“清肝降浊颗粒”是由长春中医药大学与吉林修正药业集团股份有限公司合作，以产学研的方式，研制开发的用于各类型脂肪肝治疗的中药复方新药。清肝降浊颗粒的处方来源于临床经验方，由黄芪、五味子、刺五加、决明子、陈皮、竹茹等中药组成，具有益气活血，化瘀通络的功能，主要用于各年龄段脂肪肝（气虚血瘀型）的治疗[1-8]。本研究采用正交试验法优选清肝降浊颗粒的提取工艺。

1 实验材料

1.1 药品与试剂 黄芪、五味子、刺五加、决明子、陈皮、竹茹药材购于吉林省北药集团。五味子醇甲对照品（购于中国食品药品检定研究院，批号110857-201201）。试剂甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

采用SPSS 19.0软件对结果数据进行统计分析。正态分布的计量资料以± s表示，2组间的比较采用独立样本t检验；NHL病理亚型多组间比较采用单因素方差分析，各亚组间的两两比较采用Tukey post hoc检验；SUVmax与Ki-67表达间的相关性采用Spearman相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

1.2 仪器 高效液相色谱仪（日本岛津LC-2010A），紫外检测器，Lab solution色谱数据工作站，CP225D型电子分析天平（德国塞多利斯天平有限公司），DZF型真空干燥箱（上海博迅）。

2 处方及制备工艺

2.1 提取工艺路线的设计[9-11] 本处方是在临床基础上总结出来的经验方，由黄芪、五味子、刺五加、决明子、陈皮、竹茹等中药组成的汤剂，有较好的疗效，为了保证疗效，仍采用水煎煮的方法进行提取。

马克思的劳动概念描述了人类自由劳动的一般场景，它具有两种特征：第一，人类劳动具备一种天然的人类劳动价值认同，即劳动首先表现为人通过自身体力和精力的消耗而与自然的物质能量进行转换的活动，如“一分耕耘一分收获”；第二，人类劳动突出了人类在劳动过程中的主体地位，在人与自然之间的劳动过程中，人赋予了劳动人的目的、意志和希望。

 

表1 水煎煮的因素水平表

  

因素 加水量（A）/倍数 煎煮时间（B）/h煎煮次数（C）/次1 4 1 1 2 1.5 2 3 8 2 3 6

2.2.1 考察指标 以出膏率和五味子醇甲含量为水提工艺研究的考察指标。

目前，欧盟国家在天然气的管输环节存在多种管理模式，既有市场型，也有垄断型。以德国为代表的私营模式中，每条私营管道由一个公司垄断经营。以英国、意大利和法国为代表的国家垄断模式中，由国家对基础设施进行大规模投资，推动天然气产业步入成熟期。英国在其天然气市场进入成熟期后，对国有公司进行了私有化，逐步放开市场，其他国家也正在逐步放开。以荷兰为代表的混合运营模式，由国有资本和私人资本合营的管网公司共同经营天然气管输业务。欧盟天然气管网监管机构包括欧盟委员会和各成员国政府监督机构，监督各环节业务分开，管道向第三方开放[2]。

2.2.3 正交试验样品中红景天苷含量测定 色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅为填充剂；以甲醇为流动相A ，水为流动相B ，按表2的规定进行梯度洗脱；检测波长为250 nm。

本文从不同角度对广西与东盟国家跨境贸易发展及跨境人民币结算现状进行深入分析。同时，选取当年累计出口额、当年累计进口额及跨境人民币结算量等具有代表性的指标，运用协整检验、构建VAR模型和脉冲响应函数等分析方法，对广西跨境人民币结算ln（crmb）与广西—东盟进出口贸易ln（ix）、ln（ex）三个指标变量的关系进行实证分析。

2.2.2 样品制备 按处方比例称取黄芪15 g、五味子10 g、刺五加10 g、决明子10 g、陈皮10 g、竹茹10 g为1份，共取9份，按照因素水平表的条件进行试验，滤过，合并提取液，减压浓缩，减压干燥，称重。

说出来。在自己情绪消极时，倾诉的对象就有限制了，一定要找一个充满正能量的人作为倾诉的对象，把自己的失望、气恼、伤感等说出来。只有把消极的东西说出来，人才有可能装入积极的东西。说出来，就是从可信赖的朋友或同事那里寻求安慰和帮助，缓解消极情绪。

