据统计，食管癌占全球恶性肿瘤发病率的第9位，是最常见的恶性肿瘤之一，具有典型的区域和民族特征[1-2]。食管癌在中国高发，尤其是生活在新疆的哈萨克族尤为突出[3]。相关研究从分子遗传学上分析食管癌的发生与叶酸的缺乏和代谢障碍有关，叶酸是调节DNA正常甲基化和保持其完整性的重要物质，亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）则是叶酸代谢过程中的关键酶[4-6]。C677T和A1298C是MTHFR基因的多态性位点[7]，其突变可导致MTHFR活性降低，影响体内叶酸的代谢，从而可能导致食管癌的发生[8]。本研究分析了MTHFR基因C677T和A1298C多态性与哈萨克族食管癌发病率的关系，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2016年2月至2017年2月于新疆维吾尔自治区人民医院接受治疗的78例哈萨克族食管癌患者为观察组。纳入标准：①均经病理组织学诊断确诊；②均在本地区居住超过5年。排除标准：①近1个月有急慢性感染或自身免疫性疾病者；②合并其他原发性恶性肿瘤者。观察组中，男49例，女29例；年龄40～63岁，平均（51.02±9.88）岁。同时选取相同民族、地区、居住年限的健康者234例为对照组。对照组中，男149例，女85例；年龄41～63岁，平均（50.82±10.11）岁。两组患者的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有受试者均对本研究知情并签署知情同意书。

1.2 基因多态性检测

抽取受试者清晨空腹外周静脉血5 ml，乙二胺四乙酸抗凝。应用基因组DNA小量抽提试剂盒（购自上海生工生物工程有限公司）提取基因组DNA，严格按照试剂盒说明书进行操作。采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）-限制性片段长度多态性技术检测MTHFR基因[9-10]，MTHFR基因C677T的上游引物为5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3'，下游引物为 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'；MTHFR基因A1298C的上游引物为5'-CTTTGGGGAGCTGAAGGACTACTAC-3'，下游引物为5'-CACTTTGTGACCATTCCGGTTTG-3'。PCR 体系（25 μl）：基因组 DNA（5 μl），10 pmol/μl的上下游引物（各2 μl），2.5 mmol/L 的 1×dNTP（4 μl）、2.5 U/μl Taq酶（含Mg2+，1 μl），10×PCR Buffe（r5 μl），加水补足至25 μl。PCR 扩增条件：95℃ 5 min，94℃ 1 min，60.5℃1 min，72℃ 1 min，共35个循环，最后72℃延伸8 min。将PCR产物用HinfⅠ限制性内切酶进行酶切鉴定，在37℃条件下消化13 h，然后用2%琼脂糖凝胶电泳，确定MTHFR基因型。

1.3 膳食调查

采用24 h膳食回顾调查表，对患者的饮食进行严格的定量，计算患者的能量、蛋白质、硒、维生素C、维生素E和叶酸的平均摄入量，且同中国营养学会推荐的中国居民膳食营养素参考摄入量（dietary reference intake，DRI）对比计算比率值，比率值=实际摄入量/推荐摄入量×100%。

我把鸟儿带回家后，小心地给它消毒，又帮鸟儿把骨头接好固定，还给它喂了一点药，然后放在储存间，门小开一点，等它痊愈后可以自由飞走，顺便还放了一些粮食、水在储存间。

鱼类的性成熟受遗传和环境的双重影响，对某一物种来说，既具备相对的稳定性，又表现出一定的可塑性［20］。从云南鳅的基础生物学特征研究中得出，草海云南鳅最小性成熟的年龄为1＋龄，雄鱼最小体长为 1.22 cm，体重 0.21 g；雌鱼最小体长 3.01 cm，体重0.41 g。在未达到性成熟之前，雄鱼和雌鱼在外部形态上无显著差异，较难区分，性成熟后可以根据成熟的雌鱼腹部膨大突出，能够看到卵巢鼓起的轮廓，个体比雄鱼小，生殖孔出现淡淡的红色等特征可以区分雌雄。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计分析，采用Hardy-Weinberg遗传平衡检验分析样本-是否具有群体代表性；计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MTHFR基因 C677 T和 A1298 C多态性检测

