肺癌是当前全球范围内最普遍的恶性肿瘤之一，发病率和病死率一直居于恶性肿瘤首位，严重威胁人类生命健康[1-3]。肺癌患者临床表现多样，且多数患者发病时无明显症状，给诊断带来困难。因此，寻找一种准确、高效的肺癌诊断方法成为研究热点[4]。目前，临床上常用于肺癌诊断的肿瘤标志物包括癌胚抗原(carcinoembryonic antigen， CEA)和糖类抗原(carbohydrate antigen， CA)199等，但对肺癌诊断敏感性均较低[5]。肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen， TAA)是在肿瘤发生和增长过程中高度表达的抗原，可以触发患者体内的免疫反应，产生抗TAA自身抗体[6]，在癌症初期筛查和预后评估上起很大作用[7]。但单独一种自身抗体的特异度和灵敏度均较低，研究显示几种自身抗体联合检测可使肺癌诊断率得到提高[8-9]。以孙苏彭[10]的血清自身抗体检测试剂盒发明专利为依据，有研究发现抑癌基因产物p53、蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5， PGP 9.5)、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2， SOX2)、肺癌组肿瘤/睾丸抗原G抗原7(G antigen 7， GAGE7)、ATP结合RNA解旋酶GBU4-5、黑色素瘤抗原A1(melanoma antigen 1， MAGEA1)、肿瘤相关基因(cancer associated gene， CAGE)7种自身抗体(seven autoantibodies， 7-AABs)检测对于Ⅰ～Ⅳ期非小细胞肺癌患者的诊断特异度均达到89%；灵敏度分别为62%、59%、62%、64%[11]。7-AABs诊断肺癌特异度大大增加，但灵敏度尚有待提高。有研究显示，p53等6种自身抗体联合CA125检测可明显提高卵巢癌检测灵敏度[12]，而孙苏彭[10]研发的试剂盒尚无类似报道。本研究将孙苏彭[10]研发的试剂盒与CEA、CA199联合检测，评估7-AABs联合CEA、CA199检测对肺癌的诊断价值，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2016年11月—2017年9月海军军医大学长海医院经病理检查确诊的43例肺癌作为肺癌组，另选取同期在该院进行健康体检的健康体检者18例作为对照组。肺癌组均为经组织病理学检查明确诊断为肺癌且无全身其他部位肿瘤患者；对照组系体检中心遴选的经肺部CT检查无结节健康体检者。本研究经院医学伦理委员会批准执行。

1.2 研究方法 采集研究对象空腹外周血样本，2000 r/min离心15 min，分离血清，室温(18～25℃)存储，8 h之内进行批量集中检测。采用酶联免疫吸附试验法检测血清样本中的7-AABs，试剂盒由杭州凯保罗生物科技有限公司提供，由专人检测，严格按照说明书进行操作。采用化学发光法检测CEA、CA199，由长海医院检验科检测。

1.3 观察指标 观察比较两组检测结果，评价血清7-AABs和CEA、CA199诊断肺癌的灵敏度并绘制受试者工作特征(ROC)曲线；进一步将血清7-AABs、CEA、CA199检测结果分别进行3种联合检测组合，即7-AABs+CEA、7-AABs+CA199、7-AABs+CEA+CA199，评价3种组合诊断肺癌的灵敏度并绘制ROC曲线。

1.4 评价标准 血清7-AABs阳性判断值：p53>13.1 kU/L，PGP 9.5>11.1 kU/L，SOX2>10.3 kU/L，GAGE7>14.4 kU/L，GUB4-5>7.0 kU/L，MAGEA1>11.9 kU/L，CAGE>7.2 kU/L。阳性诊断标准：如果血清7-AABs检测浓度均低于其阳性判断值则为阴性；如果血清7-AABs中1种自身抗体检测浓度高于其阳性判断值即为阳性[10,13]。CEA正常参考值上限为5 μg/L；CA199正常参考值上限为39 kU/L。

