心血管疾病是对人类健康威胁最严重的疾病之一，在全球死因顺位中位居第一[1]。高血压是心脑血管病主要的危险因素，当前我国高血压的患病率和绝对死亡数也在快速增长[2]，广西城乡居民高血压患病率也处于快速增长期[3]。高血压受遗传、环境共同影响而致，不同民族高血压患病率及危险因素不尽相同[4]。研究高血压人群遗传机制，对精准防控和个性化治疗具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

病例组为钦州市第二人民医院心血管内科住院及门诊的汉族高血压病患者；对照组为同院体检科性别相同、年龄±5岁以内的汉族成年健康体检者。所有的研究对象均为广西汉族人群，经伦理委员会批准，签署知情同意书。

高血压病诊断根据1999年WHO高血压诊断标准，即收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg。排除继发性高血压、冠心病、糖尿病、心肌病、心脏瓣膜疾病、先天性心脏病、甲亢、炎症、风湿免疫病、肿瘤、严重肝肾功能损害及过度饮酒、服避孕药史。年龄>18岁。

1.2 实验室检测方法

使用成品化试剂盒，提取血样、组织、细胞、唾液中的DNA。使用NanoDrop2000仪器进行OD值检测，1.25%琼脂糖凝胶电泳检测，DNA质检合格，转移至96孔板，置于-20 ℃储存备用。

根据NCBI上查找的瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential family vanilloid subtype 1，TRPV1)基因rs222747C/G、rs224534A/G、rs4790522A/C及rs8065080 C/T序列，选择包含位点的序列并输入Sequenom公司的引物设计软件Assay design3.1设计PCR反应和单碱基扩展引物合成。

取1.5 mL EP管中配置PCR master mix ，振荡低速离心。每个加样孔中加入4 μL PCR master mix，最后加入1 μL模板DNA(20 ng/μL)混匀，启动PCR 扩增反应程序。PCR反应结束后，将PCR产物用虾碱性磷酸酶 (shrimp alkaline phosphatase,SAP)处理，以去除体系中游离的dNTPs。在新1.5 mL EP管中配制碱性磷酸酶处理反应液，在碱性磷酸酶处理结束后，进行单碱基延伸反应。采用MassARRAYNanodispenser RS1000点样仪，将树脂纯化后的延伸产物移至384-well SpectroCHIPbioarray上，使用MALDI-TOF质谱仪分析，检测结果使用TYPER 4.0软件获取原始数据及基因分型图，并检查数据文件的完整性和正确性。

1.3 统计学分析

本调查共纳入病例组177例，对照组207例。两组男性所占比例分别为49.15%(87/177)和(51.21)106/207，年龄分别为(33.56±9.81)岁和(35.13±8.32)岁，两组间性别和年龄分布差异均无统计学意义(P>0.05)。两组人群TRPV1基因的rs17706630、rs222747、rs222749、rs224534、rs4790522 、rs8065080等6个位点基因型频率符合 Hardy-Weinberg平衡。对照组rs4790521位点基因型频率不符合Hardy-Weinberg平衡，两组rs9894618位点基因型均为CC，这两个位点未纳入进一步分析。

动物实验表明，TRPV1 能减轻高盐摄入诱导的氧化应激，减少超氧阴离子产生，提高 NO 的生物利用度，从而改善高盐膳食导致的阻力血管的内皮依赖性舒张功能的损害，预防高盐摄入导致的高血压[16]。也有研究认为，TRPV1 通道能够通过调节细胞内钙浓度、血管平滑肌增殖迁移及神经递质释放等来调节高血压等疾病，可能是预防高血压发生发展的一个有效靶点[17]。

2 结果

2.1 基本情况

根据测序的结果直接计算出基因型和等位基因的频率；通过SHEsisPL在线平台(http://shesisplus.bio-x.cn/SHEsis.html)进行Hardy-einberg(H-W)平衡检验，对符合H-W平衡的位点进行单倍型分析。一般情况比较采用SPSS 19.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验、计量资料采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2.2 TRPV1基因6个SNP位点多态性分布

金融行业健康发展是社会经济健康发展的决定性因素，绿色金融的实现，能够促进传统粗放型经济发展方式的转变，满足社会可持续发展现实需求，推进经济转型升级，全面提升经济社会发展水平。在此种情况下，对我国绿色金融可持续发展的长效机制构建进行探究，具有一定现实意义。