立足宜昌市，依托湖北省，辐射沿海地区，服务装备制造行业，培养拥护党的基本路线，适应机械制造与自动化工作岗位需要，具有良好职业道德和敬业精神，具备钳工制作、铸造、锻压、焊接、普通机加工、数控加工、特种加工、识图制图、机械设计、工艺编制、质量检测、设备管理与维护、生产管理等能力的，德、智、体、美等全面发展的高端技能型专门人才。

 

表2 梯度洗脱数据

  

时间/min 流动相A/% 流动相B/%0～20 61 39 20～24 61→100 39→0 24～28 100 0 28～32 100→61 0→39 32～40 61 39

2.3 制剂成型性研究[15-17] 由于干浸膏有很强的吸湿性，直接制成颗粒在制备和贮存过程中都有一定的困难，需加入适量辅料以满足制备工艺和制剂要求，一般按干浸膏:辅料＝1:0.5～2 的比例加入辅料。

2.2.3.2 供试品溶液制备 取各组正交试验样品粉末（过三号筛）约0.5 g，置25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率250 W，频率20 kHz）30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 提取工艺条件的研究[12-14] 对水提取来说，影响提取效果的因素主要有3个，即：加水倍数、煎煮次数、煎煮时间。使用正交表 L9（34）安排试验，每个因素选择了3个水平，见表1。

由方差结果可知，各因素对试验结果影响的重要性依次为C＞B＞A，即煎煮次数C是主要影响因素，煎煮时间B及加水量A是次要影响因素。结合直观分析，煎煮法条件宜为A3B3C3，即：加8倍量水煎煮3次，每次2 h。由于方差分析得出A、B因素的任何水平对试验结果均无显著性影响的结论，为降低生产成本，节约提取时间，综合分析各因素对试验结果影响的重要程度，确定A3B2C3为最佳提取方案。即：加8倍量水煎煮3次，每次1.5 h。

以出膏率和五味子醇甲含量的综合评分为考察指标进行分析，结果见表4～5。

 

表3 正交试验数据

  

试验序号 投料量/g 出膏量/g 出膏率/%出膏率（最高30分记）五味子醇甲含量/g 五味子醇甲（最高70分记）综合评分1 65 7.7896 11.98 16.60 0.001214 20.53 37.13 2 65 10.6760 16.42 22.75 0.003295 55.73 78.48 3 65 9.7541 15.01 20.80 0.003830 64.77 85.57 4 65 9.1139 14.02 19.43 0.002150 36.36 55.79 5 65 10.3142 15.87 21.99 0.003607 61.00 82.99 6 65 8.7664 13.49 18.69 0.002200 37.21 55.90 7 65 14.0697 21.65 30.00 0.003572 60.41 90.41 8 65 10.5948 16.30 22.59 0.002124 35.92 58.51 9 65 11.1744 17.19 23.82 0.004139 70.00 93.82

 

表4 正交试验 [L9（34 ）] 及结果

  

试验号 因素 综合评分A B C D 1 1 1 1 1 37.13 2 1 2 2 2 78.48 3 1 3 3 3 85.57 4 2 1 2 3 55.79 5 2 2 3 1 82.99 6 2 3 1 2 55.90 7 3 1 3 2 90.41 8 3 2 1 3 58.51 9 3 3 2 1 93.82 I 201.18 183.33 151.54 213.94Ⅱ 194.68 219.98 228.09 224.79Ⅲ 242.74 235.29 258.97 199.87 I 67.06 61.11 50.51 71.31Ⅱ 64.89 73.33 76.03 74.93Ⅲ 80.91 78.43 86.32 66.62 R 16.02 17.32 35.81 8.31

 

表5 水煎煮提取的方差分析

  

注：F0.05（2，2）= 19.00，F0.01（2，2）= 99

 

方差来源 离差方和 自由度 方差 F值 显著性A 453.2497 2 226.6248 4.35 B 475.2734 2 237.6367 4.57 C 2039.4091 2 1019.7045 19.60 #D 104.0771 2 52.0385 1.00

2.2.3.3 测定方法 分别精密取对照品溶液与供试品溶液各10 µL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。结果见表3。

2.2.3.1 对照品溶液制备 取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每l mL含0.3 mg的溶液，即得。

