乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升[1]，严重威胁着女性的身心健康。目前已发现与乳腺癌发生发展有关的基因达40多个[2]，如HER2、BRCA1、BRCA2、TP53、c-myc等，并研究和开发了各种靶向这些基因的治疗方法。HER2基因是第一个靶向乳腺癌治疗的基因，美国食品与药品监督管理局(FDA)在2002年批准了靶向HER2受体的单克隆抗体Herceptin(赫赛汀)即曲妥珠单抗应用于治疗乳腺癌[3]。临床疗效显示，该药在晚期乳腺癌、术前和术后辅助治疗中均能提高患者的治疗效率，延长其生存期[4]。

（4）情志养生法：护理人员可根据产妇的性格特征、兴趣爱好为其提供相应的娱乐活动，如播放新闻、讲幽默、有趣的故事等，以缓解产妇产后抑郁情绪。

有效检测出HER2表达有助于判断乳腺癌患者的预后，较好地评估患者能否应用曲妥珠单抗治疗。FDA推荐荧光原位杂交(FISH)和免疫组织化学(IHC)两种方法来检测HER2的基因和蛋白表达。有研究[5]报道，HER2蛋白过表达是基因扩增的结果，但另有研究[6]认为乳腺癌组织中HER2蛋白过表达时其基因并未扩增。为明确乳腺癌组织中HER2基因的表达情况，本研究应用FISH和IHC两种方法分别检测HER2基因及蛋白表达，分析两者间的一致性及相关性，并探讨HER2表达与患者临床病理特征之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料来源

收集2010年1月至2015年12月深圳市第二人民医院乳腺外科手术切除的乳腺癌组织标本463例，患者平均年龄54岁(28～80岁)，所有病例均为初发，术前均未接受过任何治疗。经病理确诊浸润性导管癌425例(91.79%)，浸润性小叶癌20例(4.32%)，浸润性筛状癌3例(0.65%)，浸润性微乳头状癌8例(1.73%)，粘液癌4例(0.86%)，髓样癌3例(0.65%)，其中浸润性导管癌参照Elston&Ellis法分为I级(50例)、II级(214例)、Ⅲ级(161例)。

输水渠道内坡普遍采用混凝土板衬砌结构，输水运行期的水位变化和汛期地下水水位的变化对衬砌结构的影响是比较大的。在渠道管理运行过程中，应密切关注渠内外水位的变化，采取措施，控制渠内外水位差，减小渠道内外地下水压力对衬砌混凝土板的破坏作用，防止衬砌结构破坏，保障工程良好运行。

1.2 主要试剂

组织标本经10%中性福尔马林液固定6～12 h，脱水、透明、石蜡包埋后连续切片(厚度4 μm)7张，1张用于HE染色，5张用于IHC，1张用于FISH分析。1)IHC：采用MaxVision法进行染色，操作步骤按说明书进行。其中Ki-67以阑尾组织为对照，选取已确诊的p53、ER、PR、HER2阳性和阴性乳腺癌组织形成多组织蜡块为p53、ER、PR、HER2对照。2)FISH：所有标本均经HER2双探针FISH检测，按照HER2基因扩增检测试剂盒操作说明书进行，荧光显微镜下观察信号，计数并分析，-20 ℃避光保存样本。

1.3 方法

鼠抗人ER、PR、p53、Ki-67、HER2多克隆抗体，快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物均购于福州迈新生物技术开发有限公司。HER2基因扩增检测试剂盒购于北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司。

1.4 结果与判读

所有切片仅评定浸润性癌，原位癌不作为评定对象。

1)IHC：免疫组织化学结果进行双盲法评估，Ki-67、p53、ER、PR阳性结果为胞核有棕黄色或棕褐色颗粒附着，HER2阳性结果为胞膜有棕黄色或棕褐色颗粒附着。计数细胞膜和(或)细胞核阳性染色细胞数，对各指标蛋白表达进行分析，染色强度根据阳性细胞百分比进行半定量分级：ER、PR阳性细胞率0%～5%为阴性(-)，5%～25%为弱阳性(+)，25%～50%为阳性()，≥50%为强阳性()；HER2细胞膜均无染色或≤10%肿瘤细胞呈现不完整、微弱的细胞膜染色者为0，>10%肿瘤细胞呈现不完整、微弱的细胞膜染色者为+，>10%肿瘤细胞呈现不完整的和/或弱至中度强度的细胞膜染色或≤10%肿瘤细胞呈现强而完整的细胞膜染色者为，>10%肿瘤细胞呈现强、完整、均匀的细胞膜染色者为。

ER、PR与HER2蛋白表达呈负相关(均P<0.01)，Ki67蛋白表达、浸润性导管癌分级、肿块大小、淋巴结转移与HER2蛋白表达呈正相关(均P<0.01)，见表2。

