血脂异常除了引起动脉粥样硬化、增加心血管疾病和卒中风险外，还对心脑血管以外的其他器官造成损伤。自Moorhead于1982年首次提出“脂质肾毒性”假说以来，越来越多的研究发现脂代谢异常参与了肾疾病的进展。肾疾病常伴有各种类型的脂代谢异常，脂代谢异常又会进一步加重肾病进展。在多种肾疾病患者血清中检测到炎症因子水平增高，包括肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、转化生长因子-β(transforming growth factor -β，TGF-β)、白细胞介素(interleukin，IL)等，显示炎症反应参与了脂质介导的肾损害。调脂治疗如他汀类调脂药能够改善脂代谢异常，并具有抗炎和抗氧化作用。中药血脂康的主要成分为洛伐他汀，以及不饱和脂肪酸、植物甾醇等多种活性成分。血脂康和洛伐他汀在慢性肾病的血脂异常治疗中取得一定疗效，并且能有效降低脂代谢异常导致的多种风险。本研究通过分析血脂异常对高脂血症大鼠肾的影响及血脂康和洛伐他汀干预的效果，探讨氧化应激、炎症反应在这一过程中的作用及血脂康和洛伐他汀发挥调脂作用、保护肾功能的机制。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 主要药物与试剂 血脂康胶囊(北京北大维信生物科技有限公司，批号Z10950029)、洛伐他汀(北京万生药业有限责任公司，批号H10970090)。高脂饲料(北京科奥协力饲料有限公司)、维生素D3注射液(上海通用药业有限公司，批号H31021404)。大鼠TNF-α ELISA试剂盒、IL-6 ELISA试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)羊抗鼠TNF-α多克隆抗体SC-1350、羊抗鼠TGF-β多克隆抗体SC-8302(美国Santa Cruz公司)

1.2 研究方法

末了，老道故作神秘地拔下两根头发，然后向胖子借了打火机。当着胖子的面用火舌一燎，一根头发立刻被烧得扭作一团，空气中也微微有了油脂烧焦的味道。

1.2.1 模型制作及分组 采用高脂饮食联合维生素D3腹腔注射的方法诱导大鼠高脂血症[1]。雄性SPF级Wistar大鼠(n=42)，6周龄，体质量180～200 g，由中国军事医学科学院实验动中心提供。适应性喂养2周后，随机分为对照组(n=13)和实验组(n=29)，对照组予普通饲料喂养，实验组予高脂饲料喂养。高脂饲料配方为：3%胆固醇+0.5%胆酸钠+5%精制糖+10%猪油+0.2%丙基硫氧嘧啶+81.3%基础饲料。在高脂饲料喂养第1天，一次性给予维生素D3(根据体质量6×105 U/kg)腹腔注射，对照组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射。验证建模成功后，将对照组剩余大鼠(n=8)继续予普通饲料喂养，实验组剩余大鼠(n=24)随机分为高脂组(n=8)、洛伐他汀组(n=8，每天20:00洛伐他汀2.5 mg/kg灌胃)、血脂康组(n=8，每天08:00血脂康300.0 mg/kg灌胃)，继续喂养高脂饲料。

2.6.3 TNF-α免疫组化染色 TNF-α阳性表达位于肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞胞膜，呈棕褐色颗粒状。对照组肾小球系膜细胞未见TNF-α阳性物质表达，肾小管上皮细胞极少量TNF-α阳性物质表达；高脂组肾小球系膜细胞未见TNF-α阳性物质表达，肾小管上皮细胞大量TNF-α阳性物质表达；洛伐他汀组肾小球系膜细胞未见TNF-α阳性物质表达，肾小管上皮细胞中等量TNF-α阳性物质表达，明显少于高脂组；血脂康组肾小球系膜细胞未见TNF-α阳性物质表达，肾小管上皮细胞小到中等量TNF-α阳性物质表达，明显少于高脂组，并少于洛伐他汀组。见图3。

2018年5月， 格劳博中国大连生产基地开始了第二个扩建工程，建设将于2019年第一季度完成。改、扩建的设施为多功能化布局，扩建的6 700 m2生产区域中将可以装配所有类型的格劳博产品。格劳博中国大连生产基地的扩建，也是逐渐在为装配线业务直至中期的电动汽车领域打基础，这样可以给中国客户提供本地化的生产和服务，更好地促进格劳博集团在中国电动汽车相关业务的发展。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析。计量资料以均数±标准差表示，两组间均数的比较采用t检验，组间均数差异用单因素方差分析，两两比较采用LSD法。以P<0.05为差异有统计学意义。

