生甘草能清热解毒,润肺止咳,调和诸药之性；炙甘草能补脾益气。甘遂泄水逐饮,消肿散结,用于水肿胀满,胸腹积水,痰饮积聚,气逆喘咳,二便不利,外用可治痈肿疮疡[1],甘草与甘遂为中药十八反药对,近年来对中药十八反的毒理及其物质基础的研究取得了一定的成就,但对其相反药对的化学成分的含量变化的研究较少,本实验以甘草在不同配伍甘草酸的含量变化为主要方向,进行研究。甘草的化学成分多且复杂,其主要的化学成分为黄酮类和三萜化合物[2],还有少量生物碱,木质素和香豆素等,用HPLC能对甘草化学成分有较好的分离,但由于常规紫外检测所能提供的分子结构信息较少,故现在主要用于对甘草酸等特定成分进行分析和检测[3]。本实验采用HPLC测定甘草在不同配伍药对中甘草酸的含量。

1 仪器与材料

1.1 仪 器

色谱柱(SinoChrom C18反相色谱柱,4.6 mm×200 mm,5 μm)；EL204型万分之一电子天平,梅特勒-托利多仪器上海有限公司；KQ-3200E型超声波清洗机,昆山市超声仪器有限公司。

1.2 药物与试剂

甘遂、甘草(甘肃),安国市康达中药材有限公司；半夏(四川),毫州市万珍中药饮片厂；白芍(安徽),安国市神禾中药材饮片有限责任公司；甘草酸铵(批号:110731-200615),中国药品生物制品检验所；甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；水(纯净水),杭州娃哈哈责任有限公司；磷酸,天津市大茂化学试剂厂。

2 方法与结果

2.1 配伍变化研究

2.1.1 HPLC色谱条件

引理 6 当10-点v关联5个三角形,且它的邻点均为3-点,则这5个三角形中如果有4个为穷的,第5个三角形一定为富的。

SinoChrom C18反相色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm), 以乙腈和0.05%的磷酸溶液(36∶64)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温为室温,检测波长250 nm(见图1)。在此条件下,各种供试品溶液甘草酸铵单铵盐与其他成分的分离度良好(见图2～图5)。

  

图1 甘草酸单铵盐光谱图Fig.1 Monoammonium salt spectrogram of glycyrrhizic acid

  

图2 甘草酸铵对照品色谱图Fig.2 Chromatogram of ammonium glycyrrhizate control

  

图3 甘草单药图Fig.3 Glycyrrhiza single drug chromatogram

  

图4 甘草-甘遂对药色谱图Fig.4 Licorice kansui root on drug chromatogram

  

图5 甘遂半夏汤色谱图Fig.5 Chromatogram of kansui pinellia decoction

2.1.2 对照品溶液的制备

精密称取对照品甘草酸铵2.0 mg,置10 mL的棕色容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,制成每1 mL含0.2 mg的对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备

(1)甘草单煎供试品溶液

取粒度均一的炙甘草约2 g,精密称定,回流煎煮2次,每次加水50 mL,每次煎煮时间30 min,合并煎煮液,浓缩至约10 mL,待药液放冷后,加95%乙醇是药液含醇量达70%(约加95%乙醇28 mL)静置12 h,抽滤,滤液用70%乙醇定容到50 mL容量瓶中,从中取出10 mL于50 mL容量瓶中,用70%乙醇定容至刻度,即得。

从实验结果看,各供试品溶液在10 h内均稳定,RSD分别为2.57%、2.94%、1.17%。

取粒度均一的炙甘草约2 g、甘遂约1 g,精密称定,回流煎煮2次,每次加水50 mL,每次煎煮时间30 min,合并煎煮液,浓缩至约10 mL,待药液放冷后,加95%乙醇是药液含醇量达70%(约加95%乙醇28 mL)静置12 h,抽滤,滤液用70%乙醇定容到50 mL容量瓶中,从中取出10 mL于50 mL容量瓶中,用70%乙醇定容至刻度,即得。