2.3 TRPV1基因6个SNP 位点组成的单倍型频率分布

本研究未能发现广西汉族人群TRPV1基因8个位点(rs17706630、rs222747、rs222749、rs224534、rs4790521、rs4790522、rs8065080、rs9894618)基因型、单倍型与高血压关联，但部分单倍型(如GGAAAT)可能是高血压危险因素。下一步我们将增大样本量，并结合环境因素进行分析，以进一步明确TRPV1基因多态性/单倍型与广西汉族人群高血压关联，为防治高血压提供更准确依据。

3 讨论

2.风险像素体系评估过程。风险像素指标，先按归一值原则进行变化，转化后的数值即为扣分值，分别以红、橙、蓝、绿来划分4个风险等级表示。红色等级为风险最高，绿色等级为风险最低，具体规则如下。

rs8065080位点T等位基因频率病例组高于对照组，两组基因型频率分布相当。两组人群TRPV1基因的rs17706630、rs222747、rs222749、rs224534、rs4790522等5个位点基因型频率和等位基因频率差别无统计学意义。见表1和表2。

在已进入上市辅导且IPO申请未被受理的395家新三板企业中，辅导期在半年以内的企业共有54家，占比13.67%。也就是说，除已申报和已进入辅导期的新三板企业外，新三板还有数量庞大的IPO后备军。这些企业一部分因为业绩暂时无法IPO，一部分出于新三板政策红利的考虑，则处于观望摇摆阶段。

表1 高血压组和对照组6个SNP位点等位基因频率分布[n(%)]

SNP病例组对照组P值OR值rs177066300.6951.083(0.726～1.615)G300(84.7)355(85.7)A54(15.3)59(14.3)rs2227470.1151.258(0.944～1.677)G161(45.4)165(39.8)C193(54.6)249(60.2)rs2227490.1331.284(0.925～1.783)G257(72.5)320(77.2)A97(27.5)94(22.8)rs2245340.4731.133(0.805～1.594)G82(23.1)87(21.1)A272(76.9)327(78.9)rs47905220.81.04(0.764～1.416)C245(69.2)290(70.1)A109(30.8)124(29.9)rs80650800.0471.335(1.003～1.779)C186(52.6)247(59.7)T168(47.4)167(40.3)

表2 高血压组和对照组6个SNP位点等位基因频率分布[n(%)]

SNP病例组对照组P值rs177066300.615GA50(28.2)51(24.6)AA2(11.2)4(19.1)GG125(70.6)152(73.4)rs2227470.239GC97(54.8)105(50.7)CC48(27.1)72(34.8)GG32(18.1)30(14.5)rs2227490.102GG92(51.8)118(57.1)GA73(41.2)84(40.5)AA12(7.0)5(2.4)rs2245340.515GA66(37.3)77(37.2)AA103(58.2)125(60.4)GG8(4.5)5(2.4)rs47905220.643CC86(48.6)99(47.9)AC73(41.3)92(44.4)AA18(10.1)16(7.7)rs80650800.127CT88(49.9)103(49.9)TT40(22.5)32(15.4)CC49(27.6)72(34.7)

表3 TRPV1基因6个SNP 位点组成的单倍型频率分布比较[n(%)]

单倍型SNP1770663022274722274922453447905228065080病例组对照组P值OR值ⅠGCGACC131(37)174(42)0.1560.810(0.605～1.083)ⅡGGAAAT 69(19.4) 60(14.4)0.0641.428(0.977～2.087)ⅢAGGGCT27(7.6)28(6.7)0.6431.138(0.657～1.970)ⅣAGGGCC16(4.5)13(3.1)0.3171.460(0.692～3.078)ⅤGCGACT16(4.5)12(2.8)0.2321.585(0.739～3.398)ⅥAGGGAT10(2.8)14(3.3)0.6580.830(0.364～1.893)ⅦGGAACC 9(2.5)16(3.8)0.3030.648(0.283～1.487)

经SHEsisPL在线平台分析，6个SNP位点多态性构成频率>0.03的单倍型共有7种，分别为：GCGACC、GGAAAT、AGGGCT、AGGGCC、GCGACT、AGGGAT和GGAACC。7种单倍型在两组间分布差别均无统计学意义，见表3。

