氧疗是急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)的重要辅助治疗手段。《2015中国急性ST段抬高型AMI诊断和治疗指南》提倡入院后所有AMI患者应立即给予吸氧[1]。氧气不仅是一种治疗手段，也是一种有效的载体。湿化氧疗是通过氧气湿化液同时将药物通过氧气输送途径输入体内的一种辅助给药方法。薤香溶液湿化氧疗是我科诊治AMI的中医特色辅助疗法，前期临床研究显示对于缓解胸闷、气短、多汗等AMI临床症状具有较好的疗效，但对缺血心肌的保护作用及对肺组织的安全性尚不清楚。本研究观察了薤香方湿化氧疗对异丙肾上腺素(Isoprenaline，ISO)诱导的心肌梗死小鼠心肌酶谱和心肺组织病理形态的影响，评估其心肌保护有效性和对肺组织的安全性。

1 材料

1.1 实验动物与分组

SPF级C57BL/6雄性小鼠40只，体质量(25±5)g，由南通大学实验动物中心提供,动物许可证号：SYXK(苏)2016-0018，实验前1周开始饲养于南京中医药大学附属中西医结合医院动物房。按照体质量均匀随机分为4组(n=10)：正常对照组、模型组、薤香方组(XXF组)及薤香方+挥发油组(XXFHF组)。各组小鼠分笼饲养，饲养室温度保持20～29 ℃，相对湿度50%～60%。

1.2 实验药物

薤香方由薤白、木香、降香、红花、冰片等组成，经浸渍、渗漉、浓缩制备成流浸膏(合生药量1.2 g/mL)备用。薤白、木香和陈皮采用超临界萃取法提取挥发油备用。盐酸异丙肾上腺素注射液(2 mL∶1 mg，上海禾丰制药有限公司，批号：103701)。

Kistler 2015 Cuvée Cathleen Kistler Vineyard Chardonnay

1.3 仪器及试剂

心电图机(上海光电医用电子仪器有限公司，ECG-6511)，超声心动仪及5～12 MHz高频线控探头(GE公司，美国，VIVID-Q)，托盘电子分析天平(岛津公司，AY220)，电子秤(上海精密科学仪器有限公司，HANGPING FA1004N)，离心机(上海安亭科学仪器厂，TDL-5-A)，超低温冰箱(AshevILle，ULT1386-3-V30型)，石蜡切片机(Leica，RM2235)，光学显微镜(OLYMPUS，BX41TF)，酶标仪(芬兰雷勃，MK3)。LDH、CK、CK-MB试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)。

2 方法

2.1 ISO诱导的心肌梗死模型建立

取一定量的20%vol和72%vol红枣白兰地，分别向20%vol的红枣白兰地中加入不同浓度比的壳聚糖和明胶溶液，72%vol的红枣白兰地中加入不同浓度的硅藻土悬浮液。静置24 h，然后取出置于离心机内离心（4000 r/min、20 min），取离心管上清液，在波长700 nm处测其透过率，透过率越高，澄清效果越好。

2.2 分组给药方法

与正常对照组比较，注射ISO的各组小鼠血清LDH、CK、CK-MB均明显升高(P<0.01)，表明有心肌梗死发生。与模型组比较，XXF和XXFHF组LDH、CK、CK-MB升高的幅度均较低，差异具有统计学意义(P<0.05)，提示薤香方湿化吸入对缺血心肌具有保护作用。XXF和XXFHF之间比较，XXFHF组LDH、CK、CK-MB水平更低，但无显著统计学差异，提示添加挥发油可能会增加薤香方的吸收浓度从而提高薤香方的心肌保护效应。如表1所示。

“研讨与练习”题是课文教学后，学生全面理解课文的补充途径。教师能从学生的答题情况了解学生的学习情况以及学生之间存在的个体差异，从而反思教学过程；“研讨与练习”题也能提高学生解读课文的能力，集中学生的学习精力、活跃学生的思维。因此，“研讨与练习”是教学环节中必不可少的内容，是提高学生语文学习能力的关键点。根据现代散文“研讨与练习”题的特点，加上语文学科核心素养要求以及“知识与技能、过程与方法、情感态度与价值观”的目标要求，可以采用以下策略实施课后习题教学：

2.3 超声心动图检测心功能与心肌结构

各组小鼠肺脏组织病理学改变见图2。四组小鼠肺组织HE染色均未见明显病理损伤性改变，各组之间无差异，各级支气管、肺泡及肺泡间隔病理形态结构正常，支气管黏膜上皮结构完整，纤毛柱状上皮排列整齐，未见腺体增生；肺泡结构完整，无变薄、膨大等病理改变，局部偶见少许淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞浸润，未见颗粒物沉积；肺泡间隔内未见充血水肿，动脉管壁无明显增厚，肺泡腔未见扩大。此研究结果提示：薤香方湿化吸入对气管肺组织无损伤，临床应用是安全的。

