《中国中医秘方大全》中记载的结痂酊是治疗烧伤和烫伤的常用药物,处方是由儿茶、黄芩、黄柏和冰片组成。结痂酊具有活血化瘀、消肿止痛、收敛生肌等功效，从而促进创面快速愈合[1]。结痂酊中含有丰富的酚酸和黄酮类化合物。从富含酚酸的草药中寻找促进伤口愈合的活性物质是药物筛选的可行方案[2]。本实验选择结痂酊作为研究对象，采用大孔吸附树脂纯化得到酚酸富集组分，对酚酸富集组分促进创面愈合的机制进行研究。

1 材料和方法

1.1 实验动物

雄性SD大鼠，150只，体重180～220 g,购买自大连医科大学实验动物中心，许可证号：SCXK(辽)2008-0002。

本文中的锆石U-Pb年龄数据是在国家科技平台——北京离子探针中心(中国地质科学院地质研究所)的SHRIMP II仪器上获得的，详细分析流程和原理参见文献[7-10]。应用标准锆石TEM(年龄为417Ma)对元素间的分馏进行校正。应用另一标准锆石SL13年龄为572Ma、w(U)为238×10-6标定所测锆石的U、Th、Pb含量，普通铅根据实测208Pb校正。数据处理采用ISOPLOT程序[11]。单个数据点的误差均为1σ，所采用的206Pb/238U加权平均年龄具有95%的置信度。

1.2 药物和试剂

儿茶、黄芩、黄柏购买自大连百度医药有限公司；没食子酸购买自温州瓯海精细化工公司；卡波姆购买自青岛天力源生物科技有限公司；湿润烫伤膏购买自广州迪康生物科技有限公司；福临酚试剂、多聚甲醛购买自大连万泽贸易有限公司；95%乙醇购买自大连凯美化工工程配套有限公司；水合氯醛购买自国药集团化学试剂有限公司;三乙醇胺购买自成都市科龙化工试剂厂；无水碳酸钠购买自天津市科密欧化学试剂有限公司；硫化钠购买自天津市福晨化学试剂厂。

(3)方案4(优化Egeneralized&TC)与方案5(优化Edirect&TC)相比，虽然Edirect增加了4.05%，但Eindirect降低了12.90%，即，无论是多目标优化还是单目标优化，考虑广义能耗的调度方案比直接能耗的调度方案，其Egeneralized更优。同时，方案4与方案5相比，方案4可有效降低加工辅助时间，TC降低了4.34%。

1.3 结痂酊的制备和纯化

标准曲线的绘制：精密量取对照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL分别置25 mL棕色容量瓶中，加Folin-Ciocalteu试剂1 mL，再分别加蒸馏水11.5、11、10、9、8、7 mL，用20%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30 min。以相应试剂为空白(即用碳酸钠溶液代替对照品溶液)，于760 nm处测吸光值。以对照品溶液浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。

烫伤后3 d，模型组皮肤表皮结构不完整，真皮及皮肤附属器官明显受损，可见明显的充血，部分小血管内有血栓形成，真皮下小血管周围有大量中性粒细胞、单核细胞等炎症细胞渗出。湿润烫伤膏组和治疗组皮肤表皮结构破损，真皮及皮肤附属器官受损程度较弱，血栓形成较少，炎症细胞渗出较少。

结痂酊纯化:称取适量样品，溶于50%乙醇，缓慢滴加到含HP20的大孔树脂柱中，用水洗至无色，然后用10%、30%、50%和70%乙醇溶液洗脱，流速为1 mL/min。合并洗脱液，减压蒸发，除去溶剂至干，并在真空烘箱中干燥，得到精制产物储存在-20 ℃以备后用。

主要分布在开发区大季家镇-古现镇-福山区臧家镇一带、芝罘区黄务-世回尧一带及牟平区大窑镇以西，该区面积235.8km2，综合指数值在0.0030～0.0074之间，主要水化学类型为Cl·HCO3-Ca·Na,HCO3-Ca·Na。多为丘陵地区的基岩裂隙水和低洼地带的喷出岩、碎屑岩类裂隙水。该区地下水中的各个评价指标均符合Ⅲ类水指标，个别指标可达Ⅰ类水标准，该区人口密集，工业厂房较分散，需加强对本区地下水的保护。

