1 对象与方法

1.1 研究对象及分组 回顾性分析2015年9月1日—2017年6月1日在广东省韶关市妇幼保健计划生育服务中心生殖医学中心（我中心）接受IVF-ET的高龄不孕患者，共283个周期。纳入标准：①年龄≥38岁；②基础窦卵泡计数（AFC）≥3个；③采用长效长方案或拮抗剂方案；④D3行新鲜胚胎移植。排除标准：①内膜厚度＜7 mm；②输卵管积水或子宫内膜息肉未处理；③宫腔分离。按取卵当天所处培养环境不同分为2组：低氧组，共120个周期，均采用三气培养箱（COOK，K-MINC1000，澳大利亚），普莱克斯混合气体，浓度为5%O2、6%CO2和89%N2培养；常氧组，共163个周期，均采用单气培养箱（Thermo3111，美国），普莱克斯单气，浓度为6%CO2、20%O2培养。本研究经韶关市妇幼保健计划生育服务中心伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

邹庆鹏在致辞中介绍，河南作为中国农业大省，亦是全国农药生产、经营、使用大省。当前，河南省共有165家农药生产企业，年产农药约为2.6万吨，农药经营单位3.5万多家，年农药使用近1.7万吨。自新的《农药管理条例》实施以来，河南将贯彻落实新条例作为本省农业发展的一项重要任务，加大相关规章制度宣传工作，加强农药监管巡查工作，助力农药产业转型升级，力促农药企业做大做强，切实发挥保障国家粮食安全压舱石的作用。

1.2 研究方法

1.2.1 超排卵方案 长效长方案：从黄体中期开始给予促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）降调节，达降调标准后开始给予促性腺激素（Gn，丽申宝，丽珠集团丽珠制药厂，珠海）或果纳芬（默克-雪兰诺公司，瑞士）促排卵，超声观察结合血清激素水平监测卵泡发育情况并调整Gn用量。当至少有1个卵泡平均径线达到18 mm或至少2个卵泡径线达到17 mm时，给予人绒毛膜促性腺激素（hCG，丽珠集团丽珠制药厂，珠海）5 000～10 000 IU诱发卵子成熟，hCG注射后36～38 h行超声引导下经阴道穿刺取卵术。拮抗剂方案：于月经周期第2～5天给予果纳芬（默克-雪兰诺公司，瑞士）75～300 IU/d；当主导卵泡直径达12～14 mm或注射Gn第5～6天根据血黄体生成激素（LH）水平，给予思则凯（默克-雪兰诺公司，瑞士）0.25 mg至hCG注射日，根据卵泡生长情况调整Gn剂量。当至少2个卵泡直径达到18 mm时，注射hCG（丽珠集团丽珠制药厂，珠海）5 000～10 000 IU，36～38 h行超声引导下经阴道穿刺取卵术。

1.2.2 IVF及胚胎培养 卵子和胚胎均采用瑞士Vitrolife公司的G系列序贯培养液。取卵4～6 h后行常规IVF，18～20 h观察受精情况，D3参照Peter卵裂期评分标准[4]并结合我中心的工作实践对胚胎进行形态学评分。胚胎发育速度正常（D2 2～4细胞，D3 4细胞以上且在过去24 h内分裂过），卵裂球大小均匀，碎片不超过5%为1级胚胎；胚胎发育速度正常，卵裂球大小均匀或大致均匀，碎片不超过20%为2级胚胎；卵裂球大小不均匀，碎片不超过50%为3级胚胎；卵裂球大小不均匀，碎片超过50%为4级胚胎。其中7～9细胞1、2级胚胎为优质胚胎，4细胞1、2级或5细胞以上1、2、3级胚胎为可利用胚胎。

1.2.3 胚胎移植及妊娠结局判断 D3选择不超过3枚评分最高的胚胎进行移植。移植后14 d查血hCG确定生化妊娠，28 d行超声检查，见孕囊及心管搏动确定临床妊娠；孕12周内发生自然流产定义为早期流产。

2.2 2组实验室指标及妊娠结局比较 2组间正常受精率、卵裂率、可用胚胎率、着床率、生化妊娠率、临床妊娠率、早期流产率及活产率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；低氧组患者优质胚胎率显著高于常氧组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2）中华人民共和国主席令第31号《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》（2005-04-01施行）。

2.1 2组一般情况比较 2组用药方案、平均年龄、BMI、Gn用量、基础卵泡刺激素（bFSH）、LH、E2、AFC、hCG日E2水平、hCG日子宫内膜厚度和获卵数比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。见表1。

在体内胚胎早期周围环境的氧浓度为2%～8%，一直暴露于低氧环境中[5-6]。小鼠、羊和牛等动物研究也证实，氧气浓度为5%～7%的培养环境更有利于胚胎发育[6]。由于三气培养箱及所需的高纯混合气（5%O2、6%CO2和89%N2） 价格昂贵，目前大多数IVF实验室使用的是氧浓度为20%的普通培养箱，在这一高氧环境下，胚胎培养过程产生过多的活性氧簇（ROS），而高浓度的ROS可导致DNA及线粒体损伤、脂质及蛋白质过氧化等改变，降低胚胎质量及发育潜能[3，7-8]。有研究证实，体外的低氧环境下更有利于人类胚胎的生长发育，移植低氧环境下培养的胚胎可获得更好的临床结局[9-11]。但也有学者认为移植低氧环境下培养的胚胎并不能改善IVF的临床结局[12-16]。

