皮炎湿疹是目前生活中、临床上非常常见的一种慢性皮肤病,是由多种不确定因素(外在和内在因素)引起的过敏性疾病,病程长且反复,治疗进展缓慢。其症状表现为强烈的皮肤瘙痒,皮损对称分布、多形损害、有渗出倾向[1]、水泡等,临床治疗困难棘手,对患者的生活工作都造成了极大的负面影响[2]。目前,西医临床多采用抗组胺类药物、糖皮质激素类等对症治疗性药物,虽起效较快,但易产生药物依赖性,并有一定副作用,其口服或注射给药均会导致药物在全身各个器官和组织中积聚,长期应用易对身体产生有害影响[3] 。因此,研发一类疗效显著,依赖性小,副作用小,方便使用的中药制剂很有价值。

凝胶剂作为中药药剂发展的一种新剂型,广泛应用于局部给药[4]。凝胶剂不仅制备工艺简便易行且外形良好美观,质地均匀,方便涂抹使用,局部给药吸收度好,稳定性好,不良反应少[5]。

肤康凝胶由黄芩提取物、苦参碱、丹皮酚、醋酸氯己定、冰片等五味药组成,具有消炎杀菌抗过敏的功效[6],主要用于各种真菌细菌引起的皮炎、湿疹,临床效果良好。处方中丹皮酚是中药毛莨科芍药属牡丹的干燥根皮牡丹皮中的主要成分,具有抗菌消炎美白生肌的作用[7]。为了控制肤康凝胶的质量,以处方中丹皮酚为指标成分,采用高效液相色谱法对其进行测定。本研究采用高效液相色谱(HPLC)法,测定肤康凝胶中丹皮酚的含量,为该肤康凝胶的质量控制和分析奠定了良好的基础。

1 仪器与试药

仪器:岛津LC-2010HT高效液相色谱仪(包含四元泵,VWD检测器,自动进样器,lab solution化学工作站),日本岛津有限公司；AE240型十万分之一电子分析天平,瑞士梅特勒-托利多公司。

试药:肤康凝胶(批号:20170515、20170516、20170517),辽宁中医药大学药剂教研室自制)；丹皮酚对照品(批号:0708-201604),中国食品药品检定研究院；乙腈,甲醇(科密欧色谱纯)；其他试剂皆为分析纯；水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及色谱柱

月旭 Welch ultimate XB-C18,4.6×200 mm,5 μm； 流动相:甲醇-水-冰醋酸(65∶35∶0.1)；流速:1.0 mL/min；检测波长:274 nm；进样量:10 μL；柱温:30℃。理论塔板数以丹皮酚计不得低于3200。

2.2 对照品溶液的制备

量取6份已知含量的肤康凝胶样品(批号20170515:丹皮酚含量为0.4275 mg/g),每份大约1.5 g,精密称定,精密加入丹皮酚对照品溶液(0.5335 mg/mL)1 mL,遵照 “2.3”项下方法制备供试品溶液,且遵照 “2.1”项下色谱条件进行进样测定,计算丹皮酚的含量,从而计算加样回收率,结果测得丹皮酚的平均回收率为98.9%,RSD为0.949%。见表1。

2.3 供试品溶液的制备

取肤康凝胶供试品约3 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加入用移液管精密量取的甲醇50 mL,密塞,称定其重量,对其进行超声处理30 min,放冷至室温,再次称定重量,用甲醇补足失去的重量,摇匀,滤过,取续滤液,过0.45 μm微孔滤膜,即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

依次吸取 “2.2”项下制备好的丹皮酚对照品溶液2、5、10、15、20 μL,按照 “2.1”项下的色谱条件分别进样,记录其各自的峰面积。以丹皮酚对照品的进样量(μg)为横坐标,与之相对应以丹皮酚的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,求得丹皮酚的回归方程分别为:

农产品生产过程监控系统的人机交互的接口包括PC机和智能手机平台，数据模型、人机界面的开发采用Microsoft Visual Studio.NET2008实现，如图8为智能手机上视频远程监控系统界面。该系统能够实现的功能有：①通过发送手机短信获取农作物的生长图片/视频信息；②能够控制摄像头云台的水平360°连续旋转和垂直90°自动翻转；③嵌入式专家系统提供智能分析决策；④通过放大和缩小窗口监控整体和局部视野。

2.5 专属性试验

重要方面或其相关的估值取决于定性和定量两个因素。从定性角度，某个参数由于自身的性质，可能是重要的，譬如国家风险。在矿产资源资产评估时，确定信息是否是重要的一般规则是分析其遗漏或错误陈述对评价报告使用者的决策所产生的影响，信息的重要性要求经过专业判断。在矿产资源资产评估时，如果评估师认为获得的数据不是十分精确或可靠(如某矿床矿物通过类比获得的选矿回收率)，则必须在评估报告中予以说明。

 

  

图1 样品HPLC图Fig.1 HPLC chart of samples

2.6 线性关系考察

精密称取肤康凝胶处方中缺少丹皮酚的阴性对照品3 g,遵照 “2.3”项下供试品溶液的制备方法,用同样的方法制备。

第一，自然计算系统必须是物理上可实现的。 计算系统对物质和能量的使用必须是有限的，所有物理实例化的量必须是有限的。例如，噪声通常是高频的，这限制了高频端的带宽。

2.7 精密度试验

依次取 “2.2”项下已经制备好的丹皮酚对照品溶液10 μL,遵照 “2.1”项下的色谱条件,连续6次进样,分别记录其每次进样的峰面积。经计算得,丹皮酚对照品峰面积的RSD为0.02%,此结果表明该仪器的精密度良好。

取批号20170515的同一肤康凝胶6份,按照 “2.3”项下制成供试品溶液,遵照 “2.1”项下色谱条件依次进样,记录其各自的峰面积,计算丹皮酚的含量。得丹皮酚的平均含量为0.0258 mg/mL,RSD为0.28%,说明该方法的重复性良好。

2.8 稳定性试验

取肤康凝胶(批号20170515)的供试品溶液,分别在0、2、4、8、12、24 h时间下,遵照 “2.1”项下的色谱条件,进行进样测定,记录不同时间的丹皮酚的峰面积。计算得丹皮酚峰面积的RSD(n=6)为0.47%,说明该样品性质稳定,在24 h内是稳定不变的。

2.9 重复性试验

鉴于以上原因，本研究参阅国内外大量文献并结合研究团队以往抗脊柱结核药物研究的基础，设计了以脂质体为载体包含异烟肼、利福平及吡嗪酰胺三种临床常用抗结核药物的纳米微粒（HRZ三联抗痨药脂质体），同时充分考虑提高宿主免疫力、增强宿主自身抗感染能力在抗脊柱结核中的作用，选择结核性肉芽肿形成的关键基因TGF-β1为靶点，采用siRNA技术与脂质体纳米微粒结合，起到靶向基因沉默及联合用药的抗结核作用。

2.1 0 加样回收率试验

精密称取0.05335 g丹皮酚对照品加甲醇溶解并稀释100 mL,精密量取5 mL置50 mL容量瓶中,定容,作为对照品溶液。浓度为:0.05335 mg/mL。

Y=6030388.98612X-12027.27900,R=0.9998结果表明,在0.1067～1.067 μg的范围内进样丹皮酚,其进样量与峰面积成良好线性关系。

分别取丹皮酚对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液,依次遵照 “2.1”项下的色谱条件进行测定(检测器A 274 nm),并分别记录色谱图,结果显示阴性供试品对该实验无干扰,见图1。

 

表1 丹皮酚回收率考察结果Table 1 Paeonol recovery results

  

11.5542 0.4275 0.5335 0.5326 98.594 2 1.5563 0.4275 0.5335 0.5291 97.920 3 1.5538 0.4275 0.5335 0.5402 100.007 98.9 0.949 4 1.5559 0.4275 0.5335 0.5403 100.019 5 1.5567 0.4275 0.5335 0.5293 97.969 6 1.5570 0.4275 0.5335 0.5347 98.985

