秦皇岛地区有400多年的葡萄种植历史，现有酿酒葡萄种植面积近0.67万hm2，葡萄生长期间容易遭受多种病原菌侵染，影响葡萄正常生长，甚至整株死亡，叶部病害是葡萄病害中的一大类病害。危害葡萄的常见叶部病害如葡萄褐斑病、霜霉病、白腐病等，均可侵染葡萄叶柄形成病斑。近年我科研团队调查发现了葡萄尤韦可拟盘多毛孢(Pestalotiopsis uvicola (Speg.)Bissett)，病原菌为尤韦可拟盘多毛孢，拟盘多毛孢属，也可以危害葡萄叶片引起叶斑病，在多个酒庄葡萄植株上均零星发病。这种病菌除了侵染葡萄以外，还可危害杧果[1，2]，枇杷[3]，山茶[4]，番石榴[5]等多种植物，引起叶斑，腐烂，溃烂等症状。病原菌侵染葡萄叶片形成不规则的灰褐色病斑，病健交界明显，黑褐色有红色晕圈，而目前未见该病菌危害葡萄方面的报道。因此，笔者旨在通过对葡萄尤韦可拟盘多毛孢病原菌的生物学特性的较为详细研究，为掌握该病的发生规律及有效防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

葡萄尤韦可拟盘多毛孢病菌由河北科技师范学院植物保护实验室提供。基础培养基为PDA培养基。

例如，在完成《赠汪伦》这一课的教学之后，教师可以利用一张纸遮住“白”“行”“上”“水”“尺”“我”，接着让学生将对应的汉字填进去，谁最先正确地完成谁就获胜。比赛结束后发现，有些汉字具有非常高的出错率，教师基于此可以单独拿出该字，组织学生开展“笔画接力”的游戏，对学生进行分组，让他们以小组为单位来进行比赛。在最后，在教师的引导下对整首古诗进行诵读，让他们的印象得到加深。

1.2 病原菌的生物学特性

1.2.1 温度对病原菌菌丝生长及产孢的影响 取活化菌种用0.4 cm打孔器打取菌饼接种至PDA培养基中央，设置温度为5，15，20，25，30，35 ℃等6个温度梯度，每个处理3次重复，采用十字交叉法每天测量菌落直径，连续测量5 d，并且观察菌落生长状况和颜色变化，7 d后每处理取5皿分别制成孢子悬浮液，在10×10倍显微镜下取10个视野测产孢量。

1.2.2 pH值对病原菌菌丝生长及产孢的影响 用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl缓冲液调节PDA培养基，制成4，5，6，7，8，9，10共7种不同pH值的PDA培养基，培养及测量方法同1.2.1。

试验结果表明，温度范围在5～30 ℃葡萄尤韦可拟盘多毛孢叶斑病病原菌丝均可正常生长、产孢，高于35 ℃或低于0 ℃均菌丝则不能生长(表1)。菌丝在20 ℃时生长最快，第5天的菌落直径为3.04 cm，5 ℃时生长最为缓慢，菌落直径为0.37 cm，和其他处理达到显著差异。产孢量则是25 ℃时最佳，每视野分生孢子数达173.72个，和其他处理达到极显著差异；15～20 ℃时产孢量较少，二者无显著差异；30 ℃产孢量每视野的分生孢子数只有6.6个，5 ℃条件没有产孢。

试验结果表明，病原菌在供试氮源培养基中均可生长(表5)，外加氮源中菌丝生长最快的是NH4NO3，第5天菌落平均直径为5.06 cm，与NH4Cl，KNO3的差异达极显著水平；其次是蛋白胨,NH4H2PO4，KNO3，NH4Cl。分生孢子产孢量最大的是NH4NO3，每皿分生孢子量为526.15个，其次是NH4H2PO4，KNO3，NH4Cl，蛋白胨；NH4NO3作为氮源的产孢量与NH4H2PO4的差异显著。与其他处理间差异极显著；在不添加氮源的CK培养基中菌丝及分生孢子均可生长，状况与碳源空白对照类似，菌丝半透明，菌落直径1.95 cm，每皿分生孢子量为47.16个。

通过复习课，学生具备了相对稳固的知识体系，具备了一定的科学探究能力与问题解决能力。教师可以引导学生结合本地资源开展多种形式的科学实践活动，尝试解决现实生活中与生物学息息相关的问题，进行社会责任的渗透。

1.3 统计分析

不同的pH值对病原菌的生长有明显的影响(表2)，pH值在6～9范围内适合菌丝生长，pH值为7时为菌丝生长最佳酸碱度，培养至第5天的菌落的平均直径为5.25 cm，各处理之间均存在极显著差异；pH值为7时最适宜产孢，此时产孢量达到最大，每皿分生孢子量为173.72个，与其他处理之间也达到差异极显著水平。