MTHFRC677T基因型可分为野生型CC（173bp）、杂合型CT（173 bp/125 bp/48 bp）和变异型TT（125 bp/48 bp）；MTHFR A1298C基因型可分为野生型AA（56 bp）、杂合型 AC（56 bp/84 bp）和变异型 CC（84 bp）。

观察组与对照组MTHFR C677T基因型分布和等位基因频率比较，差异均无统计学意义（χ2=0.271，P=0.873；χ2=0.232，P=0.630）；观察组与对照组MTHFR A1298C基因型分布和等位基因频率比较，差异均无统计学意义（χ2=1.381，P=0.501；χ2=0.000，P=1.000）。说明MTHRF C677T和A1298C基因型频率均已达到遗传平衡，具有人群代表性。（表1、表2）

2.2 MTHFR C677 T和MTHFR A1298 C基因型分布及等位基因频率的比较

华为公司的名字来自于“心系中华，有所作为”。虽然是任正非先生随便选取的名字，但是正是名字来源于这句话，给华为塑造了一个爱国的形象，吸引了越来越多的消费群体。品牌命名若是加入情感，也会带来意想不到的结果。1993年7月建立的润之酒家取名就充满命名的艺术性，采用我们开国领袖毛泽东的字，使得这家店一开张就得到意想不到的关注。单看酒店名字便会让人觉得这个品牌充满感情，也会在潜意识里认为这个酒店用这个名字命名，定是个值得信任的酒店。润之酒店的命名体现了民族名义。就像消费者会对华为公司，娃哈哈有一定信任的原因，在遇到选择时会偏向于这些更富有情感的品牌。这说明企业品牌的命名应该考虑情感因素。

表1 两组受试者的MTHFR C677 T基因型分布及等位基因频率[ n（%）]

组别观察组（n=78）对照组（n=234）基因型分布CC型44（56.41）137（58.55）CT型27（34.62）80（34.19）TT型7（8.97）17（7.26）等位基因频率C 115（73.72）354（75.64）T 41（26.28）114（24.36）

表2 两组受试者的MTHFR A1298 C基因型分布及等位基因频率[ n（%）]

组别观察组（n=78）对照组（n=234）基因型分布AA型47（60.26）147（62.82）AC型29（37.18）75（32.05）CC型2（2.56）12（5.13）等位基因频率A 123（78.85）369（78.85）C 33（21.15）99（21.15）

2.3 膳食调查结果

食管癌是中国常见的恶性肿瘤之一，其发生原因可能是相关基因突变，导致肿瘤细胞生成并在食管处增殖，严重影响了人们的生活水平和生命健康。目前临床上对食管癌的发病机制尚未完全清楚，因此，寻找食管癌的具体发病原因成为研究的热点之一[11]。叶酸可为细胞内DNA正常甲基化和核苷酸从头合成提供甲基基团，但其必须在体内正常细胞中代谢后才可发挥此生物学功能，因此叶酸的缺乏或代谢障碍可能影响细胞DNA的合成及完整性，从而造成DNA在复制过程中突变率升高[12]。在叶酸的代谢过程中，MTHFR是非常关键的催化酶，其可以催化5,10-亚甲基四氢叶酸生成5-甲基四氢叶酸，而后者是细胞内通用甲基供体S-腺苷甲硫氨酸合成的原料之一。研究发现，MTHFR基因具有多态性，其中最常见的是C677T和A1298C多态，MTHFR基因上这2个位点的改变都会使其编码的酶活性显著降低，从而影响叶酸的代谢，导致体内叶酸代谢出现障碍[13]。体内的叶酸水平除了受到基因影响，同时也会受到饮食和生活习惯的影响，如蔬菜水果的摄入量、吸烟、饮酒以及熏制肉品的食用等[14]。哈萨克族人生活在新疆北部，生活相对封闭，主要从事牧业劳动，遗传背景及生活方式较为单一，蔬菜和水果摄入量较少，并常食用熏制马肉且有饮酒习惯，因此叶酸的摄入量相对较少，从而影响DNA正常甲基化、DNA从头合成以及DNA修复的正常运转，容易造成基因突变，诱发食管癌的发生。Hardy-Weinberg遗传平衡是检验样品是否具有代表性的公认标准[15]，因此本文采用该标准来衡量所选患者是否具有代表性。结果表明，观察组和对照组受试者MTHFR基因C677T和A1298C分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡，证明所选样本具有代表性，所得结果具有科学的前提。