2.4.4 TGF-β免疫组化染色 TGF-β阳性表达位于肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞胞膜，呈棕褐色颗粒状。对照组肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞TGF-β阳性物质少量表达；高脂组肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞TGF-β阳性物质大量表达；洛伐他汀组肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞TGF-β阳性物质表达较高脂组少；血脂康组肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞TGF-β阳性物质表达较高脂组少，与洛伐他汀组比较，差异无统计学意义。见图4。

1.2.5 肾形态学检查 取大鼠右侧肾1 cm，以4%多聚甲醛浸泡固定，常规脱水、透明、包埋、切片，Masson、PAS、免疫组织化学染色后光学显微镜下观察肾病理改变。

2.5 调脂治疗对肾功能影响 与对照组比较，高脂组大鼠Scr、BUN和UA升高(P<0.05)。与高脂组比较，血脂康组和洛伐他汀组的Scr、BUN、UA均降低(P<0.05)。洛伐他汀组与血脂康组的Scr、BUN、UA水平无明显差异。见表5。

1.2.3 血脂、肾功能及TNF-α、IL-6检测 使用日立7600-110全自动生化分析仪及其配套试剂盒、标准品检测血脂和肾功能。甘油三酯(triglyceride，TG)和总胆固醇(total cholesterol，TCHO)采用酶法，低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin，LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)采用遮蔽法，血清肌酐(serum creatinine，Scr)采用苦味酸比色法，血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)采用脲素酶法，尿酸(uric acid，UA)采用酶法。ELISA法检测血清TNF-α和IL-6。

2 结果

2.1 模型建立 高脂饲料喂养6周时，对照组和实验组的血脂水平(表1)。与对照组比较，实验组大鼠血浆的TCHO和LDL-C水平明显增高(P<0.05)，提示建模成功。

 

表1 对照组与实验组大鼠血脂水平比较

  

组别TGTCHOLDL-CHDL-C对照组0.40±0.121.51±0.320.13±0.010.56±0.08实验组0.59±0.198.92±2.713.81±1.120.55±0.20P值>0.05<0.05<0.05>0.05

2.4 调脂治疗对血浆MDA及T-AOC水平影响 高脂组大鼠血浆MDA水平升高，T-AOC活性降低。干预后，血脂康和洛伐他汀MDA水平下降(P<0.05)，T-AOC活性增加(P<0.05)。与洛伐他汀组比较，血脂康组MDA水平下降和T-AOC活性增加更明显(P<0.05)。见表4。

 

表2 药物干预6周时各组大鼠血浆血脂水平比较

  

组别TGTCHOLDL-CHDL-C对照组0.64±0.061.82±0.180.17±.0030.64±0.06高脂组0.67±0.1912.75±1.61①5.36±1.02①0.78±0.13洛伐他汀组0.31±0.11②8.79±1.75②3.80±1.08②0.96±0.33①血脂康组0.29±0.16②7.68±1.02②3.42±0.56②0.94±0.31①

 

注：与对照组比较，①P<0.05；与高脂组比较，②P<0.05

2.3 调脂治疗对炎症水平影响 与对照组比较，高脂组大鼠TNF-α和IL-6水平明显升高(P<0.05)。与高脂组比较，洛伐他汀组和血脂康组TNF-α和IL-6水平均明显降低(P<0.05)。与洛伐他汀组比较比，血脂康组TNF-α和IL-6水平更低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

基于上述对学术界住宅概念的认识，笔者认为，住宅是公民居住、生活的场所，是相对独立的空间，并为公民所实际占有。

2.2 调脂治疗对血脂水平影响 与对照组比较，高脂组大鼠TCHO、LDL-C升高(P<0.05)，但两组间TG、HDL-C比较差异无统计学意义(P>0.05)。与高脂组比较，洛伐他汀组和血脂康组TG、TCHO、LDL-C降低(P<0.05)，HDL-C升高(P<0.05)。与洛伐他汀组比较，血脂康组TG、TCHO和LDL-C更低，但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