2 结果与分析

2.1 温度对葡萄叶斑病病菌菌丝生长及产孢的影响

1.2.3 光照对病原菌菌丝生长及产孢的影响 打取0.4 cm的菌饼接种至PDA中央，光照条件设置为全黑暗，光暗交替，连续光照，培养及测量方法同1.2.1。

3）烟气系统：本系统是由4台发动机排出的435℃烟气通过4台水-烟气换热器（1台换热器/发动机） 来加热经板式换热器A1～A4换热的热水，使烟温降低到130℃后通过烟囱排入大气。为在异常情况下将烟气直接排放（恢复到改造前状态），在每台发动机的排气管上设置2个气动蝶阀。正常运行时排空用的4个气动蝶阀关闭，而另外4个开启。

 

表1 温度对葡萄叶斑病病菌菌丝生长(菌落平均直径)的影响 cm

  

温度/℃培养时间/d12345每皿产孢量/个5 0.000.080.130.22 0.37 d D 0.00 c B150.401.081.551.76 2.30 b AB 32.36 bc B200.501.021.612.09 3.04 a A 43.44 b B250.590.971.291.66 1.36 c C 173.72 a A300.220.721.091.36 1.97 b BC 6.60 bc B

注：表中大小写字母分别代表1%和5%水平的差异显著性，下同。

2.2 pH值对葡萄叶斑病病菌菌丝生长及产孢的影响

采用DPS数据分析软件进行差异显著性分析。

2.3 光照对葡萄叶斑病病菌菌丝生长及产孢的影响

病原菌在供试的几种碳源培养基上均能正常生长(表4)，在不添加碳源的培养基上菌丝也可正常生长，但菌丝颜色接近透明，菌落直径为1.94 cm，每皿分生孢子量为47.16个。不同的碳源对菌丝生长及产孢量影响较大，菌丝生长最快的是纤维素，菌落直径达5.83 cm；其次为麦芽糖，可溶性淀粉，葡萄糖，蔗糖。5种碳源之间菌丝生长均达到差异极显著。而对于分生孢子产孢量最大的碳源为可溶性淀粉，在此条件下，每皿分生孢子量为278.62个；其次为葡萄糖，蔗糖。不同的碳源之间，可溶性淀粉与葡萄糖之间没有显著差异，与纤维素、麦芽糖以及CK达到极显著差异，与蔗糖之间有显著差异。

1.2.5 供试氮源对病原菌菌丝生长及产孢的影响 在PDA培养基上以葡萄糖为碳源测定NH4NO3，NH4H2PO4，NH4Cl，蛋白胨，KNO3等5种氮源对菌落及产孢情况的影响，以不加氮作为对照，培养及测量方法同1.2.1。

 

表2 pH对葡萄叶斑病病菌菌丝生长的影响

  

pH值5 d菌落平均直径/cm每皿产孢量/个 41.56 e E 0.00 d C 52.87 d D49.54 b cB 63.50 c C52.33 b B 75.25 a A 173.72 a A 84.53 b C26.68 bcd BC 93.80 c B 19.48 cd BC101.38 e E 0.00 d C

 

表3 光照对葡萄叶斑病病原菌菌丝生长的影响

  

光照条件5 d菌落平均直径/cm每皿产孢量/个 全黑暗 3.44 a A99.20 b A 光暗交替1.91 b B173.72 a A 连续光照2.01 b B 117.70 ab A

2.4 不同碳源对葡萄叶斑病病菌菌丝生长及分生孢子的影响

不同的光照条件对菌丝的生长也有一定的影响(表3)。全黑暗条件下的病原菌菌丝生长最快，培养至第5天菌落平均直径达3.44 cm，而连续光照与光暗交替下菌落平均直径差异不显著，连续光照菌落平均直径为2.01 cm，光暗交替条件下菌落平均直径为1.91 cm，但二者与全黑暗条件下生长的病原菌存在差异显著性。光暗交替与连续光照条件下病原菌的产孢量均较大，两者之间的差异不显著，但与全黑暗条件处理存在显著性差异。

 

表4 碳源对葡萄叶斑病病原菌菌丝生长(菌落平均直径)的影响 cm

  

碳源培养时间/d12345每皿产孢量/个 葡萄糖0.590.981.291.672.12 d D 173.72 ab AB 蔗糖0.460.861.081.281.39 e E 149.87 bc AB 麦芽糖0.561.261.863.034.56 b B70.12 bcd B 可溶性淀粉0.821.422.052.783.44 c C 278.62 a A 纤维素1.762.683.584.605.83 a A 11.74 d B CK0.320.801.151.461.94 d D 47.16 cd B

2.5 不同氮源对葡萄叶斑病病菌菌丝生长及产孢的影响

1.2.4 供试碳源对病原菌菌丝生长及产孢的影响 将PDA培养基中的葡萄糖分别以相同含量的蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉、纤维素代替，以无碳源作为对照，培养及测量方法同1.2.1。

这里淡水渔业资源丰富，年水产品总量近20万吨，罗氏沼虾产值突破30亿元，是国家级罗氏沼虾标准化养殖示范区，江苏省无公害水产品产地认证整体推进示范县（市）。

 

表5 氮源对葡萄叶斑病病原菌菌丝生长(菌落平均直径)的影响 cm

  