“杭州是中国的一个历史文化重镇”，理所当然也是一个中国书画的重镇。从南宋画院到中国美术史上第一个由地域命名的画派——浙派山水画，再到武林画派，再在近现代一大批引领中国书画史的大师。杭州的中国书画天空一直群星璀璨。

表3 两组受试者各种膳食营养素摄入的DRI比率值比较（%，±s）

组别观察组（n=78）对照组（n=234）t值P值能量70.12±2.24 101.43±1.89-120.782 0.000蛋白质89.22±24.16 102.11±17.43-5.103 0.000铁硒201.14±60.03 210.44±50.46-1.342 0.181 80.10±12.21 144.06±13.53-37.020 0.000维生素C 30.01±4.13 35.44±5.21-8.367 0.000维生素E 80.81±21.03 90.11±21.74-3.298 0.001叶酸40.24±9.81 88.56±8.94-40.330 0.000

3 讨论

观察组摄入的能量、蛋白质、硒、维生素C、维生素E和叶酸的DRI比率值均明显低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表3）

基因多态性是指在一个生物群体中，同时和经常存在两种或多种不连续的变异型或基因型或等位基因。本研究中琼脂糖凝胶电泳实验结果表明，MTHFR C677T基因型可分为野生型CC（173 bp）、杂合型CT（173 bp/125 bp/48 bp）和变异型TT（125 bp/48 bp）；MTHFR A1298C基因型可分为野生型 AA（56 bp）、杂合型 AC（56 bp/84 bp）和变异型CC（84 bp），表明MTHFR基因具有多态性。

C677T和A1298C是MTHFR基因常见的突变位点，有关研究表明MTHFR基因C677T和A1298C多态性与肿瘤疾病的发生具有一定的相关性[16]。本研究结果显示，观察组与对照组MTHFR C677T基因型分布和等位基因频率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；观察组和对照组MTHFR A1298C基因型分布和等位基因频率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。说明MTHFR基因C677T和A1298C多态性与食管癌的发生无关，不是导致食管癌发生的原因，与张力为等[17]和张金芳等[18]的研究结果一致。然而，王秀梅等[19]却在研究中得出结论，MTHFR基因C677T多态性是哈萨克族食管癌发生的危险因素；刘静等[20]的一项Meta分析探讨了MTHFR基因多态性与中国人群食管癌易感性的关系，结果显示，中国人群MTHFR基因C677T多态性与食管癌易感性有关，MTHFR基因A1298C多态性与食管癌易感性无关。由此可见，有关MTHFR基因C677T和A1298C多态性与食管癌发病关系的结论差异较大。这可能是因为食管癌发生可能是多基因联合造成的，需对更多基因进行联合检测，也可能是受限于本研究中的样本量，需要更大的样本量，才能得出更准确、更具代表性的结果。

食管癌发病率与MTHFR基因C677T和A1298C多态性关系的研究结果虽不尽相同，但均提示与患者的饮食和生活习惯有关。由于肿瘤的发生是多因素长期积累的结果，因此要从患者的饮食和生活习惯方面进行全面考量，对各种致病因素进行系统总结，才能得到相对准确的结果。本研究探讨了食管癌患者及健康者摄入的能量、蛋白质、硒、维生素C、维生素E和叶酸水平，结果显示，观察组摄入的能量、蛋白质、硒、维生素C、维生素E和叶酸的DRI比率值均明显低于对照组（P＜0.01）。说明饮食和生活习惯可能与哈萨克族居民食管癌的发生有一定的关系，饮食结构和生活习惯不合理，会导致体内与叶酸代谢相关物质的缺乏，进而导致DNA的合成与完整性遭到破坏，基因突变的概率增加，最终促进食管癌的发生。

综上所述，MTHFR基因C677T和A1298C多态性与哈萨克族食管癌发病无明显关系，食管癌的发生可能与哈萨克族居民的饮食和生活习惯有关。因此，临床上预防食管癌的发生要从饮食和生活习惯上进行控制，同时本研究的样本量有限，需要进行更大规模的临床试验，从而寻找与食管癌关系密切的基因多态性位点。

参考文献

[1]曹小琴,孙喜斌.食管癌发病水平及变化趋势[J].中国肿瘤临床,2016,43(21):932-936.