2.4 心肌标志物测定

取右下肺置于4%多聚甲醛中固定24 h后，石蜡包埋切片，常规制片，HE染色行常规病理学检查。每张切片在光镜下随机选取3个视野，于光学显微镜下摄片观察组织形态学改变判断肺和气管内炎症程度、肺泡融合程度[3-4]。

2.5 心脏组织病理形态检测

取材心尖部心脏组织标本，置于4%多聚甲醛固定液中浸泡固定24 h，依次进行脱水、透明、浸蜡处理、常规石蜡包埋及连续切片，切片行苏木素-尹红(HE)染色，中性树脂封片，光学显微镜下观察并采集图片。采用盲法，从心肌变性坏死、间质纤维增生、心肌细胞空泡变性和间质炎细胞浸润4个方面对心肌损害程度进行观察与等级分类，每张片子至少观察5个视野，其分级标准：-，无异常发现；+，轻度损伤；++，中度损伤；+++，重度损伤。

2.6 肺组织病理形态观察

实验结束后，取各组小鼠眼眶血1 mL，4 ℃ 3 500 r/min离心5 min，分离血浆，取上层血清，采用LDH、CK、CK-MB试剂盒按试剂盒说明书操作，应用双抗体夹心法测定血清中LDH、CK、CK-MB的值。

参考课题组前期报道的方法[2]，ISO组、XXF组和XXFHF组小鼠采用腹腔注射ISO 15 mg/(kg·d)，连续注射3 d，第3次ISO注射30 min后，2%戊巴比妥钠麻醉小鼠，四肢仰卧位固定，检查小鼠心电图，记录Ⅱ导联心电图，以注射ISO前正常小鼠心电图为标准，观察给予ISO后心电图ST段和T波高度变化，计算末次给予ISO后ST-T变化百分率，ST-T变化百分率=(末次注射后ST-T高度-注射前ST-T高度)/注射前ST-T高度×100%，ST-T变化百分率>20%为造模成功。

2.7 统计学方法

HIV感染儿童应尽早开始HAART，如果没有及时HAART，艾滋病相关病死率在出生后第1年达到20%～30%，第2年可以超过50%。

3 结果

3.1 薤香方对ISO小鼠心肌损伤标志物的影响

正常对照组：置于50%氧浓度的氧疗箱中，吸氧12 h/d，连续7 d。ISO组：从第1天腹腔注射ISO开始置于50%氧浓度的氧疗箱中，吸氧12 h/d，连续7 d。XXF组：从第1天腹腔注射ISO开始置于50%氧浓度+薤香方湿化气(5 mL薤香方+15 mL生理盐水)的湿化氧疗箱中，吸入12 h/d，连续7 d。XXFHF组：从第1天腹腔注射ISO开始置于50%氧浓度+薤香方湿化气(5 mL薤香方+15 mL生理盐水)+0.7 mL挥发油的湿化氧疗箱中，吸入12 h/d，连续7 d。

 

表1 各组小鼠血清心肌酶检测结果

  

组别nLDHCKCK MB正常对照组10457．6±158．67409．9±227．82333．01±105．16模型组10822．0±52．23##1408．0±557．94##723．19±133．15##薤香方组10687．6±93．95∗1135．0±437．73∗585．36±114．40∗薤香方+挥发油组10645．4±66．07∗985．0±388．56∗540．26±85．97∗

注：与正常对照组比较，##P<0.01;与模型组比较:，*P<0.05。

3.2 薤香方对ISO小鼠心脏结构和功能的影响

超声心动图显示，与正常对照组相比，ISO组小鼠的EF和FS值显着降低(P<0.01)，LVEDD值增加(P<0.01)和LVESD值增加(P<0.01)，表明左心室明显增大、心功能下降。与模型组相比，XXF组和XXFHF组LVEDD和LVESD值明显降低(P<0.05)，EF和FS值明显增加(P<0.05)。XXF组和XXFHF组间各值比较无明显差异。此结果表明，薤香方可抑制ISO诱导的心肌重构和心功能下降。见表2。

 

表2 各组小鼠超声心动图检测结果

  

组别nLVEDD/mmLVESD/mmFS/%EF/%正常对照组106．140±0．2973．387±0．30550．0±4．8781．0±5．78模型组106．982±0．683##4．526±0．562##39．8±6．09##62．6±7．11##薤香方组106．421±0．364∗3．718±0．482∗47．4±7．87∗73．6±6．32∗薤香方+挥发油组106．388±0．631∗4．002±0．357∗48．1±7．79∗72．4±7．58∗

