亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR）是叶酸代谢过程中的关键酶之一，催化5,10亚甲基四氢叶酸生成5-甲基四氢叶酸，而5-甲基四氢叶酸通过给同型半胱氨酸（Hcy）提供甲基，使Hcy转化成甲硫氨酸[1]。

近年来，研究发现血液中Hcy浓度升高会增加心脑血管疾病、新生儿的出生缺陷、女性不孕、癌症等众多疾病的患病风险[2]。血清Hcy水平主要受到环境因素和遗传因素两方面的影响，环境因素主要包括叶酸、维生素B6、维生素B12和维生素B2的摄入量等；遗传因素主要包括编码同性半胱氨酸代谢相关的酶基因的多态性，如MTHFR基因的多态性[3]。随着分子生物学的发展，越来越多的多态性位点被发现，其中MTHFR C677T位点是目前研究较多、意义较明确的多态性位点之一。研究发现，携带MTHFR 677TT位点的人群，体内MTHFR活性约为677CC型人群的30%，667CT基因型人群体内酶活性约为677CC人群的65%[4,5]，故677TT基因型及677CT基因型会增加血清Hcy的浓度，在个体叶酸摄入不足时，这种效应更甚。

目前关于MTHFR C677T基因多态性分布的研究较多，但大都是针对孕期女性，关于男性及中老年人数据报道较少，本研究选取年龄在20岁-68岁的男性、女性各255例，进行多态性分析，以供临床参考。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2017年5月-2018年3月送至青岛解码医学检验有限公司进行MTHFR基因检测的来自青岛地区健康人群的口腔粘膜样本共510例，年龄20岁-68岁，平均年龄（41.4±9.3）岁。其中男性和女性各255例，男性年龄20岁-68岁，平均年龄（41.9±8.7）岁；女性年龄在21岁-66岁，平均年龄（40.9±10.3）岁。

1.2 方法 510例样本均采用口腔拭子基因组DNA提取试剂盒提取样本DNA，Taqman探针进行荧光定量PCR检测MTHFR基因C677T位点多态性，相关仪器和试剂均购自美国Applied Biosystems公司。每个体系总体积为30 μL，包含Master mix 15 μL，引物、探针mix 5 μL，去离子水5 μL，模板5 μL，设置阴阳性对照。95oC预变性10 min，95oC变性10 s，60oC退火、延伸及检测荧光1 min，扩增40个循环。反应结束后在ABI7500仪器上读取样品孔中终点荧光，利用软件确定各样本的基因分型结果。

2.2 青岛地区人群MTHFR基因C677T位点多态性分布 青岛地区人群中MTHFR基因C677T位点多态性分布见表1，510例样本中，CC基因型占比为20.59%（105/510），CT基因型占比为45.69%（233/510），TT基因型占比为33.73%（172/510）。男性人群中CC基因型占比为20%（51/255），CT基因型占比为45.10%（115/255），TT基因型占比为34.90%（89/255）。女性人群中CC基因型占比为21.18%（54/255），CT基因型占比为46.27%（118/255），TT基因型占比为32.55%（83/255）。男性和女性基因分型情况及等位基因频率无显著差异。

1.3 统计分析 研究对象进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验后，采用SPSS 20.0软件对所有数据进行统计分析。计数资料采用率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

本研究对青岛地区510名年龄在20岁-68岁的健康人群进行了MTHFR基因分型统计，发现男性和女性中MTHFR C677T位点基因频率统计学接近，没有统计学差异。这与Yang等[6]对天津地区男性和女性MTHFR C677T基因分型无显著差异的结果一致。本研究中，MTHFR基因C677T位点T基因频率为56.57%，这与李秀娟等[7]对青岛地区孕期女性的研究结果57.15%基本一致，但略低于朱兆霞等[8]对山东省诸城孕龄女性T等位基因频率62.74%的数据，说明青岛市人群MTHFR C677T基因分布具有区域特异性。

2012年车田里渡口引进了第一艘标准化非机动渡船—全州车田里渡船（图号GSS4019），该渡船长7.55米、宽2.4米、干舷0.35米，由于该渡船长宽比小，船型丰满，又未配备桨和安置桨的位置，再加上渡口水流湍急，不适合用木浆人力摆渡，所以该渡船在车田里渡口水域不适航，到达后并未真正投入渡运作业。

3 讨论

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析 MTHFR基因C677T位点多态性符合Hardy-Weinberg遗传平衡，χ2=2.527，P＞0.05。

我说：“再过几年，我就长大了，我不知道我长大了干什么。宁国江山被胡人占了一半，我不知道什么时候才能把胡人赶走。”

3)粉煤灰活性CaO化学滴定试验方法。活性CaO的含量是半干法脱硫剂最重要的活性指标。活性CaO含量的测定采用蔗糖溶液络合滴定法[14]。

近年来，随着分子生物学的迅猛发展，精准医疗越来越受到关注。我国MTHFR 677TT基因型占比约为25%，高于其他种族10%-12%的数据[9]。不仅如此，我国MTHFR 677TT基因型分布还存在南北分布不均、从南方到北方呈升高趋势的情况。因此，了解各地区基因多态性分布，有利于国家和地方政府因地制宜地制定公共卫生政策，为提升人口健康水平、降低出生缺陷等提供有力依据。

 

表1 不同性别人群中MTHFR C677T基因分型频数及基因频率

  

性别 例数 MTHFR C677T基因分型 χ2 P基因频率 χ2 PCC CT TT C T男 255 51（20.00%） 115（45.10%） 89（34.90%） 0.334 0.846 42.55% 57.45% 0.323 0.57女 255 54（21.18%） 118（46.27%） 83（32.55%） 44.31% 55.69%合计 510 105（20.59%） 233（45.69%） 172（33.73%） 43.43% 56.57%

参考文献

[1]Bailey LB, Gregory JF. Folate Metabolism and Requirements [J]. J Nutrition, 1999, 129(4): 779.

[2]Brustolin S, Giugliani R, Félix TM. Genetics of homocysteine metabolism and associated disorders [J].Braz J Med Biol Res, 2010, 43(1): 1-7.

[3]Lajin B, Alhaj SA, Michati R,et al. Association between MTHFR C677T and A1298C, and MTRR A66G polymorphisms and susceptibility to schizophrenia in a Syrian study cohort [J]. Asian J Psychiatr, 2012, 5(2):144-149.

[4]樊东升. 同型半胱氨酸与脑血管疾病[J]. 中华神经科杂志,1999, 32(4): 247-248.

[5]Frosst P, Blom H J, Milos R,et al. A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase [J]. Nat Genetics,1995, 10(1): 111-113.

[6]Yang B, Liu Y, Li Y,et al. Geographical distribution of MTHFR C677T, A1298C and MTRR A66G gene polymorphisms in China: findings from 15357 adults of Han nationality [J]. PLoS One, 2013, 8(3): e57917.

[7]李秀娟, 徐敏, 徐梅, 等. 叶酸利用能力分子医学检测在母胎医学领域的应用[J]. 中国妇幼健康研究, 2014(5): 234.

[8]朱兆霞, 鲁衍强, 薛琰, 等. 山东省诸城市汉族女性MTHFR、MTRR基因多态性研究[J]. 公共卫生与预防医学, 2016,27(2): 12-16.

[9]Botto LD, Yang Q. 5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review [J]. Am J Epidemiol, 2000, 151(9): 862-877.