支气管哮喘(bronchial asthma),是儿童较为常见的慢性呼吸道疾病,是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,这种慢性炎症与气道高反应性相关,通常出现广泛而多变的可逆性气流受限,导致反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状,并可有肺功能的改变[1]。过去的研究理论认为,哮喘的免疫发病机制与Th1/Th2细胞失衡相关[2],是一种以嗜酸性粒细胞介导的,以炎症为特征的免疫功能失调性疾病。而最新研究表明,部分哮喘局部炎症性反应特点,不是以嗜酸性粒细胞为主,而是以中性粒细胞为主[3]。相关动物模型实验表明:细胞因子白介素-17(Interleukin-17,IL-17)可能与气道局部炎症及气道高反应相关。IL-17主要由Th-17细胞分泌,可以招募中性粒细胞并促使多种炎性因子释放,如通过诱导IL-8使中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在哮喘气道炎症局部集中[4～6],从而发生气道的高反应性,并对气道重构起重要作用[7,8]。在严重哮喘或激素耐药型哮喘病人的痰液或气管肺泡灌洗液中IL-17及中性粒细胞水平明显升高[9]。然而IL-17是否经气道而非全身途径在哮喘发病机制中发挥作用,是否对经典的Th1/Th2途径作了修补,尚未有相关临床研究证实。本研究通过诱导痰技术检测哮喘儿童痰液细胞成分及细胞因子,观察不同时期哮喘患儿诱导痰中炎性细胞和IL-17的含量的动态变化,探讨IL-17在气道局部所产生的作用从而进一步探讨其在儿童哮喘发病机制中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

根据GINA2016版方案,中华医学会儿科学分会呼吸学组于2016年修订《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》[1],收集2014-01～2016-12间内蒙古医科大学附属医院儿科门(急)诊就诊及住院的哮喘儿童(年龄≥5岁)72例,依据他们的临床表现分为三组:急性发作期组(n=25)、临床缓解期3mo组(n=24)和临床缓解期6mo组(n=23),同时选取来自同一时期本院健康体检儿童作为对照组(n=23)。对照组儿童均无食物及药物过敏史、近期无呼吸道感染病史及免疫疾病史。所有研究对象均排除有抗组胺药物、激素治疗史以及1mo内感染史。以上4组研究对象的年龄和性别等差异无统计学意义(P>0.05)。所有研究对象及家属均知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 标本收集和处理 痰液诱导参照农光民[10]诱导痰技术进行。以4%高渗盐水行超声雾化吸入(必要时先吸入短效β2受体激动剂,并测定PEF值),每个吸入间隔测定PEF,若下降≥20%则停止雾化,诱导20～30min,每5min嘱患儿清洁口咽部,诱导期间让患儿定时将痰咳入指定容器内,所收集到的标本在1h内处理,痰液在常温下2000r/min离心10min,然后取上清液,于-70℃冰箱保存备检;沉渣即刻涂片,HE染色,在高倍显微镜下观察并计数有核细胞的百分比。

1.2.2 备检标本IL-17浓度的测定 采用ELISA法测定标本痰上清液中IL-17的浓度,方法依照ELISA试剂盒说明书操作。

1.3 统计学分析

采用SPSS19.0统计学软件进行分析。计量资料描述以表示。组间比较采用单因素方差分析,任意两组间比较采用LSD法。应用线性相关分析分析炎性细胞百分比与IL-17含量间相关情况,P<0.05时差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组痰液中炎性细胞百分比和IL-17浓度(见表1)

2.2 不同时期哮喘患儿诱导痰液中炎性细胞细胞百分比与IL-17含量相关性分析(见表2)

 

表1 各组诱导痰液:中性粒细胞、嗜酸性粒细胞百分比和IL-17含量比较

 

Tab.1 The percentage of neutrophil,eosinophil and IL-17 levels in induced sputum in each

  

组别中性粒细胞(%)嗜酸性粒细胞(%)痰上清液IL-17(pg/mL)正常对照组(n=23)23.84±13.591.85±0.894.40±1.04急性发作期组(n=25)57.91±11.62*4.09±1.45*6.98±1.29*临床缓解期3mo组(n=24)40.14±11.67*#2.67±1.19*#5.29±0.74*#临床缓解期6mo组(n=23)33.80±12.46*#Δ2.15±1.42*#Δ5.19±1.10*#Δ

与对照组比较*P<0.05;与急性发作期组比较#P<0.05;与临床缓解期3mo组作比较,ΔP<0.05

 

表2 不同时期哮喘患儿诱导痰液中IL-17含量与中性粒细胞、嗜酸性粒细胞百分比的相关关系

 

Tab.2 The relationship between IL-17levels and the percentage of neutrophils and eosinophils in induced sputum of children with asthma in different periods

  