城市驿站临时党支部，由驿站建设管理单位城建局党总支牵头成立，书记由单位党总支书记兼任，支委由住建局总支副书记和住建局总支专职副书记兼任，负责驿站的日常管理和运转工作。

(3)甘遂半夏汤全方供试品溶液

图书馆阅读推广平台前台设计包括用户登录、阅读积分的显示、阅读积分排行显示、积分兑换、积分获取方式、书目浏览、阅读闯关、阅读推广活动展示等。具体设计如图1所示。

取粒度均一的炙甘草约2 g、甘遂约1 g、半夏约3 g、芍药约5 g,精密称定,回流煎煮2次,每次加水50 mL,每次煎煮时间30 min,合并煎煮液,浓缩至约10 mL,待药液放冷后,加95%乙醇是药液含醇量达70%(约加95%乙醇28 mL)静置12 h,抽滤,滤液用70%乙醇定容到50 mL容量瓶中,从中取出10 mL于50 mL容量瓶中,用70%乙醇定容至刻度,即得。

2.1.4 系统适用性考察

(1)线性关系考察

回归方程y=289100x-17382,相关系数r=0.9993。

取甘草酸铵对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液,摇匀,作为储备液。分别精密吸取上述对照品母液0.2、0.4、0.8、1.0、1.2、1.6 mL分别置于6个2 mL容量瓶中,各加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液10 μL注入液相色谱仪,测定甘草酸的峰面积值。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积值为纵坐标,作图,得一直线(见图6)。

  

图6 甘草酸线性关系图Fig.6 Linear relationship diagram of glycyrrhizic acid

130 ℃烘焙不同时间对带壳和不带壳红松种籽衣中活性成分和抗氧化性产生不同影响，适度烘焙的不带壳红松种籽衣的抗氧化能力显著提升。烘焙后的红松种籽衣中成分和性质的改变使其具有更高的利用价值，是酚类和天然抗氧化剂的很好来源，相比于未烘焙种籽衣更适合作为具有抗氧化功能的食品配料。

 

表1 线性关系考察结果Table 1 Investigation results of linear relationship

  

0.2 46436.5 0.4 90755.0 0.8 210060.5 1.0 278570.0 1.2 328456.0 1.6 444754.5

结果表明甘草酸的进样量在0.2-1.6 μg范围内线性关系良好,见表1。

(2)精密度考察

取浓度为100 μg/mL的甘草酸铵溶液,按照 “2.1.1”项下色谱条件连续测定6次。实验结果见表2。

从实验结果看,6次测定值的RSD为1.39%,精密度良好。

(3)稳定性考察

在国家确定的山东省用水总量控制目标内，根据《山东省水资源综合规划》、有关水量分配方案及各市实际用水情况，分解确定全省17市2015、2020、2030年分阶段用水总量控制目标及各年度用水总量控制目标，在此基础上，各市进一步分解到所辖县 （市、区）。取水审批机关审批的取水总量，不得超过本流域或行政区域的取水许可总量控制指标，在审批的取水总量已达到取水许可总量控制指标的流域和行政区域，不得再审批新增取水。

分别取不同的供试品溶液(甘草单煎供试品溶液、甘草—甘遂对煎供试品溶液、甘遂半夏汤供试品溶液)各于0、2、4、6、8、10 h依法进样,记录峰面积值,结果见表3。

 

表2 精密度试验Table 2 Precision test

  

1225675 2 224417 3 223333 4 222869 5 231396 6 227072 225793.7 1.39

 

表3 稳定性试验结果(n=6)Table 3 Stability test results(n=6)

  

单煎 221054 220356 209291 211648 210527 209367 213707.2 2.57对煎 277495 270561 285704 275825 263198 267384 273361.2 2.94群煎 167471 163983 165359 164186 162653 159086 163789.7 1.72