高血压已成为危害人们健康的主要慢性病之一，是多种慢性疾病的危险因素[5-6]，对人类健康造成重大威胁，一旦发病需要终生治疗。高血压影响因素复杂，既包括性别、年龄、体质指数、家庭人均收入、文化程度、吸烟情况，也受遗传因素影响[7]。TRPV1，又称辣椒素受体(vanilloid receptor subtype1，VR1)，属于瞬时感受器电位家族成员之一，是一个非选择性配体门控阳离子通道[8]。TRPV1 可被辣椒素、多种内源性配体及酸、热等刺激因素激活,释放多种神经活性肽,进而参与痛觉整合、心血管系统调节、抗炎、调节胃肠功能、抗肿瘤等生理和病理生理过程[9]。TRPV1 基因位于人类 17p13 染色体，多个位点存在非同义单核苷酸多态性[10]。目前国内外已有研究证实，TRPV1基因多态性与多种疾病密切相关,且基因多态性在不同民族间存在差异[11]。rs222747、rs4790522位点的多态性与儿童哮喘和特异性咳嗽相关[11-12]；rs224534与痛觉相关[13]；rs8065080位点的多态性可能影响个体对肠易激综合症的遗传易感性[14]，并与膝关节炎相关[15]。

在强度分析的基础上，考虑涡轮盘多轴应力状态和平均应力，采用修正的Manson-McKnight法来进行多轴应力应变处理，并使用Goodman曲线进行平均应力修正。

参考文献

[1] GBD 2013 Mortality and Causes of Death Collaborators.Global,regional,and national age-sex specific all-cause and cause-specific mortality for 240 causes of death,1990-2013:a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013[J].The Lancet,2015,385(9963):117-171.

[2] Du P,Zhang B,Wang H,et al.The prevalence and secular trends of abdominal obesity among Chinese adults,1993-2011[J].Annals of Epidemiology,2015,25(10):797-799.

[3] 唐振柱，方志峰，李忠友，等.1991-2009年广西6市县≥18岁居民高血压流行趋势分析[J].中华高血压杂志,2015,23(3):262-266.

[4] 陶国高，陆海平，黄胜立，等.广西百色市隆林县苗族高血压流行特征与防控对策的研究[J].右江医学,2015,43(4):409-414.

[5] 朱婷，唐振柱，方志峰，等.广西部分地区中青年人群糖尿病前期危险因素研究[J].中国热带医学,2015,15(12):1475-1479.

[6] 陈玉柱，唐振柱，方志峰，等.广西四地区高尿酸血症与慢性疾病相关性分析[J]. 中国热带医学,2015,15(9):1102-1104.

[7] 尤思淼，迟戈夫，贾勇. 城乡居民高血压现状调查研究[J].吉林医药学院学报,2017,38(1):24-26.

[8] Pan HL.Sensing Tissue Ischemia:Another New Function for Capsaicin Receptors? [J].Circulation,2004,110(13):1826-1831.

[9] 张莉莉，马丽群，祝之明.瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)在心血管系统中的作用[J].中国分子心脏病学杂志,2007,7(1):51-53.

[10] Szallasi A,Blumberg P.Vanilloid (Capsaicin) Receptors and Mechanisms[J].Pharmacol Rev,1999,51(2):159-212.

[11] 王强，白雪涛，徐东刚，等.TRPV1 UTR-3基因多态性与北京汉族儿童哮喘的易感性研究[J].卫生研究,2009,38(5):516-521.

[12] 张小宁，杨娟，罗征秀，等.儿童非特异性慢性咳嗽病因及与TRPV1基因多态性的关系[J].中国当代儿科杂志,2012,14(7):524-528.

[13] Van Esch A,Lamberts M,Te Morsche R,et al.Polymorphisms in gene encoding TRPV1-receptor involved in pain perception are unrelated to chronic pancreatitis[J].BMC Gastroenterol,2009,9(1):97.

[14] 张志强.辣椒素受体基因多态性与肠易激综合征的相关性[D].甘肃：兰州大学,2010.

[15] Valdes A,De Wilde G,Doherty S,et al.The Ile585Val TRPV1 variant is involved in risk of painful knee osteoarthritis[J].Ann Rheum Dis,2011,70(9):1556-1561.

[16] 郝新忠.辣椒素激活TRPV1预防高盐膳食小鼠高血压的机制研究[D].重庆：第三军医大学,2011.

[17] 段志莉，吴珺，韩梅，等.TRPV1通道调节血管平滑肌改善高血压作用的研究进展[J].中国细胞生物学学报,2016,38(8):1020-1024.