烫伤后5 d，模型组症细胞浸润更加明显，组织可见充血水肿。湿润烫伤膏组和治疗组炎性浸润明显减少，且治疗组可见新生小血管。

1.4 Folin法测定结痂酊有效组分中总酚含量

手术前24 h用10%硫化钠褪去大鼠背部的毛，伤前12 h禁食，自由饮水，10%的水合氯醛腹腔注射麻醉(3.5 mL/kg)，按照WALKER和MASON报道的制作标准建立模型[6]。将大鼠仰卧位固定在木板上,使裸露的背部皮肤暴露在木板孔内，进而浸于95 ℃水浴中15 s，造成总体表面积30%Ⅲ度烫伤模型，并经过病理学检查证实。伤后腹腔注射生理盐水(40 mL/kg)进行复苏，单笼饲养，自由饮水。将大鼠随机分为模型组、湿润烧伤膏组和治疗组。后两组每天用药2次。

结痂酊制备：将处方中药物用10倍量的75%乙醇分别超声提取3次，每次30 min，回收乙醇，干燥称重。提取物储存在-20 ℃以备后用。

烫伤后3、5、7、14、21 d，每个时间点6只大鼠,取大鼠烫伤皮肤组织,生理盐水冲洗，福尔马林固定，石蜡切片，HE染色观察。

1.5 动物烫伤模型建立[5]

采用Folin法测定结痂酊不同乙醇洗脱组分中总酚酸含量，每克提取物溶液中没食子酸当量毫克表示[4]。

1.6 烫伤大鼠中测定血清中IL-6水平

分别于烫伤前及烫伤后12、24、48、72 h，每个时间点取6只大鼠。将大鼠处死，采用腹主动脉取血4～6 mL，室温静置0.5 h后，血样3000 r/min离心15 min，收集上清液。根据ELISA试剂盒提供的操作步骤血清IL-6水平。

1.7 病理组织学观察

样品的测定：取0.1 mg/mL A、B、C、D、E、F提取物2 mL，置25 mL棕色容量瓶中，加Folin-Ciocalteu试剂1 mL，再分别加蒸馏水10 mL，用20%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30 min。以相应试剂为空白(即用碳酸钠溶液代替对照品溶液)，于760 nm处测吸光值。从标准曲线中读出每克提取物溶液中没食子酸当量毫克。

2 结 果

2.1 Folin法测定结痂酊有效组分中总酚含量结果

没食子酸标准曲线y=107.17x+0.008 8，R2=0.997 7。其中y对应于吸光度，x对应于总酚酸浓度(μg/mL)。

测量结果以GAE值表示样品中总酚含量。结果显示，A～F组GAE(mg/g)分别为：338.48±0.042、1093.12±0.036、644.07±0.041、421.29±0.052、371.13±0.055、575.25±0.061,可以看出各组总酚酸含量高低为B>C>F>D>E>A，即B总酚酸含量最高。因为酚酸被认为是有效的化合物，因此研究结痂酊中B组分对伤口的愈合作用。

2.2 创面组织病理形态学观察

各组大鼠烫伤后创面组织病理形态结果见图1。

专业课教师与思想政治教育工作者的协同育人是加强和改进高校思想政治教育工作的必然要求，是提升高校思政教育实效性的必然要求，也是促进大学生全面发展的必然要求，同时更是适应思想政治教育新形势的必然选择。

A、B、C、D、E和F分别表示水洗脱组分、10%乙醇洗脱级分、30%乙醇洗脱组分、50%乙醇洗脱组分、70%乙醇洗脱组分和乙醇提取物。对于伤口愈合实验，将100 g提取物(总酚酸含量最多的组分)与50 g卡波姆、250 g甘油、50 mL 1,2-丙二醇和适量三乙醇胺混合，将蒸馏水加至1000 mL[3]。