(2)甘草—甘遂对煎供试品溶液

1188 Hydrogen alleviates high-level low-dose irradiation-induced injury of male reproductive system in mice

(4)重复性试验

合江金钗石斛在不同采收期时多糖和石斛碱含量的比较…………………………………………………… 颜 寿等（1）： 73

 

表4 重复性试验结果(n=6)Table 4 Repeatability test results(n=6)

  

单煎12.79 13.02 12.54 12.58 13.18 12.79 12.82 1.93对煎 14.13 14.70 14.64 15.01 14.81 15.12 14.74 2.36群煎4.886 5.134 5.035 5.214 5.128 4.98 5.063 2.35

(3)炙甘草供试品溶液

出台鼓励磷石膏综合利用产品进入市场的相关政策，例如出台利用磷石膏按照利用量进行财政补贴等相关政策；给予税收优惠，例如将磷石膏综合利用产品列入国家减免税收产品范围等；加大对磷石膏综合利用技术的扶持，以及相关项目建设的专项资金支持。

(5)加样回收率试验

根据比例称取药材,甘草以2 g计,制备水煎液,定容至10 mL。分别精密吸取0.5 mL的各药液,每种药液各6份,单煎药液各加入对照品1.3 mg,对煎药液各加入对照品1.5 mg,群煎药液各加入对照品0.5 mg,按供试品溶液的制备方法、醇沉,定容到5 mL容量瓶中,从中取出1 mL于5 mL容量瓶中,用70%乙醇定容至刻度,即得。依法测定,计算回收率,结果见表5,回收率良好。

 

表5 加样回收试验结果Table 5 Sample recovery test results

  

样品 称样量/g 含甘草酸铵量/mg对照品加入量/mg 测得量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%单药10.1 1.28 1.3 2.594 101.077单药2 0.1 1.28 1.3 2.611 102.385单药3 0.1 1.28 1.3 2.637 104.385单药4 0.1 1.28 1.3 2.623 103.308单药5 0.1 1.28 1.3 2.643 104.846单药6 0.1 1.28 1.3 2.639 104.539 103.42 1.42对药1 0.1 1.48 1.5 2.923 96.200对药2 0.1 1.48 1.5 3.001 101.400对药3 0.1 1.48 1.5 2.909 95.267对药4 0.1 1.48 1.5 2.931 96.733对药5 0.1 1.48 1.5 2.961 98.733对药6 0.1 1.48 1.5 2.915 95.667 97.65 2.40

 

续表5

  

汤药1 0.1 0.51 0.5 0.989 95.800汤药2 0.1 0.51 0.5 1.019 101.800汤药3 0.1 0.51 0.5 1.005 99.000汤药4 0.1 0.51 0.5 0.985 95.000汤药5 0.1 0.51 0.5 0.995 97.000汤药6 0.1 0.51 0.5 0.986 95.200 97.30 2.73

2.2 生甘草与炙甘草中甘草酸铵的含量变化

比较生甘草与炙甘草中甘草酸铵的变化时,色谱条件、线性关系、精密度等的实验同配伍研究结果相同。研究炮制变化只考察了稳定性与重复性,并进行了样品的含量测定。实验结果如下:

2.2.1 供试品溶液的制备

(1)炙甘草的制备[4]

综上可知，对于《金瓶梅》中的影子人物，很多学者已经有了一定认识，但还未有人进行系统的研究整理，因此，本文主要以西门府内的影子人物为研究对象，以文本细读为研究方法，结合前人的成果，探究影子关系在文本中的呈现形式。

副中心周边的农村公路，在实际生活中已经半兼顾城市道路的功能，但道路等级依然是农村公路属性. 对于这部分农村公路规划应着眼于未来，尤其应注重提升慢行交通、景观生态、公共交通以及智能交通管理在规划中的地位，同时使其满足可以铺设市政管线的要求. 首先要进行改造升级，如道路宽度不够、交通基础设施不健全等问题要全面考虑，改造同时可将重心转移到大力发展公共交通的目标上，有条件的地区可设置交通专用道，从而为公交线路更广泛的覆盖农村地区，方便农村居民的出行提供有力条件. 对于居民出行需求强烈的地区，道路设计要求机非分离.

