培美曲塞二钠（Pemetrexed disodium）为多靶点叶酸拮抗剂，用于治疗恶性胸膜间皮瘤 [1]，化学名称为N-[4-[2-（2-氨基-4，7-二氢-4-氧-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-烷基）乙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二钠盐七水合物。培美曲塞二钠与所有铂类抗肿瘤药无药代动力学方面的相互作用，临床应用上与卡铂联用治疗老年中晚期非小细胞肺癌[2]，培美曲塞二钠的不良反应也有报道[3]。合成工艺中大多采用对卤代苯甲酸经酯化、缩合、溴代、环合及成盐，在生产过程中，用到乙醇，有可能产生具有基因毒性的对甲苯磺酸乙酯[4～5]。

国内学者在培美曲塞二钠杂质研究方面的文献报道较多[6～7]，本文对样品中的对甲苯磺酸乙酯的残留量进行检测，本方法参考欧洲药典，采用衍生化的方法[8]，将对甲苯磺酸乙酯与碘化钠反应，生成易于检测的碘乙烷，通过检测碘乙烷确定对甲苯磺酸乙酯的量。

1 仪器与试剂

1.1 仪器：XS105电子分析天平（瑞士METTLER公司）；Agilent 7890B气相色谱仪（美国Agilent公司）；Agilent 5977A质谱仪（美国Agilent公司），配有电子轰击离子源（美国Agilent公司）。

1.2 试剂：对甲苯磺酸乙酯（东京化成工业株式会社）；乙腈（色谱纯，MERCK）；超纯水（屈臣氏）；培美曲塞二钠原料药（PH-602-140201、PH-602-140202、PH-602-140203，江苏豪森药业集团有限公司）。

2.8 其他 某些激素如肾上腺皮质激素、甲状腺激素、胃肠激素等水平不足也会引起食欲减退，甚至厌食。夏季气温高、湿度大，可影响胃肠功能、消化液的分泌和消化酶的活性而引起食欲不振，又将此特称为夏季厌食症。另外，有研究[18]表明，厌食症患儿常合并睡眠障碍，二者相互制约、相互依赖、相互影响。

2 方法与结果

2.1 色谱-质谱条件

2.1.2 质谱条件：电子轰击离子源（EI），扫描方式为SIM，离子化电压70eV，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，质谱检测器传输线温度200℃，选择质荷比（m/z）为127、156的离子进行定量检测。

2.1.1 色谱条件：气相色谱-质谱法（《中国药典》2015年版四部通则0521和《中国药典》2015年版四部通则0431）测定，用聚乙二醇20M交联聚合物为固定相（VF-WAXms 30m×0.32mm×0.25μL或极性相似）的毛细管柱，进样口温度为120℃；柱温40℃维持；顶空瓶平衡温度为70℃，平衡时间为15min。

2.3.6 溶液稳定性：精密量取2.0mL“2.3.4系统精密度”项下对照品溶液、3.0mL水、6g碘化钠，置顶空瓶中，密封，平行配制六份，顶空进样注入气相质谱仪，分别考察放置4、8、12、15h后的溶液稳定性。对照品溶液中对甲苯磺酸乙酯的RSD为3.2%，对照品溶液在15h内稳定性良好。

前置胎盘是妊娠晚期出血的主要原因，常常会引起产前产后难以控制的大出血，严重危及孕妇和胎儿的生命［1］。产后出血是分娩期的严重并发症，是指胎儿娩出后24 h内失血量超过500 mL、剖宫产失血超过1 000 mL，居我国产妇死亡原因的首位［2］。用于预防前置胎盘产后出血的临床措施包括宫缩剂的使用、结扎子宫动脉和宫腔填塞及介入栓塞等，以缩宫药的使用较为普遍、安全［3］。本研究观察了安列克联合缩宫素和益母草预防前置胎盘产后出血的疗效，以期得出更加安全有效的方案来预防前置胎盘产后出血。

2.3.5 重复性：精确称取六份培美曲塞二钠（0.1g），分别配置六份供试品溶液。依次进样，按外标法计算含量。检测对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸乙酯的量为0.01ppm，SD为0.008；说明本方法重复性良好，满足实验要求。

2.2.1 供试品溶液：取培美曲塞二钠100mg，置顶空瓶中，精密称定；精密加入2.0mL乙腈、3.0mL水、6g碘化钠密闭，作为供试品溶液。

从表5可知，振荡频率最佳值为2.4 MHz，吹雾气流气量控制在30 L/min时，雾气对粉尘的捕捉效果最佳，更有利于雾气颗粒与粉尘结合，能起到较好的抑尘效果。

2.3 分析方法确证

2.3.1 质谱分析：量取对照品溶液适量，顶空注入气相色谱仪，记录色谱图。碘甲烷与异碘丙烷裂解规律分别见图1；由此选择质荷比（m/z）为127、156的离子进行定量检测。

