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毛细管电泳技术在多发性骨髓瘤免疫分型的研究与应用

更新时间:2009-03-28

多发性骨髓瘤(MM)为恶性肿瘤,是由于骨髓浆细胞异常增生所致,患者临床会出现感染、骨折、肾损伤、出血、高钙血症、免疫球蛋白异常等,由于这一疾病在临床有非常复杂的表现,所以出现漏诊、误诊的可能性很大,接受化疗无法获得较高的完全缓解率,预后较差[1,2]。因为MM会分泌不同数量、不同种类的异常免疫球蛋白,所以临床会选择血清蛋白电泳、免疫固定电泳技术(IFE)对其血清M蛋白进行测定、诊断以及分型[3]。本研究具体分析毛细管电泳技术在2016年1月-2017年1月我院50例多发性骨髓瘤患者免疫分型中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料 选择2016年1月-2017年1月本院多发性骨髓瘤患者50例,患者中有男32例、女18例,平均年龄(49.28±11.36)岁,年龄35岁-78岁。每例患者经静脉留取一份全血,进行血清分离后将血清标本放在-20oC的冰箱中待测。

1.2 方法 毛细管区带电泳-免疫消减法(IS-CZE)电泳利用法国Sebia Capillarys-2全自动电泳分析系统及原装配套试剂盒进行测定;总免疫球蛋白含量测定:采用Siemens司生产的BN2型特种蛋白分析仪及原装配套试剂盒,利用免疫散射比浊法进行测定;免疫固定电泳分析选择美国Helena公司Spiefcombo型半自动电泳分析仪操作及原装配套试剂进行。IS-CZE:通过全自动电泳仪实施分析,在样本架上放好需要检测的抗体小杯以及血清,选择免疫分型这一程序实施全自动进样以及分析,每个样本会有6个图像生成,相应的为添加了抗k、ELP、抗IgG、抗IgA、抗IgM血清、抗λ血清的结果。通过比较即可判定单克隆免疫球蛋白的类型,全过程约20 min。IFE对M蛋白的免疫分型按美国Helena公司Spiefcombo型半自动电泳分析仪操作程序进行操作。(1)点样:按要求放置好电泳胶片,用滤纸吸干多余水分,按适当比例稀释样品,加入加样梳的6个孔内,用加样器将样品加到电泳胶片上。(2)电泳:21oC,300 V,电泳6.5 min。(3)加抗血清:于专用抗血清板孔内分别加入40 μL蛋白固定剂和抗IgG、抗IgA、抗IgM重链抗体及抗k、抗λ轻链抗体6种试剂(当结果仅出现游离轻链时,用抗IgD重链抗体及抗λ轻链、抗k轻链抗体3种试剂复查)。21oC孵育10 min,用滤纸梳及厚滤纸吸去多余抗体。(4)干燥:50oC、8 min。(5)冲洗、染色、脱色及干燥:仪器自动完成,全过程约2 h。免疫球蛋白定量:Siemens司生产的BN2型特种蛋白分析仪及原装配套试剂盒进行免疫球蛋白定量检测。

 

表1 毛细管血清蛋白电泳结果分析

  

免疫分型 例数 M带出现区域 M蛋白峰阳性α1+α2 β1+β2 γ IgA 10 - 4 6 10 IgG 30 1 11 18 30 IgM 2 - 1 1 2双克隆 1 - 1 - 1轻链型 7 - 2 4 6总和 50 1 19 29 49

2 结果

2.1 毛细管血清蛋白电泳结果 本组49例患者通过血清蛋白电泳检出底部狭窄的区域有α区、β区,或者γ区,或者β区和γ之间,高尖的M蛋白峰,其峰高是缝宽的2倍或以上。具体见表1。

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2.2 IS-CZE结果 分别将样本和抗体小杯中的6种血清混合,生成抗体抗原反应,通过抗原抗体复合物的样品继续进入相应不同的毛细管实施电泳,获取图谱共6个,电泳图谱中会将有复合物形成的蛋白消除。因此假设在加入了某一种抗体的图谱中未见M蛋白峰,证实是这一种类型的M蛋白峰,判定是这一类型的MM,获取对应的免疫分型。见表2。

 

表2 本组50例患者IS-CZE结果分析

  

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2.3 免疫球蛋白定量、免疫固定电泳结果 本组50例患者中IgA k型、IgM k型各1例,患者出现IgG水平上升,其余与毛细管区带电泳-免疫消减法结果一致;免疫固定电泳结果与毛细管区带电泳-免疫消减法结果一致。