2 结果

1.2.4 观察指标 记录患者一般情况 [年龄、体质量指数（BMI）、Gn用量、hCG日雌二醇（E2）水平、子宫内膜厚度和获卵数]，实验室指标（正常受精率、卵裂率、可用胚胎率、优质胚胎率和着床率）及妊娠结局（生化妊娠率、临床妊娠率、早期流产率及活产率）。计算公式为：正常受精率=D1出现2原核（2PN）卵子数/IVF加精卵子总数×100%，卵裂率=卵裂胚胎数/受精卵子数×100%，可用胚胎率=（移植胚胎数+冷冻胚胎数）/（2PN卵裂数+1PN卵裂数+0PN卵裂数）×100%，优质胚胎率=7～9细胞1、2级胚胎数/2PN卵裂数×100%，着床率=着床胚胎数/移植胚胎数×100%，生化妊娠率=生化妊娠周期数/移植周期数×100%，临床妊娠率=临床妊娠周期数/移植周期数×100%，早期流产率=早期流产周期数/移植周期数×100%，活产率=活产周期数/移植周期数×100%。

粒径级配分析表明，石英砂岩全风化土与片麻岩全风化土都含砾、砂、粉砂与粘粒全部粒组，粒径级配均匀，为含粗粒粘土。虽然全风化土层工程分类基本属于粉土质砂，由于富含细粒组颗粒，石英砂岩全风化土与片麻岩全风化土具有低渗透特性，构成第四系底部卵砾层下部隔水层。在露天边坡可见含水层中地下水沿全风化土层的顶部排泄向矿坑，风化层为含水层隔水底板；在地下开采矿区风化层的发育程度影响了充水条件，风化层发育好则充水条件差，受水害威胁小。

3 讨论

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计学处理。定量资料采用均数±标准差（s）表示，组间比较采用两独立样本均数的t检验；定性资料采用例数（百分比）表示，组间比较采用卡方检验。所有检验均以P＜0.05为差异有统计学意义。

综上，《巴黎公约》所确立的反不正当竞争法基本规则与欧盟及TPP框架内反不正当竞争法在消费者利益保护维度上的发展，对于各国完善反不正当竞争法制以更好地规制新型竞争行为具有重要的参考意义，也必然会在更广泛的层面影响到该领域的国际协调。

 

表1 2组一般情况比较

  

注：用药方案用长方案/拮抗剂方案例数表示。

 

组别n年龄（岁）BMI（kg/m2）hCG日E2（pg/mL）hCG日子宫内膜厚度（mm）获卵数（个）移植胚胎数（个）低氧组 120 41.34±2.54 23.00±2.45 1 120.00±794.79 10.60±2.68 6.10±3.79 1.94±0.49常氧组 163 40.93±3.54 22.86±2.96 1 312.84±951.50 10.25±2.27 6.57±4.26 2.04±0.62 t或χ2 1.13 0.43 1.85 1.16 0.98 1.51 P 0.16 0.68 0.20 0.24 0.34 0.14组别n用药方案（例）Gn用量（IU）bFSH（IU/L）LH（IU/L）E2（pg/mL）AFC（个）低氧组 120 99/21 2 824.94±777.08 10.34±4.04 3.93±4.10 51.59±33.82 6.81±3.73常氧组 163 137/26 2 819.86±777.10 10.60±4.53 3.93±2.17 51.54±43.53 7.65±4.35 t或 χ2 0.12 -0.054 0.50 -0.019 -0.011 1.71 P 0.73 0.96 0.62 0.99 0.99 0.09

 

表2 2组实验室指标及妊娠结局比较 [%（n/n）]

  

注：活产率因部分未出生，只能随访到2017年5月份数据。

 

组别 n 正常受精率 卵裂率 优质胚胎率 可用胚胎率低氧组 120 71.0（520/732） 98.4（617/627） 55.6（287/516） 67.5（380/563）常氧组 163 73.1（783/1 071） 97.9（907/926） 48.3（378/778） 63.0（534/847）χ2 0.95 0.43 6.63 2.87 P 0.33 0.51 0.01 0.09生化妊娠率 临床妊娠率 早期流产率 活产率35.8（43/120） 35.0（42/120） 16.7（7/42） 24.1（26/108）34.4（56/163） 32.5（53/163） 24.5（13/53） 22.0（33/150）0.06 0.19 0.87 0.15 0.80 0.66 0.35 0.70着床率22.7（53/233）18.6（62/333）1.44 0.23

我国二孩政策全面放开后，高龄助孕患者（≥38岁）骤增，而年龄是影响卵子和胚胎质量及妊娠结局的独立因素。由于高龄女性卵巢储备功能下降，基础窦卵泡减少、卵子和胚胎质量下降，导致妊娠率和活产率明显降低[1-3]。有学者发现，IVF过程中低氧环境下的受精率、卵裂率、优质胚胎率和囊胚形成率中一个或多个指标显著高于常氧环境，但并不能改善临床妊娠率及种植率[10，12-15，17-18]。

本研究回顾性分析2015年9月1日—2017年6月1日在我中心行常规IVF-ET且年龄≥38岁患者的资料，按取卵后培养环境不同分为低氧组和常氧组，结果显示2组的正常受精率、卵裂率、临床妊娠率、早期流产率及活产率差异无统计学意义（P＞0.05），这可能与高龄尤其38岁以上女性染色体异常率明显增加有关[18]，而低氧培养环境并不能改变染色体异常卵母细胞及胚胎的临床结局。但本研究中低氧组的优质胚胎率显著高于常氧组（P＜0.05），对提高其累积妊娠率和活产率意义重大。下一步研究需扩大样本量并分析其累积妊娠率，进一步验证低氧条件下胚胎培养在高龄不孕女性中的应用价值。

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