先将炼蜜中加入适量沸水(为炼蜜的40%)稀释后,加入净甘草中拌匀闷透,置炒制容器内,用文火炒至老黄色、不黏手时取出晾干。每100 kg药材用炼蜜25 kg。共制备3批炙甘草药材。

(2)生甘草供试品溶液

取本品粉末(过三号筛)约0.1 g,精密称定,置50 mL容量瓶中,加70%乙醇40 mL超生处理30 min,放冷,用70%乙醇定容,即得。

从实验结果看,各种供试品溶液测定结果的RSD值分别为1.78%、2.17%、2.15%,重复性结果良好。

所有这一切，都可视为学术思想领域的“东学西渐”潮流在“大科学”时代自然科学领域中的表现。应当说，整体思维方式和分析思维方式是相反相成的，它们适合于科学发展的不同阶段。值得注意的是，在“东学西渐”过程中，所谓“东学”一定是在西学发展到一定阶段，并在讲求精细分析的西学基础上，才能发挥其综合辩证的作用。这类似于大数据和人工智能，它们首先必须得依靠精密的数据，而不可能完全离开精密分析直接进入综合。上述事例无一例外地证明了这个道理。

取本品粉末(过三号筛)约0.1 g,精密称定,置50 mL容量瓶中,加70%乙醇40 mL超生处理30 min,放冷,用70%乙醇定容,即得。

取同一批号的药材,分别制备单煎、对煎、群煎供试品溶液各6份,依法进样,测定峰面积值,计算甘草酸的含量,结果见表4。

2.2.2 方法学考察

(1)稳定性考察

分别取不同的供试品溶液(生甘草供试品溶液、炙甘草供试品溶液)各于0、2、4、6、8、10 h依法进样,记录峰面积值,结果见表6。

 

表6 稳定性实验结果(n=6)Table 6 Stability test results(n=six)

  

生药 189964 189750 189744 185770 187186 192155 189094.8 1.20炙药 122095 122126 123567 122789 121347 123734 122609.7 0.75

从实验结果看,5种供试品溶液在10 h内均稳定,RSD分别为1.20%、0.75%。

(2)重复性试验

适当减小除氧器的容积，有利于降低土建结构的造价。但是除氧器容积过小，除氧器自身的蓄热和储水能力不足，会影响机组的安全性。根据《大中型火力发电厂设计规范》规定，给水箱的储水量宜根据除氧器的布置位置，结合瞬态计算结果、机组控制水平和机组功能要求确定，200MW 及以上机组宜为3min～5min的锅炉最大连续蒸发量时的给水消耗量。

取同一批号的药材,分别制备生药、炙药的供试品溶液各6份,依法进样,测定峰面积值,计算甘草酸的含量,结果见表7。

 

表7 重复性实验结果(n=6)Table 7 Repeatability test results(n=6)

  

生药35.55 34.00 36.76 34.21 35.80 34.95 35.21 2.95炙药23.48 23.29 23.00 22.83 23.25 23.49 23.49 1.13

从实验结果看,各种供试品溶液测定结果的RSD值分别为2.95%、1.13%,重复性结果良好。

双主动脉弓畸形是最常见的血管环形式，主动脉弓在气管处分为左右两支主动脉弓，对食管及气管形成包绕，从而对食管及气管造成压迫，导致吞咽困难、呼吸困难等，影响胎儿的正常发育[1-2]。超声检查是进行产前排畸的重要手段，随着超声技术的发展，超声血流显像技术在胎儿双主动脉弓畸形产前诊断中具有较高的应用价值[3]。超声高清血流显像是较新型的血流显像技术[4]，为探讨其在双主动脉弓畸形中的诊断价值，本研究在成都市妇女儿童中心医院进行产前排畸检查的孕妇中应用超声高清血流显像检查，并以常规彩色多普勒血流显像检查结果为对照，分析超声高清血流量显像在胎儿双主动脉弓畸形中的诊断价值。现将研究结果报道如下。