[2]Mirzaei F,Dehdari T,Malehi AS.Prevention of esophageal cancer:experience of an educational campaign for reducing hot tea consumption in Iran[J].Asian Pac J Cancer Prev,2015,17(1):305-310.

[3]周莹,张志强.食管癌的防治进展[J].中国中西医结合消化杂志,2016,24(4):321-324.

[4]姚文龙,刘亭宇.叶酸与食管癌关系的研究进展[J].中国食物与营养,2016,22(9):84-86.

[5]尹钰,帕力达·托了汗,陈艳.叶酸水平与食管癌关系的Meta分析[J].新疆医科大学学报,2015,38(6):748-753.

[6]Haenisch B,von Holt K,Wiese B,et al.Risk of dementia in elderly patients with the use of proton pump inhibitors[J].Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci,2015,265(5):419-428.

[7]胡兴文,王维鹏.MTFHR基因两位点多态性及其与MTRR基因多态性的关系分析[J].中国妇幼保健,2015,30(25):4336-4339.

[8]周新月,孟元光.叶酸代谢关键限速酶亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与宫颈癌的关系[J].医学综述,2016,22(19):3801-3804.

[9]Laraqui A,Allami A,Carrié A,et al.Relation between plasma homocysteine,gene polymorphisms of homocysteine metabolism-related enzymes,and angiographically proven coronary artery disease[J].Eur J Intern Med,2007,18(6):474-483.

[10]Xing DY,Tan W,Lin DX.Genetic polymorphisms and suscepibility to esophageal cancer among Chinese population[J].Oncol Rep,2003,32(10):1615-1623.

[11]郭晓彤,赫捷.食管癌治疗现状及精准医学时代展望[J].中华肿瘤杂志,2016,38(9):641-645.

[12]张慧霞,李旭峰,陈艳.叶酸和维生素A对MNNG致哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞恶变过程中DNA损伤的干预研究[J].新疆医科大学学报,2017,40(2):201-205.

[13]李栋,于坤坤,马衍辉,等.5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天性心脏病关系[J].中国公共卫生,2016,32(10):1377-1381.

[14]张玉,胡皓,赵一,等.赵国岑教授运用中医药治疗食道癌经验[J].中医学报,2016,31(12):1845-1848.

[15]田丹丹,张程达,王连珂,等.亚甲基四氢叶酸还原酶基因及甲硫氨酸合成酶基因多态性与口服叶酸治疗高同型半胱氨酸血症疗效的关系研究[J].中国全科医学,2016,19(12):1396-1400;1407.

[16]Lin J,Zeng RM,Li RN,et al.Aberrant DNA methylation of the P16,MGMT,and hMLH1 genes in combination with the methylenetetrahydrofolate reductase C677T genetic polymorphism and folate intake in gastric cancer[J].Genet Mol Res,2014,13(1):2060-2068.

[17]张力为,伊力亚尔·夏合丁,吴明拜,等.MTHFR基因1298A→C多态与新疆哈萨克族食管癌风险关系的研究[J].中华肿瘤防治杂志,2008,15(17):1294-1297.

[18]张金芳,庞丽娟,赵瑾,等.MTHFR C677T基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性关系的研究[J].石河子大学学报(自科版),2006,24(2):138-141.

[19]王秀梅,张卫群,陈波,等.MTHFR基因多态性与哈萨克族食管癌易感性[J].中国公共卫生,2007,23(8):937-938.

[20]刘静,孙业桓,陈颍,等.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与中国人群食管癌易感性的Meta分析[J].肿瘤防治研究,2010,37(2):213-217.