注：与对照组比较，##P<0.01;与模型组比较，*P<0.05。

3.3 薤香方对ISO小鼠心脏组织病理形态学影响

各组小鼠心肌组织病理切片HE染色结果显示：正常对照组小鼠心肌组织结构完整，心肌纤维横纹清晰规整，间质未见炎性细胞的浸润；模型组小鼠心肌组织结构紊乱，伴有不同程度的局灶性或片状细胞坏死，并可见炎细胞浸润和间质性水肿；与模型组比较，XXF和XXFHF组呈现小范围的心肌坏死，其坏死范围明显较模型组轻，炎性细胞浸润和间质水肿亦较模型组轻。提示薤陈方湿化氧疗可以不同程度减轻小鼠心肌坏死等组织形态学结构的异常改变，能够保护缺氧缺血状态下的心肌。病理等级分类结果更进一步证明了薤香方对ISO致小鼠缺血坏死的保护作用。结果见图1和表3。

3.4 对ISO小鼠肺脏组织病理形态学的影响

参照课题组前期报道的方法[2]，7 d后4组小鼠以2%戊巴比妥钠腹腔注射诱导麻醉后备皮，使用超声系统进行经胸超声心动图。在乳头肌水平的短轴切面中获得二维引导的M模式图像，M模式的扫描速度为200 mm/s。检测左心室收缩末期直径(LVESD)，左心室舒张末期直径(LVEDD)。然后，使用以下等式从M模式计算射血分数(EF)和短轴收缩率(FS)：EF=[(LVEDV-LVESV)/LVEDV]×100%，FS=[(LVEDD-LVESD)/LVEDD]×100%。

应用SPSS21.0软件进行分析，各组计量资料以表示，多组间均数比较采用One-way ANOVA分析，两两比较用LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

 

表3 各组小鼠心肌组织病理改变分级

  

组别n心肌坏死-++++++间质性纤维化-++++++空泡变性-++++++炎细胞浸润-++++++正常对照组1010000100001000010000模型组100523054152120316薤香方组100523153182003223薤香方+挥发油组100622181081104321

注：病理变化的程度分级：-.无异常发现;+.轻度；++.中度；+++.重度。

 

注：a.正常对照组；b.模型组；c.薤香方组；d.薤香方+挥发油组

图1 各组对心肌组织病理形态影响(HE,×100)

  

注：a.正常对照组；b.模型组；c.薤香方组；d.薤香方+挥发油组

 

图2 肺组织HE染色光镜下图像(×100)

4 讨论

氧气吸入疗法(氧疗)是临床上最常用的心肌梗死辅助治疗手段之一。自1900年Steele首次提出氧气吸入用于严重心绞痛辅助治疗以来[5]，对AMI患者院前及入院后常规予以吸氧的传统治疗观念至今已沿用一个多世纪。传统观念认为，吸氧具有增加动脉血氧含量，改善梗死周围缺血心肌的氧供，从而可缩小心肌梗死面积和降低急性心衰等心梗并发症的有益作用。同时，吸氧在患者意识中是一种重要的治疗措施，更是医务人员对于患者病情重视的一种标志，故吸氧可在一定程度上让患者及家属减轻焦虑和恐惧，不仅是一种治疗措施，更具有精神心理方面的作用[6]。因此，《2015急性ST段抬高型AMI诊断和治疗指南》指出：所有STEMI患者入院后一般处理均应立即给予吸氧[1]。根据以上指南及医务工作者的共识，AMI患者入院入住CCU后，一般均给予持续给氧。

湿化氧疗是通过将水或溶液蒸发成水蒸气或由0.05～50 μg小水滴组成的气雾湿化器装置供给病人氧气，可湿润气道黏膜。目前，国内外在氧气湿化液的选择方面均没有统一标准，国内多数采用无菌蒸馏水、冷开水或生理盐水作为氧气湿化液。湿化氧疗不仅是一种治疗方法，也是一条理想的药物给药途径。湿化液中添加药物可通过呼吸道黏膜吸收而快速起效，从而可以协同增强氧疗的效果。中药湿化氧疗是中药液经氧气湿化装置由气道吸入，经肺途径吸收入血的方法，是我科开展的一项中医药特色疗法，应用中药浸膏溶液作为湿化液给氧，即将氧疗中的湿化液由单纯蒸馏水用具有治疗作用的中药液取代，其本质是在给氧的同时，实施了气道的局部给药，在前期的临床应用于CCU的危重症患者取得了良好的临床疗效。中药湿化氧疗具有很多优点：操作简单、易行；用于湿化氧疗的中药大多具有芳香气味，可开窍醒神，芳香物质中的化学成分可兴奋神经，使机体产生放松、镇定的作用；吸入后的药物可直接作用于气道黏膜及肺泡，经毛细血管网迅速吸收，从而发挥药理作用；由于经肺泡吸收药物入血无肝脏的首过效应，因此起效较快。中药湿化氧疗开辟了一条特色的中医药辅助治疗危重症的途径。