(3)样品测定

按2.2.1项下的方法制备生甘草、及3批炙甘草的供试品溶液各两份,依法进样,测定峰面积值,分别计算含量,结果见表8,色谱图见图7～图8。

 

表8 含量测定结果Table 8 Content determination results

  

药材 甘草酸铵单铵盐含量/(mg/g) 平均含量/(mg/g)生甘草38.403 37.142 37.773炙甘草1 23.473 24.030 23.752炙甘草2 23.918 23.902 23.410炙甘草3 22.821 24.271 23.546

  

图6 生甘草色谱图Fig.6 Glycyrrhiza chromatogram

  

图7 炙甘草色谱图Fig.7 Chromatogram of licorice

3 讨 论

3.1 检测波长的选择

采用紫外-可见光检测器,参考紫外光谱图,选择250 nm为甘草酸铵的检测波长。

3.2 流动相的选择

甘草成分复杂,要是甘草酸铵充分洗脱,出峰较好,选择流动相很重要,参照药典选用乙腈-0.05%磷酸水系统为流动线,实验采用了40∶60、37∶63、36∶64、35∶65四种比例洗脱,发现在36∶64比例下峰型好,并且还缩短了出峰时间。效率好且节省溶剂。

3.3 重复性分析

本次实验得出的重复性结果较好,需要注意的地方有:药材必须规格一致,全部用剪刀处理,尤其是甘草。因为甘草纤维性强,如果采用捣碎会使大量纤维煎出影响甘草酸测定结果；煎煮必须采用回流的方法。因为采用回流的方法才能更好的控制煎煮过程,保证过程一致；火力,先武火煎至沸腾然后换成文火,建议采用电热套,不能用电炉。药材沸腾时虽然温度不变,但是火力的大小影响药材沸腾时的翻滚程度,进而影响药材的煎出；加水量,本实验研究甘草单煎、甘草—甘遂对煎、甘遂半夏汤三煎液中甘草酸含量变化,只有三汤煎煮溶剂(水)体积一致才有比较意义,所以本次实验未采取十倍水量煎煮而是统一为50 mL水煎煮；抽滤时因为转移步骤多,所以必须反复洗残杂；浓缩时采用烧杯(已标好刻度的)醇沉时不在往锥形瓶中转移。

4 结 论

(1)本次实验得出的甘草酸在甘草—甘遂对煎中含量最高,其次是甘草单煎液中,而在甘遂半夏汤中甘草酸的含量却是最低的。甘草酸具有和人体肾上腺皮质发生的激素醛固酮相似的作用,可引起 “假性醛固酮增多症”[5]。甘遂与甘草对煎时甘草酸含量最高,推测甘遂半夏汤甘草酸的含量降低是全方各药共同的作用。感叹甘遂半夏汤全方中,药物相互作用非常合理、奇妙。

(2)甘草经蜜制后,甘草酸铵的含量较生甘草含量有所下降。甘草生用则通,炙用则补。蜜炙后能增强补脾益气的作用,可能是因为在蜜炙过程中,使得甘草中有些成分变化产生的。对甘草炮制的程度不同,甘草所含甘草酸含量也不同。随着炮制时间增加,甘草酸含量减少并且在变为老黄色时趋于稳定。说明各种药物的炮制要求是有道理的。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[M].一部.北京.中国医药科技出版社,2010:80-81.

[2] 姚望禄,李成义,李硕.甘肃金塔甘草5种微量元素含量比较研究[J].中国现代中药,2009(7):18-21.

[3] 段天璇,张华,王文金,等.HPLC-MS法鉴定甘草的指纹图谱[J].中国药师,2009(4):34-39.

[4] 龚千锋.中药炮制学[M].中国中医药出版社,2007:219-220.

[5] 何吉芬.浅谈甘草及其制剂的毒副作用[J].中国中医药现代远程教育,2010,8(23):66-67.