黔南州合作社大多设置较低的入社门槛并积极吸纳小农户社员，带动小农户的意愿较强。统计结果显示，42家合作社都在积极扩大社员规模，占总样本量的85.71%；不设置入社门槛的合作社为29家，占样本量的61.70%；仅有2家合作社设置最低种植规模门槛。值得注意的是，随着“村社合一”模式的大力推广，黔南州出现不少旨在带动全村农户，尤其是贫困户的“村社合一”型合作社，在带动小农户发展方面发挥了重要作用。这类合作社是由村干部领办组建，以村集体资产或扶贫项目资金帮助全村农户或贫困户入股，通过抱团发展产业带动全村农户发展。在49家样本合作社中有9家“村社合一”型合作社。

 

表3 药物干预6周时各组大鼠血清TNF-α及IL-6水平比较

  

组别TNF-αIL-6对照组181.82±70.51181.37±89.80高脂组442.25±157.05①517.18±133.15①洛伐他汀组45.72±20.72②83.59±38.29②血脂康组27.94±14.95②③46.91±23.11②③

 

注：与对照组比较，①P<0.05；与高脂组比较，②P<0.05；与洛伐他汀组比较，③P<0.05

 

表4 药物干预6周时各组大鼠各组血浆MDA水平及T-AOC活性比较

  

组别MDA/nmol·ml-1T-AOC/U·ml-1对照组6.23±0.639.253±0.401高脂组11.52±1.98①5.766±0.211①洛伐他汀组9.62±0.48②6.671±0.123②血脂康组8.68±0.40②③7.348±0.391②③

 

注：与对照组比较，①P<0.05；与高脂组比较，②P<0.05；与洛伐他汀组比较，③P<0.05

 

表5 药物干预6周时各组大鼠肾功能

  

组别Scr/μmol·L-1BUN/mmol·L-1UA/μmol·L-1对照组56.50±4.607.30±0.65105.38±42.95高脂组67.88±10.88①9.54±2.49①228.00±82.45①洛伐他汀组55.50±6.05②7.99±1.02②112.13±33.71②血脂康组56.63±6.65②6.62±1.05②91.63±27.49②

 

注：与对照组比较，①P<0.05；与高脂组比较，②P<0.05

2.6 调脂治疗对肾形态学影响

2.6.1 Masson染色 对照组肾小球、肾小管及肾间质无明显胶原增生；高脂组轻度胶原增生与对照组有差异，系膜细胞基本正常；洛伐他汀组、血脂康组轻度胶原增生，同高脂组无明显差异。见图1。

  

图1 各组大鼠肾病理光镜下观察(Masson×400；a.对照组；b.高脂组；c.洛伐他汀组；d.血脂康组)

2.6.2 PAS染色 对照组肾小球基底膜正常，染色均匀，纤细；高脂组肾小球系膜区基质增宽，基底膜轻度增厚，系膜细胞轻度增生；洛伐他汀组、血脂康组同高脂组无明显差异。见图2。

(1)根据国内外砂土液化资料分析研究结果表明，人工沉积的尾矿砂与天然沉积的砂土一样，地震时都可能发生液化，影响砂土液化的主要因素是相同的，液化机理也是一致的。因此可以利用判别天然砂土液化的方法来判别尾矿砂。

  

图2 各组大鼠肾病理光镜下观察(PAS×400；a.对照组；b.高脂组；c.洛伐他汀组；d.血脂康组)

1.2.2 标本留取 药物干预6周后所有大鼠禁食过夜，给予5%的戊巴比妥钠(0.01 ml/kg)腹腔注射麻醉。打开腹腔，分离腹主动脉，在腹主动脉分叉处下方穿刺，取动脉血，随后处死动物，分离右侧肾。血液置于肝素(20 U/ml)抗凝剂和无抗凝剂EP管，3 000 r/min离心5 min，分离血浆和血清，用于检测血脂(血浆)、肾功能(血清)和TNF-α和IL-6(血清)。

  

图3 各组大鼠肾组织免疫组化染色(400倍；a.对照组；b.高脂组；c.洛伐他汀组；d.血脂康组)

1.2.4 血浆MDA与T-AOC检测 采用TBA法检测血浆MDA含量。通过检测使Fe3+还原为Fe2+的水平反映血浆T-AOC。

  

图4 各组大鼠肾组织免疫组化染色(400倍；a.对照组；b.高脂组；c.洛伐他汀组；d.血脂康组)

3 讨论

越来越多的证据表明，炎症在动脉粥样硬化、脂代谢异常等疾病中起重要作用[2-5]。炎症反应在肾疾病发生、发展中起了关键的作用，抑制炎症反应对延缓肾疾病的进展有重要的意义。他汀类药物可以通过改善脂质结构、影响炎症信号传导途径，而减慢慢性肾病的发展。他汀类药物可通过抑制单核细胞与内皮细胞的粘附[12-13]、减少内皮细胞和单核细胞表达CD40[14-15]、降低外周血单核细胞以及粥样斑块NF-κB的活性[16]、通过反馈调节Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)表达[17]等机制减轻炎症反应。

