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参附对大鼠缺血再灌注心肌损伤炎症反应的影响

更新时间:2009-03-28

有研究[1]表明,炎性反应参与了心肌缺血再灌注损伤的发生、发展的病理过程。近年来,有研究[2]显示,中药对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其抗损伤作用通过多个途径和多个靶点来实现。参附注射液是以中医著名古方参附汤加工提炼而成,人参皂苷和乌头类生物碱为主要成分。本研究采用结扎左冠状动脉前降支制备心肌缺血再灌注模型,通过对大鼠进行参附注射液预处理,观察大鼠心肌组织心态学改变和测定心肌超氧化物歧化酶(SOD)和组织丙二醛(MDA)含量变化,探讨参附注射液预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,旨在为临床应用提供理论依据。

1 资料和方法

1.1 实验动物与试剂

健康雄性SD大鼠,体质量(400±50)g,由南昌大学医学院动物实验室提供,动物合格证号:1103052。参附注射液由三九药业有限公司提供,批号:0211320。SOD和MDA试剂盒购于南京生物技术有限公司。

1.2 实验分组和给药方法

30只SD大鼠随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和参附注射液组(SF组),每组10只。S组和I/R组,经股静脉输生理盐水5 mL·100 g-1,SF组经股静脉输参附注射液5 mL·100 g-1,每日1次,连续1周。

1.3 动物模型制备

术前12 h禁食,用10%水合氯醛(3 mL·kg-1)腹腔注射法麻醉,气管切开后进行气管插管,小动物呼吸机辅助通气。于大鼠胸骨右缘侧第4肋间行纵行切口,游离肌肉,剪断肋骨,充分暴露视野,破胸膜、心包膜,暴露大鼠心脏,结扎左心耳下缘与肺动脉圆锥间左冠状动脉前降支中下1/3处,用硅胶管垫于血管和结扎线之间,结扎30 min后再灌注2 h。其中,S组仅给予穿线,不结扎冠状动脉前降支。

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1.4 心肌组织中SOD活性MDA浓度的测定

本研究通过采用结扎左冠状动脉前降支制备缺血再灌注模型,探讨参附注射液对再灌注心肌损伤炎症反应的影响。研究结果显示,S组:结构清晰,无炎症细胞浸润。I/R组:组织结构紊乱,可见局灶性坏死,明显炎性细胞浸润。SF组:与I/R组相比较,SF组浸润的炎性病变显著减轻。这提示参附注射液对缺血再灌注损伤心肌组织炎症反应具有一定的抑制作用。

1.5 统计学方法

在临床工作中研究[4]发现,对于部分急性心肌梗死患者虽然尽早、快速开通冠状动脉闭塞血管降低了病死率,但得到血液再灌注后有些细胞甚至出现严重的缺血性损伤,出现不同程度的心力衰竭,这种现象在老年患者中更为显著。因此,探索防治缺血再灌注损伤已成为心肌保护所面临的热点课题之一。

2 结果

2.1 各实验组大鼠心肌组织的病理变化

参附注射液源于传统中药参附汤,是由人参和黑附片等中药提取而成,主要有效成分为人参皂苷和乌头类生物碱,具有回阳、益气和固脱的功效,可以改善微循环,发挥抗凋亡、抗炎、抗心肌缺血等作用,临床上主要应用于心律失常、休克、心力衰竭和心脑血管缺血再灌注损伤等疾病[3]

2.2 参附对各组心肌组织中SOD活性和MDA浓度的影响

与S组相比,I/R组和参附组大鼠心肌组织匀浆中MDA水平增高,SOD活性降低,差异具有统计学意义(P<0.01);与I/R相比较,参附组大鼠心肌组织中MDA水平降低,SOD活性升高,差异具有统计学意义(P<0.01),见表1。

 

表1 各组心肌组织中SOD活性和MDA水平的比较 ±s

  

组别nSOD/(U·mg-1)MDAc/(nmol·mL-1)S组10118±940±1I/R组1065±2*70±3*IF组1096±8#45±6#

*P<0.01与S组比较,#P<0.01与I/R组比较。

3 讨论

光学显微镜下观察结果显示:S组的结构清晰,无炎症细胞浸润。I/R组的组织结构紊乱,可见局灶性坏死,明显炎性细胞浸润。SF组与I/R组相比较,SF组浸润的炎性病变显著减轻。

采用陈从瑾[12]等人的方法,向3.9 mL DPPH溶液(25.6 mg·L-1)中分别加入0.1mL稀释后的荷叶发酵上清液,抗坏血酸作为阳性对照,反应总体积为4.0 mL。在常温、避光条件下反应30 min后,测定其在517 nm处的吸光值A1。每个浓度重复3次,其中抗坏血酸作为阳性对照,蒸馏水做空白对照。DPPH清除率按下式计算。