FISH结果显示：HER2阳性表现为橘红色的荧光信号成簇出现；阴性表现为橘红色与绿色信号比值<2，且橘红色信号平均拷贝数<4(图1)。HER2基因扩增阳性率为35.64%(165/463)。IHC结果显示：HER2蛋白在乳腺癌组织中主要表达于细胞膜，呈棕黄色(图2)；IHC评分为-、+、、的百分率分别为29.16%(135/463)、20.73%(96/463)、23.76%(110/463)和26.35%(122/463)。IHC检测HER2蛋白表达评分为-、+和的标本与FISH检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.502，P<0.01)和相关性(r=0.725，P<0.01)，见表1。

1.5 统计学方法

HER2基因定位于染色体17q12—21.32，为表皮生长因子受体家族成员。该受体蛋白通过同源或异源二聚体方式发生藕联，激活下游酪氨酸激酶并使之磷酸化，进而调节肿瘤细胞的增殖。在乳腺癌组织中过表达提示易复发和转移，预后差、生存率低。

2 结果

2.1 乳腺癌组织中HER2基因和蛋白表达水平比较

2)FISH：计数30个细胞，计算核内橘红色的HER2基因荧光信号与绿色的CEP17(17号染色体着丝粒)荧光信号的数目及细胞数目的比值，按2013版美国临床肿瘤学会/美国病理医师学院(ASCO/CAP)指南标准进行判读。

  

A：乳腺癌组织基因扩增阳性；B：乳腺癌组织中HER2基因扩增阴性。图1 FISH检测乳腺癌组织中HER2基因的扩增

  

A：乳腺癌组织中HER2表达+；B：乳腺癌组织中HER2表达；C：乳腺癌组织中HER2表达。图2 IHC检测HER2蛋白在乳腺癌组织中的表达(MaxVision×100)

 

表1 FISH与IHC检测HER2的表达结果 例

  

IHCFISH不扩增不确定扩增合计-13302135+80016967333411072113122合计2935165463

2.2 乳腺癌组织中HER2基因扩增与临床病理特征的关系

年龄、P53蛋白表达与HER2基因扩增无关(均P>0.05)，见表2。

ER、PR蛋白表达与HER2基因扩增之间呈负相关(均P<0.01)，Ki67蛋白表达、浸润性导管癌分级、肿块大小、淋巴结转移与HER2基因扩增之间呈正相关(均P<0.05)，见表2。

2.3 乳腺癌组织中HER2蛋白表达与临床病理特征的关系

根据任务内容和要求的不同，学生采用的展示方式也不断变化。有的学生自己制作PPT进行词汇、课文重点难点或课后练习的展示；有的学生会提前录制好视频进行才艺展示；还有的学生在角色扮演时为做到逼真，会从服装到道具都进行精心的准备。

江小白一经面世，便打破传统白酒“厚重”的形象，提出“小聚、小饮、小时刻和小心情”，重新定义了消费场景。白酒不再只与圆桌文化、阶层文化相勾连，也可以是简单纯粹三五好友小聚小饮的小时刻，只为讨好自己的小心情。

年龄、P53蛋白表达与HER2蛋白表达无关(均P>0.05)，见表2。

 

表2 HER2基因扩增、蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系

  

临床病理特征nFISHHer-2IHCHer-2不扩增不确定扩增Pr-+Pr年龄/岁 ≤3555390160.2330.056161316100.4520.035 >3540825451491198394112组织病理学 浸润性导管癌I级5037013<0.010.1403415101<0.010.310 浸润性导管癌II级21415016363504942 浸润性导管癌III级1617748028224170 浸润性小叶癌2017038651 浸润性筛状癌32010021 浸润性微乳头状癌86021124 黏液癌42021201 髓样癌32010012肿块大小l/cm <211188023<0.050.1037023117<0.010.499 ≥2～<522412359652547642 ≥51288204613192373淋巴结转移 无207150354<0.010.17574515131<0.010.220 有256143211161455991ER表达 -11540372<0.01-0.4065123860<0.01-0.382 +96550412874120 1248513828411342 1281131147436180PR表达 -9513478<0.01-0.610452759<0.01-0.635 +88391488232829 15211903336335132 12812206873542P53表达 -1871270600.1170.073821725630.1120.074 +276166510553798559Ki67状态 ≤14%145115030<0.010.2206240385<0.010.331 >14%3181785135735672117

3 讨论

采用SPSS19.0软件进行统计学分析，采用Kappa值分析IHC和FISH两种检测方法的一致性，计数资料以率(%)表示，组间率比较采用卡方检验，相关性分析采用spearman秩相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