①加大科技攻关力度。充分发挥首都科技优势，与首都高校和科研院所合作进行科技攻关。2000年以来共投入科研经费8 000余万元，实施了《密云水库流域水土流失综合防治体系及工程示范研究》《新农村污水综合治理示范工程》等重大项目30余项，对水源区水土流失、面源污染监测评价与防治、废弃矿山修复等问题进行了重点攻关。

薤香方浸膏湿化液是我科用于心肌梗死氧疗的经验方，对于缓解AMI患者的胸闷、气短、多汗症状具有很好的临床疗效。薤香方由薤白、木香、降香、红花、冰片等组成。薤白辛散温通，善散阴寒之凝滞，通胸阳之闭结，为治胸痹之要药，在本方中为君。现代药理研究表明薤白中含有多种生物活性成分，具有抗血小板聚集、抗菌消炎、抗氧化、解痉平喘、防治动脉粥样硬化等多种药理作用[7]。红花具特异香气，性辛温，味微苦，善通经、活血，增强薤白的温通之力，在方中为臣辅。木香辛苦性温，善行气止痛、调畅气机，兼能芳香健脾，为理气之要药；降香辛温，善活血止痛，两药共为佐药。冰片气清香，味辛、凉，归肺、心、脾经，具挥发性，可携药入肺入心，而为使。全方共奏温阳通痹、行气活血之功，符合心肌梗死的中医治疗法则。

薤香方在临床应用过程中存在对缺血心肌保护作用证据、对缩小心梗面积改善心功能的效应以及中药大颗粒物的吸入对气道和肺组织安全性等问题尚未明确，针对以上问题我们开展了本项动物实验研究。通过本研究可以看出，薤香方湿化吸入可有效减轻ISO诱发的缺血性心肌损伤，表现为心肌损伤标志物的降低；病理结果也证实，薤香方可以减轻ISO诱发的心肌缺血、炎症和间质水肿，可保护缺血状态下的心肌。超声心动图结果证实，薤香方可抑制ISO诱发的心功能减退。以上研究结果显示了薤香方具有保护缺血状态下心肌的可靠效应。通过对肺组织的病理形态学观察可以看出，薤香方浸膏水溶液的湿化吸入对肺组织无损伤，也未发现大颗粒物的沉积，表明薤香方吸入对肺组织是安全的。药理研究显示，挥发油具有降低急性心肌缺血模型大鼠血清中的CK、LDH活性，保护缺血心肌的作用[8]，因此本研究同时比较观察了挥发油对薤香方吸入疗效的增强作用，两者之间的差别虽未见统计学差异，但加用挥发油后总体有增效的趋势，显示出挥发油可能会增加薤香方有效成分的吸收。综合分析本研究的研究结果可以看出，薤香方湿化氧疗能够保护缺血状态下的心肌，对肺组织无病理性影响，辅助治疗AMI安全有效、简便廉价，是中医药辅助治疗AMI的一种特色临床疗法和护理技术，值得临床推广。

参考文献:

[1] 中华医学会心血管病学分会，中华心血管病杂志编辑委员会．急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南[J]．中华心血管病杂志，2015,43(5)：380-393．

[2] 王新东，祁晓霞，卞勇，等．黄芪丹参水煎液抑制ISO诱导的大鼠心肌重构及其下调STIM1,TRPC1,CaN和NFATc3表达的机制[J]．中国中药杂志，2017,42(14)：2738-2743．

[3] 王振伟，杨佩兰，顾超，等．百部浓煎剂对COPD大鼠肺组织病理及炎性介质的影响[J]．山东中医杂志，2014,33(12)：1010-1013．

[4] 于绍帅，季宇彬，王振伟，等．噻托溴铵对慢性阻塞性肺疾病大鼠呼吸功能和病变进程的改善作用[J]．中国实验方剂学杂志，2013,19(5)：190-194．

[5] STEELE C. Severe angina pectoris relieved by Oxygen inhalations[J]. British Med J，1900，2: 1568.

[6] 黄睿．CCU患者的心理护理[J]．华夏医学，2003,16(5)：693-693．

[7] 盛华刚．薤白的化学成分和药理作用研究进展[J]．药学研究，2013, 32(1)：42-44．

[8] 张波，李佳，刘红燕，等．降香挥发油研究进展[J]．中国药师，2014, 17(8)：1403-1406．