃ 30 s。35个循环后，72℃ 7 min。

1.3 SNP基因型和酶切产物检测 目的片段PCR扩增产物以限制性内切酶MunⅠ(大连宝生物工程有限公司)消化[15]，酶切反应体系总体积10.0 μl，包括MunⅠ 0.5 μl，10×M Buffer 1.0 μl，0.1% BSA 1.0 μl，PCR产物7.5 μl。酶切反应条件为37℃温浴8 h。1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切产物，电泳缓冲液为0.5×TBE，250 V电压、200 mV电流下电泳20 min。

很多文化古老的民族都有关于文字如何创造的神话，比如仓颉造汉字，纳西木氏祖先牟保阿琮造东巴文等诸如此类的传说。没有文字的民族社会中的神话，主要讲述的是如何失去本来有的文字。下面以拉祜族、哈尼族、傈僳族、独龙族等藏缅语诸民族的神话文本为例，讨论他们的“无文字”文化逻辑。

IL-8是一种炎性趋化因子。IL-8与其受体CXCR2结合会发挥趋化因子活性；同时，其具有炎性黏附分子的功能，可参与炎症局部的级联放大反应，诱导巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞到达冠状动脉粥样硬化的斑块部位，加剧冠状动脉管壁的炎性反应，引起冠状动脉弥漫性改变[18]。IL-8 rs4073位于启动子区-251位点，其碱基的改变(A变成T)会导致启动子区转录因子的结合位点发生改变，阻碍转录因子与IL-8基因的启动子区结合，影响IL-8蛋白的转录和翻译，改变IL-8的细胞学功能，引起血管壁炎性反应，促进冠状动脉粥样硬化斑块形成。

1.4 血清中IL-8水平检测 采用ELISA法。于入院当日或次日清晨、空腹状态下抽取研究对象肘静脉血5 ml，摇匀后放置，3 000 r/min离心20 min，将处理好的血浆贮藏于-80℃低温冰箱[11]。按照试剂盒说明书以标准品浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，描绘标准曲线，根据标准曲线，计算每个测定样品的实际光密度值，根据公式计算浓度。

2 结果

2.1 基因型和等位基因分布频率 IL-8 rs4073单核苷酸多态位点基因型和等位基因分布频率符合Hardy-Weinberg平衡定律。IL-8 rs4073单核苷酸存在3种基因型，即TT型、AT型、AA型。TT型、AT型、AA型在正常组的分布频率为44.2%、41.3%、14.5%，在研究组为30.5%、46.3%、22.7%；T、A等位基因在正常组的分布频率为64.8%、35.2%，在研究组为53.7%、46.3%。两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

双口RAM的首要功能是存储目标信号,因为后面的算法模块包括多次迭代过程,中间需要进行多次目标信号的初始化。第2点功能是跨时钟域,因为信号捕获采集部分与算法模块的时钟频率不同,由双口RAM完成目标信号的跨时钟域。该RAM的位宽是18位,深度是512,采用Xilinx FPGA自带Block RAM配置而成,输入端时钟是400 MHz,输出端时钟是100 MHz。

2.2 危险因素分析 Binary Logistic回归校正其他冠心病危险因素后得出，IL-8 rs4073 T等位基因是冠心病合并2型糖尿病发病的独立危险因素(比值比=1.58，95%可信区间1.28～1.94)。

冠心病是一种严重威胁健康和生命安全的心血管疾病，其发病的病理生理基础是冠状动脉发生粥样硬化。冠状动脉粥样硬化是一种慢性炎性疾病：冠状动脉血管内皮细胞受损后，血小板发生黏附、聚集、释放，单核细胞、中性粒细胞等炎性细胞通过损伤的内皮细胞进入冠状动脉中层的血管组织，单核细胞分化成巨噬细胞，其吞噬胆固醇后，变为泡沫细胞，分泌活性氧、脂质介质及各种炎性细胞因子，发生炎症的级联放大反应，导致动脉粥样硬化不稳定斑块形成，并突出于冠状动脉的管腔，使冠状动脉管腔变窄，引起心绞痛、急性心肌梗死、脑中风等心脑血管并发症。2型糖尿病患者并发冠心病时，冠状动脉病变程度多较严重，呈弥漫性多支冠状动脉病变[3-4]。冠心病合并2型糖尿病受遗传因素的影响较大。随着生物学技术的进步和发展，高通量、大样本的单核苷酸多态位点筛查成为复杂疾病遗传易感性分析的重要手段[16-17]。

3 讨论

2.3 IL-8水平比较 观察组血清IL-8水平明显高于正常组[(286.15±62.81)pg/ml比(142.36±53.92)pg/ml]，差异有统计学意义(P<0.05)。

1.5 统计学方法 采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行处理。计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验；计数资料以例(百分率)表示，组间比较采用χ2检验；单个基因型和组间等位基因频率比较采用四格表χ2检验，以比值比和95%可信区间表示基因与疾病的关联强度；等位基因频率采用基因计数方法进行估计，以自由度为1的χ2检验判断各多态位点是否符合Hardy-Weinberg平衡；采用Binary Logistic回归校正其他冠心病危险因素，如年龄、性别、体质量指数、吸烟、高血压等混杂因素可能对结果造成的影响。以P<0.05为差异有统计学意义。

本研究结果显示，IL-8 rs4073单核苷酸存在3种基因型，即TT型、AT型、AA型，其在正常组的分布频率为44.2%、41.3%、14.5%，在研究组为30.5%、46.3%、22.7%；T、A等位基因在正常组的分布频率为64.8%、35.2%，在研究组为53.7%、46.3%。两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。IL-8 rs4073 T等位基因是冠心病合并2型糖尿病发病的独立危险因素(比值比=1.58，95%可信区间1.28～1.94)。观察组血清IL-8水平明显高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)。

最终，仲裁庭没有支持Glamis Gold公司认为美国政府有关措施对其构成间接征收的指控，认为该措施并不违反公平公正的待遇标准，并驳回了Glamis Gold公司的所有赔偿诉求。[注]参见NAFTA, Glamis Gold Ltd. v. United States of America, Award, June 8, 2009.

综上所述，IL-8 rs4073 T等位基因是冠心病合并2型糖尿病发病的独立危险因素，IL-8 rs4073在冠心病合并2型糖尿病患者的冠状动脉粥样斑块形成过程中发挥重要作用。

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