采用SPSS17.0统计软件进行整理及统计分析处理,计量资料用±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

采用黄嘌呤氧化酶法测定肺组织中SOD的活性,采用硫代巴比妥酸法测定MDA的浓度。

有研究[5]表明,心肌缺血再灌注损伤的发病机制与氧自由基密切相关,氧自由基在体内增加时可作用于机体细胞的蛋白质、脂类和核酸,导致细胞的结构和功能改变,出现细胞的变形和坏死。超氧化物岐化酶(SOD)是广泛存在于需氧物体内的防御氧化损伤的一种金属酶,能催化超氧阴离子自由基岐化反应生成氧气和过氧化氢,具有清除自由基的重要作用,因此,通过测定SOD的活性可以从侧面判断机体清除氧自由基能力的高低[6]。MDA是机体内氧自由基代谢产生的脂质过氧化产物,它可以反映该体系中过氧化自由基的存在及反应的程度,其含量高低是组织细胞损伤的重要标志[7]。氧自由基能否对机体造成损害不仅要看体内产生氧自由基多少,还要看体内抗氧化酶活性和抗氧化剂浓度,只有这种动态平衡被打破时,才会导致机体损伤,当这种动态平衡被破坏时,可以通过补充人工合成的抗氧化剂,也可以通过提高体内抗氧化酶活性来抵抗自由基对机体的损伤。已有研究[8]表明,参附注射液可以通过抗氧化、减少细胞凋亡等多种途径减少缺血再灌注对脑组织的损伤,而有关参附注射液对心肌缺血再灌注损伤的研究不多。在本实验中,观察了参附注射液对脂质过氧化损伤的保护作用。结果发现SF组中SOD活性明显高于I/R组,MDA水平明显低于I/R组,表明参附注射液具有清除超氧化物阴离子自由基、减轻脂质过氧化损伤、保护心肌细胞的功效。

2.3.1理论产量理论产量是处理6最高为287.55公斤/亩,依次是处理5为265.75公斤/亩,处理4为234.66公斤/亩,处理3为224.39公斤/亩,处理2为215.02公斤/亩,处理1为208.72公斤/亩。

本文以山西省临猗县姚村110 kV变电站工程为例,介绍装配式建筑物的应用情况。该工程总平面采用AIS方案,110 kV的AIS配电装置采用户外布置形式,35 kV、10 kV配电装置均采用E-HOUSE集装箱布置,二次设备采用预制式舱,由厂家成套供应。

综上所述,参附注射液有助于心肌氧化应激异常的恢复,为寻找中医药保护方法和为中药设计靶点提供必要的理论依据,但参附注射液作用靶点多样,因此有必要对其活性成分与药理活性关系进行深入研究。

参考文献:

[1] Li J,Zhong L,Wang F,et al.Dissecting the role of AMP-activated protein kinase in human diseases[J].Acta Pharm Sin B,2017,7(3):249-259.

[2] Totzeck M,Korste S,Miinalainen I,et al.S-nitrosation of calpains is associated with cardioprotection in myocardial I/R injury[J].Nitric Oxide,2017,67:68-74.

[3] 李爱华,李倩,白桂春,等.参附注射液预处理对大鼠急性再灌注损伤的保护作用[J].中成药,2015,37(8):1818-1820.

[4] 张武宁,陈牧雷,杨新春,等.心肌细胞凋亡在老年性缺血再灌注后心力衰竭发生中的作用[J].中华老年心脑血管病杂志,2013,15(8):795-798.

[5] Yang Z,Duan Z,Yu T,et al.Inhibiting cytochrome c oxidase leads to alleviated ischemia reperfusion Injury[J].Korean Circ J,2017,47(2):193-200.

[6] Totzeck M,Hendgencotta U,Rassaf T,et al.Cardioprotection by remote ischemic conditioning:mechanisms and clinical evidences[J].World J Cardiol,2015,7(10):621-632.

[7] Dong L Y,Li S,Zhen Y L,et al.Cardioprotection of vitexin on myocardial ischemia/reperfusion injury in rat via regulating inflammatory cytokines and MAPK pathway[J].Am J Chin Med,2013,41(6):1251-1266.

[8] 陈志宏,齐聪儒,杨松鹤,等.器官衰老和自由基学说[J].承德医学院学报,2003,20(2):143-145.

(责任编辑:刘大仁)

 
王琰康,唐昱,刘燕锋,祝志云
《南昌大学学报(医学版)》2018年第01期文献

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