2.3.2 方法的专属性：在确定的色谱条件下，对空白溶液和对照品溶液进行检测，考察方法的专属性，结果如下。结果表明在该条件下，空白溶液不干扰对甲苯磺酸乙酯杂质的检测，专属性良好。

表1 对照品的专属性结果 Tab1 The specificity of reference solution

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图1 对照品溶液总离子流图（SIM模式） Fig1.TIC of Reference substance（SIM）

2.3.3 线性关系考察：①储备液A的配制，精密称取对甲苯磺酸乙酯53.21mg，置50mL量瓶中，用乙腈稀释定容，精密移取0.5mL置200mL量瓶，稀释定容，作为储备液A。②分别精密量取储备液 A 0.10mL、0.5mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.6mL 分别置于 50mL 量瓶中，用乙腈稀释定容，摇匀，作为 1＃、2＃、3＃、4＃、5＃、6＃溶液。③精密量取 1＃、2＃、3＃、4＃、5＃、6＃溶液各 2mL，置 20mL 顶空瓶中，分别精密加入3mL水、6g碘化钠密封。

对甲苯磺酸乙酯在相应范围内，线性相关系数大于0.9990，说明线性良好。

表2 对甲苯磺酸乙酯的线性方程及相关系数 Tab2 The calibration curve，correlation coeffient of reference solution

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式中：λ=α2(τ+κ)-τ，为比例因子，α和κ都是正常数，α决定x估值周围sigma点的分布状态，通常0≤α≤1；适当调节α、κ可以提高估计均值的精度；表示矩阵的第r列，r∈[1,2τ]。

2.3.4 系统精密度：按上述色谱条件，连续进样六针对照品溶液，计算峰面积的RSD（应≤10.0%）。对甲苯磺酸乙酯的RSD值分别为2.2%，小于10.0%的要求，说明系统的精密度符合要求。

2.2.2 对照品溶液：取对甲苯磺酸乙酯50mg，精密称定，置50mL量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.5mL，置200mL量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，摇匀，精密量取1mL，置50mL量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，制成每1mL中约含对甲苯磺酸乙酯50ng的溶液，精密量取2mL，加入顶空瓶中，加入3mL水、6g碘化钠密封，作为对照品溶液。

2.2 溶液配制

Fig.4 shows the fitting results of experimental Scenario 1.The following was observed:

2.3.7 方法准确度：精密称取对甲苯磺酸乙酯52.83mg，置50mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取0.5mL，置200mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为储备液（A）。分别量取储备液（A）0.5mL、1.0mL、1.6mL，置50mL量瓶中，作为储备液（B）、对照品溶液、储备液（C）。

精密量取对照品溶液2.0mL，置20mL顶空瓶，加入3.0mL水、6g碘化钠密封，制备5份。精密称取9份供试品（约100mg/份），分别置入 20mL 顶空瓶中，标记为 1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#、8#、9#，取 1#、2#、3#瓶分别加入储备液（B）2.0mL，再加入 3.0mL 水、6g 碘化钠密封，作为 50%（0.5ppm）的回收率测试液。取 4#、5#、6#瓶分别加入对照品溶液2.0mL，再加入3.0mL水、6g碘化钠密封，作为 100%（1ppm）的回收率测试液。取 7#、8#、9#瓶分别加入储备液（C）2.0mL，再加入3.0mL水、6g碘化钠密封，作为160%（1.6ppm）的回收率测试液。

如图1所示为循环喷砂系统中砂尘回收系统的整体方案.粉尘净化路线：管道表面→喷枪→容积式分离器（回收室）→旋风除尘器→滤筒除尘器→消音器→干净空气.

按照“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，按外标法计算含量。定量测定的对甲苯磺酸乙酯的平均回收率为97.9%，RSD为2.8%，说明本分析方法对对甲苯磺酸乙酯的检测是准确的。

3 讨论

用气相质谱法测定培美曲塞二钠中基因毒性杂质对甲苯磺酸乙酯的含量专属性良好；对线性关系、系统精密度、重复性、溶液稳定性、回收率进行测定，发现本方法均能满足上述实验的要求，对培美曲塞二钠中对甲苯磺酸乙酯进行准确定量，能满足对培美曲塞二钠中对甲苯磺酸乙酯的控制。连续多批次测定结果见表3，从测定结果可以看出该方法能良好控制培美曲塞二钠中对甲苯磺酸乙酯。

根据本品最大日服用剂量，我们对对甲苯磺酸乙酯进行严格控制，规定对甲苯磺酸乙酯的含量不得过0.0001%，即不得过1ppm；样品中对甲苯磺酸乙酯残留均符合限度要求。

表3 培美曲塞二钠测定结果（ppm） Tab3 determination results of Pemetrexed Disodium（ppm）

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参考文献

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