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以血浆TCHO和LDL-C升高为突出表现的脂质代谢紊乱是多种慢性肾疾病重要的伴随症状，更是引起和促进肾疾病发生发展的重要危险因素。本研究中，高脂组大鼠Scr、BUN和UA明显升高(P<0.05)，表明血脂异常可导致肾功能受损。本研究中，高脂饲料喂养12周时，与对照组比较，高脂组大鼠TCHO、LDL-C升高的同时TNF-α和IL-6水平也明显升高(P<0.05)。提示TCHO、LDL-C水平升高与炎症反应有密切关系，具有促炎作用。光镜下观察高脂组大鼠肾小球硬化、局灶纤维化、脂质沉积均不明显，仅有基底膜轻度增厚和系膜细胞轻度增生，考虑肾病理改变不明显可能与观察时间短有关。肾固有细胞(如系膜细胞和肾小管上皮细胞)正常情况下即可生成少量TNF-α，TNF-α可通过刺激白介素1β(IL-1β)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和TGF-β释放[7-8]，引起肾慢性炎症和纤维化。本研究中，高脂组大鼠的肾小管上皮细胞TNF-α阳性表达明显多于对照组，提示血脂异常引起肾损伤与TNF-α介导的炎症反应密切相关。TGF-β是一个多效性的细胞因子，在肾纤维化的信号通路中起重要作用。本研究中，高脂组肾系膜细胞和肾小管上皮细胞TGF-β阳性表达明显多于对照组，提示TGF-β也参与了血脂异常导致的肾损伤过程。

与高脂组比较，血脂康组和洛伐他汀组大鼠TG、TCHO、LDL-C均明显降低同时伴有HDL-C升高(P<0.05)，验证了血脂康和洛伐他汀降低TCHO、LDL-C及升高HDL-C的作用。尽管血脂康组的TG、TCHO、LDL-C水平略低，但差异无统计学意义(P>0.05)。与此同时，血脂康和洛伐他汀干预后，大鼠血清TNF-α和IL-6水平比高脂组明显降低(P<0.05)，提示除了调节血脂，血脂康和洛伐他汀均具有降低TNF-α和IL-6表达，抑制炎症反应的作用。血脂康组的TNF-α和IL-6水平均明显低于洛伐他汀组(P<0.05)，提示同等程度降低血脂水平的情况下，血脂康比洛伐他汀具有更强的抗炎作用。

浓缩脱水采用造粒流化床设备设计上升流速35m/h，排泥含水率按95%～96%考虑，设备尺寸3.0m×5.1m（H），一用一备，设备内筒配机械搅拌器，底部配备机械刮泥机。

与高脂组比较，血脂康和洛伐他汀治疗6周后大鼠Scr、BUN、UA水平均明显降低，提示血脂康和洛伐他汀具有肾保护作用。光镜下，血脂康组和洛伐他汀组大鼠肾的病理改变同高脂组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。但血脂康和洛伐他汀干预后，大鼠肾肾小管上皮细胞TNF-α阳性物质，肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞TGF-β阳性物质表达均明显少于高脂组，且血脂康组更为明显，表明血脂康和洛伐他汀可能通过抑制肾局部炎症反应而发挥肾保护作用，其中，血脂康较洛伐他汀具有更强的抗炎作用。其可能机制包括：(1)阻止ox-LDL介导的肾小球损伤[18]；(2)增加eNOS的活性和一氧化氮的利用率，改善肾血液流变学[19]；(3)抑制系膜细胞的增殖、细胞外基质的积聚和巨噬细胞的浸润[20]；(4)降低MCP-1的水平，减轻肾纤维化[21]。

综上所述，血脂异常能够激活肾局部炎症反应，通过多种途径进一步引起肾损伤。调脂治疗药物血脂康和洛伐他汀除了能够调节血脂，还具有抗炎、抗氧化作用，可降低血脂异常大鼠血脂、减少TNF-α和IL-6、MDA表达，抑制肾固有细胞TNF-α、TGF-β表达，从而发挥肾保护作用。与洛伐他汀相比，同等程度降低血脂水平的情况下，血脂康具有更强的抗炎和抗氧化作用。

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