2.4 入院初次诊断结果 本组50例患者临床出现感染、肾脏损害、骨折、心血管疾病、贫血多样化的症状表现,其中有15例患者是由于肾功能不全、肾病综合征入院,13例患者是由于出血、贫血入院,10例患者是由于肝病入院,4例是由于肺炎入院,4例是由于心肌梗死、冠心病入院,2例是由于骨折、骨痛入院,2例是由于其他原因入院。

盖层为下寒武系渔户村组(∈1y)泥质白云岩、磷块岩、含磷硅质岩、硅质岩及粉砂岩,底部时有页岩地层,裂隙不发育,属于相对隔水隔热盖层;寒武系筇竹寺组(∈1q)泥质页岩夹粉砂岩,上部夹薄层砂岩,底部为粉砂岩或页岩以及寒武系沧浪铺组(∈1c)白云母粉砂质页岩、粉砂岩、夹薄层砂岩,砾石英砂岩,裂隙不发育,属于较好的隔水隔热盖层;第四系松散层导热性差,属相对保温盖层。因此,深部散发的热流,传送到灯影组(Zz2dn)地层里蕴藏起来,形成一个较好的地下热库。

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3 讨论

MM属于浆细胞恶性增生导致的一类恶性肿瘤,中老年是主要发病人群。因为患者临床缺乏典型表现,加上症状具有多样化特点,同时实施骨髓穿刺时的穿刺次数、穿刺部位都会对瘤细胞形态学检查结果产生影响,使得MM的早期诊断存在一定的误诊或者漏诊[4]。在MM的临床诊断中,血清中出现M蛋白被视作一项重要依据,M蛋白具体包括IgM、IgA、IgD、IgG、k、λ、游离轻链共7种类型,这些类型的检出对于临床MM的病情严重程度判断、疾病分型、预后判断均有重要意义。以往临床利用免疫球蛋白定量检测、琼脂糖凝胶电泳法、免疫固定电泳各类方法进行检测,但实践显示均存在一定不足[5]。本研究通过毛细管电泳技术对MM患者实施血清蛋白电泳、IS-CZE电泳后发现,IS-CZE电泳能够显示出所有血清中的M蛋白峰,同时符合IFE结果,血清蛋白电泳仅出现1例漏检情况。

血清蛋白电泳相较而言具有不足,其无法将M蛋白峰、其他蛋白峰正确鉴别,同时无法对M蛋白峰的类型进行确定。所以通过结合IS-CZE电泳实施免疫分型能够对M蛋白免疫类型进行准确鉴别[6]。从本研究结果可以得知,IgG型所占比重最高,IgA、轻链型居后,IgM、双克隆型较少。由于MM的临床治疗和免疫分型存在紧密联系,所以依照免疫球蛋白完成MM的分型对于指导临床治疗方案的确定意义明显。因此借助毛细管电泳技术能够筛查血清中是否存在M蛋白,同时能够对存在的M蛋白的免疫类型进行鉴别,有助于指导临床的诊断及治疗,价值突出。

参考文献

[1]曹方方, 袁媛, 王中军, 等. 毛细管电泳技术在多发性骨髓瘤诊断及MRD监测中的价值[J]. 现代肿瘤医学, 2017, 25(8): 1300-1302.

[2]艾晓非, 王晓静, 王波, 等. BIOMED-2标准化Ig基因重排在多发性骨髓瘤中的应用研究[J]. 中华血液学杂志, 2015,36(11): 918-921.

[3]林卫, 黄晓华, 卢新兆, 等. 多发性骨髓瘤患者实验室指标分析及在临床诊断中的意义[J]. 蛇志, 2016, 28(1): 36-37.

[4]陈浩宇, 叶润清, 吴晓蔓, 等. 免疫固定电泳和免疫球蛋白含量在多发性骨髓瘤诊断中价值[J]. 中华实用诊断与治疗杂志, 2016, 30(8): 795-797.

[5]严志民. 免疫固定电泳技术诊断及分型多发性骨髓瘤的临床研究[J]. 中国现代医生, 2016, 54(24): 25-27.

[6]陈云峰, 葛亮, 沈建江, 等. 免疫固定电泳及免疫球蛋白定量在多发性骨髓瘤诊断和分型中的应用[J]. 中国实验诊断学,2016, 20(11): 1881-1883.

 
冯振华,杨婷婷,戴伟良
《临床检验杂志(电子版)》2018年第03期文献

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