2.3.1 辅料的选择和用量 糊精、蔗糖是常用的辅料，根据干浸膏有很强吸湿性的特点，经过试验摸索，确定干浸膏:辅料＝1:2 的比例加入适量糊精，用量是按处方在半成品（制颗粒前）时，加辅料至1000 g。

2.3.2 制颗粒所用湿润剂的选择 由于干浸膏、糊精、蔗糖混合后仍有一定的吸湿性，故以不同浓度的乙醇为湿润剂，制软材，再制湿颗粒，结果见表6。

 

表6 不同湿润剂制湿颗粒结果

  

实验号 润湿剂 制湿颗粒情况1 70%乙醇 黏性大，不能制成颗粒2 80%乙醇 黏性适中，可制成合格湿颗粒，干燥后颗粒大小适中3 90%乙醇 黏性小,可制成合格湿颗粒，干燥后颗粒小

由以上结果，选80%乙醇为湿润剂制颗粒。

2.3.3 湿颗粒干燥温度的考察 对湿颗粒干燥，选用了不同温度，干燥6 h，结果见表7。

 

表7 湿颗粒干燥温度试验结果

  

试验编号 干燥温度/℃ 水分/% 干燥颗粒情况1 80 2.15 颗粒干燥较好，易整粒2 70 2.24 颗粒干燥较好，易整粒3 60 2.78 颗粒干燥较好，易整粒4 50 4.25 颗粒干燥较好，易整粒

根据实验结果，选择湿颗粒干燥条件为：干燥温度80 ℃，干燥时间6 h。

最后确定的清肝降浊颗粒提取工艺为：加8倍量水，煎煮3次，每次1.5 h，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.30～1.35（80 ℃）浸膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入2倍量的糊精，混匀，以80%乙醇为湿润剂，制成颗粒，干燥，整粒，即得。

3 小结

本试验主要采用正交试验对清肝降浊颗粒的提取工艺进行了优化，确定了最佳工艺条件。通过对制剂成型性的考察，选择了糊精做为辅料。实验所制得的清肝降浊颗粒呈棕黄色、颗粒成型好，既保证了清肝降浊处方中药材有效成分的提出，又方便了患者的使用。

参考文献：

[1]中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒精性脂肪性肝病诊断标准(一)[J].新医学, 2005, 2(6):364.

[2]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社, 1979.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社, 2005.

[4]陈国辉,黄文凤.黄芪的化学成分及药理作用研究进展[J].中国新药杂志, 2008, 17(17):1482-1485.

[5]史琳,王志成,冯叙桥.五味子化学成分及药理作用的研究进展[J].药物评价研究, 2011, 34(3):208-212.

[6]刘斌,巩鸿霞,肖学凤,等.决明子化学成分及药理作用研究进展[J].药物评价研究, 2010, 33(4):312-315.

[7]郑小吉,詹晓如,王小平.陈皮研究进展[J].中国现代中药,2007, 9(10):30-33.

[8]张博华,张义生.竹茹炮制研究进展[J].湖北中医杂志,2013, 35(10):76-79.

[9]邢军,李正国.均匀设计法优选五味子药材水提取工艺[J].中国药业, 2008, 17(10):51-52.

[10]黄晓巍,初洪波,位鸿,等.正交试验法优选参红补血颗粒提取工艺[J].吉林中医药, 2012, 32(11):1152-1153.

[11]樊湘泽,姚金福,姚文斌,等.调和益胃颗粒制备工艺及质量标准研究[J].长春中医药大学学报, 2014, 30(5):802-804.

[12]初洪波,成光宇,赵德喜.和解止痛颗粒制备工艺及质量标准研究[J].长春中医药大学学报, 2015, 31(4):698-700.

[13]陈海兰,李晓华,初洪波,等.穿山龙配方颗粒质量标准研究[J].中国现代中药, 2015, 17(7):712-715.

[14]初洪波,王秋芳,刘艳华,等.香芍软肝胶囊提取工艺及质量标准研究[J].世界最新医学信息文摘, 2015, 15(68):251-252.

[15]王红,黄一平.养肝颗粒成型工艺的研究[J].云南中医中药杂志, 2008, 29(8):38-40.

[16]王佩,刘晓昱,徐红.复方芪苓无糖颗粒剂成型工艺的研究[J].中华中医药学刊, 2014, 32(2):354-356.

[17]王文君,陈华,向灿辉,等.附子颗粒制剂成型工艺研究[J].食品工业, 2016, 37(3):164-168.