说了这么多关于脚的闲话，咱也该下楼，活动活动筋骨，伸伸脚了，关键时候，说不定和芸芸众生中的某一位，来个“脚”斗呢！

根据美国临床肿瘤学会/美国病理医师学院(ASCO/CAP)指南并结合我国HER2检测开展情况，我国的HER2检测指南已有2006版、2009版及2014版3个版本。2014版指南[7]与2009版指南[8]相比，在FISH判读标准上除将HER2/CEPl7比值变成2.0外，更重要的是增加了HER2拷贝数的计算。有研究显示采用2014版指南判读标准使乳腺癌HER2检测阳性率及不确定率均有所提高，阴性率下降[9-10]。但在单探针及双探针原位杂交的结果差异、HER2/CEP17比值>2.0且HER2拷贝数<4.0定义为基因扩增等问题上有病理学者认为需要谨慎[11]。2014版指南中，IHC标准中最主要的改变是的标准由30%回归到了10%，但杨文涛等[11]认为将>10%不完整的弱至中等强度的细胞膜染色纳入似乎还缺乏足够的依据。

对于淋巴结阳性的乳腺癌患者，HER2蛋白表达阳性率为22%～30%，淋巴结阴性患者，HER2蛋白表达阳性率为11%～44%。本研究浸润性导管癌组织中，淋巴结阳性者256例，HER2蛋白阳性率为35.55%，HER2基因扩增率为43.36%；淋巴结阴性者207例，HER2蛋白阳性率为14.98%，HER2基因扩增率为26.09%，提示淋巴结转移与HER2表达呈正相关(P<0.01)。有研究表明HER2过度表达在淋巴结转移阴性和阳性的患者中均提示无复发生存率和总体生存率的下降，是一个独立的预后指标[12]。刘媛媛等[13]对150例有淋巴结转移的乳腺癌原发灶与淋巴结转移灶之间的HER2基因状态进行研究，发现两者存在一定的差异，提出对于淋巴结阳性的乳腺癌，必要时可再次检测同侧腋窝淋巴结，或原发灶与转移灶同时检测，建议对于原发灶HER2基因状态不确定的浸润性乳腺癌，检测腋窝淋巴结HER2基因状态。

本实验对463例病理诊断为乳腺癌的组织病理切片分别行IHC和FISH检测，结果显示：HER2蛋白表达评分为-、+、时，两种方法检测结果的总符合率为92.20%，与文献报道的90%相近[14]。特别是，HER2评分为的122例标本中有113例FISH结果为阳性，表明大多数HER2蛋白过度表达的乳腺癌组织中存在HER2基因的扩增，ASCO/CAP指南推荐HER2在IHC评分为和-时，IHC法可替代FISH法。但HER2评分为的110例标本中有73例FISH检测结果为阴性，3例FISH检测结果为不确定，仅33.64%(37/110)的经FISH检测有基因扩增，这与Hammock等[15]报道结果相近，IHC-HER2与FISH-HER2两者符合率较低，可能是HER2基因的重排影响了抗体的识别，也可能是17号染色体的多重性和免疫组化的假阳性对结果造成一定的影响，此时应进一步行FISH检测验证[16]，且以FISH检测结果为准。有文献报道乳腺癌患者中约有15%存在HER2状态不确定的情况，即IHC-HER2为且FISH-HER2为不确定，对于这些病例Hou等[17]报道了一种新型基因蛋白分析(GPA)方法，即用亮视野显微镜在一张玻片上同时评估HER2基因拷贝数及蛋白表达，提高了HER2检测的准确性。

在结束这篇拙文的时候，总体上认识到生存环境与生计方式决定着人类文化总体的发展态势。人类的历史也可以被认为是食物史。历史上，青海卫拉特蒙古人的饮食文化发展和变迁，有其自身的规律和特征，在发展演变过程中，环境与生产力是影响和左右青海卫拉特蒙古饮食文化的关键因素。此外，全球化也对青海卫拉特蒙古饮食及饮食文化提出了新的要求。青海卫拉特蒙古饮食文化渊源流畅，地域、民族特色鲜明，是重要的文化资源。因此，重视饮食文化在地域经济发展中的地位和作用，积极发挥其旅游效益与可能产生的其他效益，在开发中发展、发展中传承应为今后青海卫拉特蒙古传统饮食文化发展的主要方向。

本研究结果显示，ER、PR与HER2基因及蛋白表达呈负相关，其机制尚不明确，两者是否存在拮抗作用或在基因层面出现转化还需要深入研究。Ki67、组织学分级、肿块大小与HER2基因及蛋白表达呈正相关，进一步证明HER2基因扩增和蛋白过表达是提示乳腺癌恶性程度高的指标之一，这与Panjwani等[18]的报道相类似。

总之，HER2表达与Ki67、ER、PR、淋巴结转移、肿块大小及病理学分级之间存在相关性，HER2是判断乳腺癌患者预后的重要因素。FISH和IHC两种方法检测HER2表达具有较好的一致性及相关性，所有乳腺癌都应常规进行HER2免疫组化检查，IHC HER2情况下应当进一步行FISH HER2检查。HER2蛋白表达及基因扩增检测必须在规范操作、良好质控的条件下进行并经有经验的病理医师进行判读。

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(责任编辑：黄永红)