2.1 1 样品测定

取批号20170515,20170516,20170517的肤康凝胶样品各2份,遵照 “2.3”项下的方法制备供试品溶液,遵照 “2.1”项下的色谱条件进行进样测定,记录各自的峰面积。结果得丹皮酚供试品中丹皮酚的含量分别为0.4275 mg/g、0.4302 mg/g、0.4280 mg/g。

我们必须面对现实的政治生活，所以我们就应该探究一下大多数城邦所能采取的最优良的政体，以及大多数人都能达到的优良生活。这两个“大多数”，充分表达了亚里士多德的现实关怀。也就是说，他要探讨城邦治理的平常可行之理，又要探讨人们的寻常可获之德。

3 结 论

(1)本实验起初尝试了甲醇-水体系,甲醇-水为70∶30、60∶40,供试品中丹皮酚的色谱峰分离效果不好,系统适应性差,没有办法得到满意的色谱峰型。又尝试乙腈-水(在水中加入0.1%的冰醋酸),出现色谱峰拖尾的现象,后又尝试甲醇-水(在水中加0.1%的冰醋酸),丹皮酚的色谱峰峰型良好,分离度高,可以准确测定丹皮酚含量,符合系统适应性的要求。

在选择流动相甲醇-水-冰醋酸的体系比例时,分别尝试了甲醇-水-冰醋酸为70∶30∶0.1、65∶35∶0.1、60∶40∶0.1等各个不同的比例,结果发现当甲醇-水-冰醋酸的比例为65∶35∶0.1时丹皮酚的色谱峰与供试品中其它峰分离效果好,甲醇所占比例小于此比例时分离效果不佳,且与供试品中其它峰分离效果不理想,甲醇所占比例大于此比例时分离效果较好,但保留时间过长,综上考虑,最后选定甲醇-水-冰醋酸的比例为65∶35∶0.1,有较好的分离效果。

(2)本实验对供试品溶液制备时超声处理的时间进行考察,取三份供试品,加甲醇分别超声20 min、30 min、40 min,结果显示,超声处理30 min后,含量测得结果不再增加。说明,超声处理30 min,可以充分提取出样品中的丹皮酚。

1.2.1 试验材料 试验材料选择幻粉流云、少女花语和芙蓉面的2年生地径1 cm的健壮苗木各48棵。2017年移栽时施基肥1.50 kg，2018年展叶期和花期各开展施肥1次，传统追肥采用穴施，距根部5 cm处追肥0.75 kg，叶面肥施用量一致。

(3)本实验建立了高效液相色谱法测定丹皮酚含量的方法,专属性强,方法简便,易于操作,丹皮酚含量测定结果准确,可应用于肤康凝胶的质量控制。促进了凝胶剂在临床上治疗皮肤病的应用。

参考文献

[1] 范瑛,宋坪.中药湿敷治疗湿疹的研究进展[J].环球中医药,2015,8(1):108-112.

[2] 陈晓瑾,严俊,赵晓英,等.甘草酸二铵磷脂复合物凝胶治疗小鼠慢性皮炎-湿疹的药效学研究[J].中国现代应用药学,2014,31(9):1049-1052.

[3] Wang J W,Su H.Pseudohyperaldosteronism[J].Chin J Hypertens(中华高血压杂志),2009,17(2):187-190.

[4] 何琪莹.局部药用凝胶剂的研究新进展和新应用[J].中国药物与临床,2006,6(5):384.

[5] 马思扬,刘悦,孙晋民.生物医学凝胶剂的研究进展[J].解剖科学进展,2013(6):560-564.

[6] 吕成明,刘海燕.丹皮酚的药理作用研究进展[J].医药导报,2005(2):142-143.

[7] 贾瑞艳,刘影.HPLC法测定六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚的含量[J].黑龙江医药,2009,22(2):120-122.