氮源培养时间/d12345每皿产孢量/个 NH4NO31.272.343.063.945.06 a A526.15 a A NH4H2PO41.472.132.923.724.71 b A 287.40 b AB NH4Cl0.381.381.722.032.47 d C34.92 c B 蛋白胨0.962.033.044.05 4.75 ab A33.08 c B KNO30.751.732.493.284.00 c B66.04 c B CK0.320.801.151.461.95 e D47.16 c B

3 结论与讨论

通过对葡萄尤韦可拟盘多毛(Pestalotiopsis uvicola (Speg.)Bissett)的生物学特性研究可知，适合病原菌菌丝生长的温度为20 ℃，产孢适宜温度15～25 ℃；pH值是7～9之间，最适宜pH值是7；病原菌对光照条件要求不严格，病原菌在全黑暗、光暗交替和连续光照条件下均能生长和产孢。以上结果表明，葡萄尤韦可拟盘多毛孢病菌在室温、中性或偏碱性、光暗交替条件下菌丝易生长产孢。葡萄尤韦可拟盘多毛孢病原菌供试碳源中适合菌丝生长的碳源为纤维素，供试氮源适合菌丝生长的氮源为NH4NO3；产孢碳源以葡萄糖和可溶性淀粉最好，氮源以NH4NO3和NH4H2PO4为最好。综合比较，最适病原菌生长的碳源为葡萄糖，最适氮源为NH4NO3。

拟盘多毛孢属可寄生超过50个科的植物，植物受害之后表现为叶斑、腐烂、溃疡等症状，严重影响产品的品质和产量。多种拟盘多毛孢在我国引起严重的植物病害[6]，在国内，杨秀娟等[3]对枇杷叶斑病菌拟盘多毛孢(Pestalotiopsis eriobotryfolia (Guba) Chenet Chao)的形态学、生物学特性进行了研究。葛启新等[4]明确山茶灰斑病的病原菌是斑污拟盘多毛孢(Pestalotiopsis maculans (Cda.) Nag Raj)。丁榕等[1]对杧果拟盘多毛孢叶枯病病原菌鉴定及其生物学特性进行了研究。在国外，Ismail A M等[2]对引起意大利杧果灰斑病的 Pestalotiopsis clavispora和Pestalotiopsis uvicola的表征和致病性做了详细研究。Keith L M等[5]对引起夏威夷番石榴赤霉病病原菌分离鉴定，致病菌为Pestalotiopsis spp.。然而国内外目前尚未见拟盘多毛属侵染葡萄的报道，笔者在葡萄病害调查中发现了葡萄尤韦可拟盘多毛孢可以侵染葡萄，并对其生物学特性进行了研究。

拟盘多毛孢菌的分类主要是根据分生孢子的形态特征和寄主专一性[7，8]，该菌不同的生长条件下生长状况不同，分生孢子形态也会有所差异。本次试验只对葡萄尤韦可拟盘多毛孢病菌的生物学特性做了初步研究，该病害的发生、流行规律及不同品种葡萄的抗性等还需要进一步的研究探讨。

我借给你。话到喉咙口，最后没说出来，陪着老钳工，叹了一口气，什么也没说，急急地回家了。他第一次没和老钳工交代病房的情况，就无声地走了，他不敢再停留，不敢再看老钳工无助的倦容，他怕忍不住把“我借给你”说出来。

参考文献：

[1] 丁榕,王廷丽,李博勋,等.杧果拟盘多毛孢叶枯病菌鉴定及其生物学特性研究[J].中国南方果树,2010,39(4):20-24.

[2] Ismail A M,Cirvilleri G,Polizzi G.Characterisation and pathogenicity of Pestalotiopsis uvicola and Pestalotiopsis clavispora causing grey leaf spot of mango(Mangifera indica L.) in Italy[J].European Journal of Plant Pathology,2013,135:619-625.

[3] 杨秀娟,陈福如,何玉仙.枇杷拟盘多毛孢菌的生物学特性及杀菌剂的药效研究[J].福建农业学报,2003,18(2):89-92.

[4] 葛志新,徐同,孙小桉,等.山茶灰斑病病原菌斑污拟盘多毛孢的研究[J].真菌学报,1993,12(3):200-204.

[5] Keith L M,Velasquez M E,Zee F T.Identification and characterization of Pestalotiopsis spp. causing scab disease of guava,Psidium guajava, in Hawaii[J].Plant Disease,2006,90(1):16-23.

[6] 习平根,李敏慧,陈一新,等.棕榈科观赏植物真菌病害鉴定[J].华南农业大学学报(自然科学版),2003,24(2):34-37.

[7] WEI Ji-Guang，XU Tong，GUO Liang-Dong,et al.ENDOPHYTIC PESTALOTIOPSIS SPECIES FROM SOUTHERN CHINA[J].菌物学报,2005,24(4):481-493.

[8] 韦继光,徐同,郭良栋,等.根据形态学和分子系统学特征界定拟盘多毛孢属的种[J].广西农业生物科学,2005,24(4):304-313.