在语法方面，一些复杂的语法结构，长句子，与汉语表达不同的逻辑结构也会对听力理解造成干扰的作用。比如，在听力材料中出现的“He went to ask the woman standing there”,很多学生就会疑问该句子的意思到底是“He went to ask the woman who standing there”还是“He went to ask the woman to stand there”呢？复杂的句子结构导致理解句子的困难。由此可见，语言知识在听力理解中至关重要。

烫伤后7 d，模型组充血、水肿更加明显，出现少量的成纤维细胞和毛细血管。湿润烫伤膏组和治疗组可见结缔组织增生伴有血管再生，且治疗组创缘出现肉芽组织。

烫伤后14 d，模型组结缔组织成纤维细胞明显增生。湿润烫伤膏组痂皮开始脱落。治疗组痴皮下开始有上皮生长，新生复层上皮较厚，皮脂腺、汗腺等深部组织结构表浅。

烫伤后21 d，模型组织内仍可见少量炎症细胞浸润，部分创缘有上皮再生。湿润烫伤膏组炎性浸润基本消失结缔组织排列紧密、整齐，可见皮脂腺、汗腺等组织。治疗组新生上皮组织较厚且较成熟，结缔组织成纤维细胞增生更明显，表皮细胞排列整齐，创面基本愈合，接近正常皮肤。

 

2.3 结痂酊中总酚酸提取物对血清中IL-6的影响

烫伤前血清中IL-6的含量为(91±13)ng/L,烫伤后血清中IL-6的含量见表1。结果可见,模型组伤后各时间点血清中IL-6的含量均显著高于烫伤前(P<0.05)。烫伤后48 h时血清中IL-6的含量达到高峰，湿润烫伤膏组和治疗组血清中IL-6含量在各个时间点均低于模型组的相应时间点，但都高于烫伤前，且存在显著差异(P<0.05)。

浸取过程可能发生的反应有：BaS的电离，S2-的水解，熟料中的SiO2，空气中CO2与浸取液中的Ba(OH)2反应生成BaSiO3和BaCO3。提高浸取温度时，生成BaSiO3与BaCO3的反应趋势增加，Ba(OH)2的溶解度增加，生成BaCO3的反应程度减小，生成BaSiO3的反应程度却增加，因此应当选择适当的浸取温度来提高BaS的利用率。

 

表 1 血清IL-6的影响

  

组别12h24h48h72h模型组144±11168±12154±16141±11烫伤膏135±15*147±16* 139±11**127±14* 治疗组129±10*Δ135±11**Δ128±13**Δ119±12**Δ

与模型组相比：*P<0.05,**P<0.01;与湿润烫伤膏组相比：ΔP<0.05

3 讨 论

结痂酊中提取的总酚酸可以促进创面愈合，降低炎症因子的水平。研究表明天然药物中的类黄酮和酚酸具有良好的抗菌和抗氧化作用[7]。酚酸可以使微生物内的原生质凝聚，从而发挥抗菌作用。同时还可以使伤口渗出液中的蛋白质凝固形成结痂膜，从而减少分泌，预防感染。因此，对复方结痂酊中有效成分提取十分必要，可以为复方中药开发和应用提供依据，促进现代药学科学技术在传统复方中药研究中的广泛应用。

参考文献：

[1] 王培丽,孙先军,鞠昌瑛.烧伤结痂酊的制备及应用[J].中国民间疗法,2014,22(12):25.

[2] PONNUSAMY Y,CHEAR J Y,RAMANATHAN S,et al.Polyphenols rich fraction of Dicranopteris linearis,promotes fibroblast cell migration and proliferation in vitro[J].J Ethnopharmacol，2015,168:305-314.

[3] 王燕萍.中药烧烫伤凝胶的研制及质量控制[J].兰州大学学报(医学版),2005,31(4):63-65.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:附录62.

[5] 李武全.654-2对烫伤SD大鼠海马CA1区HSP70与Caspase-3表达的影响[D].昆明:昆明医学院,2009.

[6] WALKER H L,MASON A D Jr.A standard animal burn[J].J Trauma,1968,8(6):1049-1051.

[7] HATANO T,KUSUDA M,INADA K,et al.Effects of tannins and related polyphenols on methicillin-resistant Staphylococcus aureus[J].Phytochemistry,2005,66(17):2047-2055.