分组中性粒细胞与IL-17嗜酸性粒细胞与IL-17rPrP急性发作期组0.6440.0010.0720.737缓解期3mo组-0.3720.08-0.1120.611缓解期6mo组0.0950.6730.0180.935

接下来，老师要求学生从刚才的问题中“挑出你认为最重要、最有趣的问题”，并写到教室后面的白板上。学生们“倾巢出动”，把大大的白板写得满满的。就在我们以为本课即将结束的时候，教师又抛出了一个问题：“你为什么认为这几个问题更重要？”画龙点睛，真是让人拍案叫绝！

急性发作期哮喘患儿诱导痰液中炎性细胞百分比分别与上清液IL-17含量的相关性分析,散点图(见图1、2)。

  

图1 急性发作期IL-17含量与中性粒细胞百分比呈线性相关

 

Fig.1 There was a linear correlation between the IL-17 level and neutrophil percentage in acute attack

 

 

图2 急性发作期IL-17含量与嗜酸性性粒细胞百分比无相关性

 

Fig.2 There was no correlation between the percentage of eosinophils and IL-17levels in acute attack

3 讨论

在进行资产评估时，SME评估标准要求首先由评估师和委托方根据评估工作的任务和工作的地区确认工作的范围，标准中对矿产资源资产评估的工作范围并没有固定的规定。其次工作范围是可以随矿产资源资产、评估目的、价值类型、评估基准日和评估的预期用途等变化而变化。

研究结果表明,诱导痰中IL-17含量(pg/mL)与中性粒细胞百分比(%)、嗜酸性粒细胞百分比(%)相关关系,急性发作期IL-17含量与中性粒细胞百分比成正相关(r=0.644,P=0.001<0.05),其他各组间均无相关性。

哮喘是一种常见慢性气道炎症性疾病,其发病机制与多种细胞组分及细胞因子相关。在儿童哮喘发病的不同分级、分期,炎性细胞以及某些炎性因子的检查结果能相对准确的反映病人的病情变化。IL-17是一种前炎性细胞因子,主要是由CD4+记忆性T淋巴细胞和嗜酸性粒细胞等分泌,具有超强的募集中性粒细胞、诱导嗜酸性粒细胞浸润及促进多种炎性因子释放的作用[10]。Cao Y等[11]研究表明IL-17能通过上调中性粒细胞趋化因子IL-8促进中性粒细胞在气道的聚集,并提出IL-17所驱动的中性粒细胞炎症机制学说对研究新的哮喘治疗方案有着重要的意义。临床上可利用连续监测病人诱导痰中炎性细胞及IL-17浓度水平的变化来监测哮喘病人病情的变化,对于需要长期规范治疗的慢性哮喘患儿,可以据此制订出与具体病情相适应的个体化治疗方案,故IL-17浓度水平具有良好的临床参考价值。本研究结果表明:IL-17在急性发作期组显著增高,与高惠、张亚梅等[12～15]研究的IL-17的含量在急性发作期组增高的结果相一致。处于急性发作期内哮喘儿童,中性粒细胞的百分比与IL-17浓度呈正相关,而处于临床缓解期的哮喘儿童,二者无明显相关性;而嗜酸性粒细胞百分比与IL-17含量,在急性发作期组和临床缓解期组均没有明显的相关性,该结果与辛晓峰等[16]研究结果,IL-17与嗜酸性粒细胞呈正相关的结论不一致,可能由于入组病例有限或镜下炎性细胞计数的人工误差所致等有关,也可能提示IL-17有可能通过其他途径参与了哮喘的发病机制,有待于进一步的深入进行研究。既往研究大多未随访至哮喘缓解期3mo及6mo来评价细胞因子及炎性细胞变化,本研究连续监测到哮喘缓解期6mo患儿诱导痰液中IL-17及炎性细胞变化及相关性分析。临床上可利用连续监测病人诱导痰中炎性细胞及IL-17浓度水平的变化来监测哮喘病人病情的变化,对于需要长期规范治疗的慢性哮喘患儿,可以据此制订出与具体病情相适应的个体化治疗方案,故IL-17浓度水平变化具有良好的临床参考价值。

本研究通过儿童哮喘据严重程度不同分期诱导痰液中炎性细胞含量和上清液中IL-17含量的变化情况及其之间相关性研究,得出IL-17在气道局部募集中性粒细胞可能为哮喘发病的部分机制,并推测其在哮喘的发病及病情变化的过程中发挥着一定的作用,可为探讨哮喘发病机制提供理论上的依据,监测其变化水平可以了解哮喘控制水平。该结论使IL-17和气道炎症细胞在哮喘发病中的作用更加鲜明,为哮喘的发病机制提供部分临床研究资料,增加和拓展临床科研范围,为儿童哮喘的监测和防治提供了一种新的手段和思路。

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