1.5 统计学方法 应用SPSS 19.0统计学软件对所有数据进行处理，计量资料用均数±标准差表示，采用Student t检验进行比较；计数资料用例(%)表示，采用χ2检验进行比较；另将7-AABs、CEA、CA199以及3种不同组合的结果绘制成ROC曲线，计算ROC曲线下面积(area under curve， AUC)，分析灵敏度、特异度、准确性、阳性预测值、阴性预测值等，以α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 一般资料比较 肺癌组男32例，女11例；年龄(62.8±9.62)岁。经纤维支气管镜、经皮肺穿刺及淋巴结活组织病理检查等病理学检查明确诊断为肺癌，其中腺癌24例，鳞癌11例，小细胞肺癌8例；肿瘤分期：Ⅰ期2例，Ⅱ期1例，Ⅲ期9例，Ⅳ期31例。对照组男12例，女6例；年龄(60.7±6.39)岁。两组性别及年龄比较差异无统计学意义(χ2=0.379,P=0.538;t=0.993,P=0.325)。

2.2 检测结果比较 肺癌组血清抑癌基因产物p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE的表达均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1；肺癌组血清CEA及CA199检测结果高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。肺癌组血清7-AABs检测阳性32例，阳性率74.42%；对照组血清7-AABs检测阳性3例，阳性率16.67%，两组血清7-AABs检测阳性率比较差异有统计学意义(χ2=17.305，P<0.0001)。

 

表1 肺癌患者与健康体检者血清7种自身抗体检测结果比较

  

组别例数抑癌基因产物p53PGP9．5SOX2GAGE7ATP结合RNA解旋酶GBU4⁃5MAGEA1CAGE肺癌组4319．60±28．7116．87±31．6012．25±16．6421．90±35．308．18±11．3113．24±20．389．95±16．39对照组183．78±8．944．26±9．462．07±2．453．92±2．741．99±3．591．87±2．072．27±1．69t3．2562．3753．9123．3163．2223．6143．034P0．00190．02100．00030．00190．00210．00080．0041

注：PGP 9.5为蛋白基因产物9.5，SOX2为性别决定区Y框蛋白2，GAGE7为肺癌组肿瘤/睾丸抗原G抗原7，MAGEA1为黑色素瘤抗原A1，CAGE为肿瘤相关基因

 

表2 肺癌患者与健康体检者血清癌胚抗原及糖类抗原199检测结果比较

  

组别例数癌胚抗原(μg/L)糖类抗原199(kU/L)肺癌组4387．19±317．3253．42±184．15对照组182．58±1．248．66±4．14t1．7481．593P0．08770．1189

2.3 诊断效能评估 绘制ROC曲线，分析血清7-AABs、CEA和CA199及其不同组合对肺癌诊断效能，结果显示血清7-AABs、CEA和CA199检测诊断肺癌的灵敏度分别为74.42%、60.47%、46.51%，血清7-AABs+CEA、7-AABs+CA199、7-AABs+CEA+CA199 3种组合检测诊断肺癌的灵敏度增加至86.05%、76.74%、86.05%，见表3。血清7-AABs、CEA和CA199检测诊断肺癌的AUC分别为0.789、0.733、0.570，血清7-AABs+CEA、7-AABs+CA199、7-AABs+CEA+CA199 3种组合检测诊断肺癌的AUC提升至0.903、0.865、0.907，见图1。提示血清7-AABs检测诊断肺癌有一定准确性和预测效果，血清7-AABs及CEA、CA199联合检测可提高肺癌检出率。

 

表3 血清7-AABs及CEA、CA199单项与联合检测诊断肺癌的价值

  

项目灵敏度(%)特异度(%)准确性(%)阳性预测值(%)阴性预测值(%)约登指数ROCAUC(95%可信区间)7⁃AABs74．4283．3377．0591．4357．690．5780．789(0．678～0．899)CEA60．47100．0065．31100．0026．090．6050．733(0．559～0．906)CA19946．5190．0054．7295．2428．130．3650．570(0．401～0．738)7⁃AABs+CEA86．0583．3385．7197．3745．450．6940．903(0．823～0．983)7⁃AABs+CA19976．7490．0079．2597．0647．370．6670．865(0．787～0．943)7⁃AABs+CEA+CA19986．0583．3385．7197．3745．450．6940．907(0．831～0．983)

注：7-AABs为7种自身抗体，CEA为癌胚抗原，CA199为糖类抗原199，ROC AUC为受试者工作特征曲线下面积

 

图1 血清7-AABs及CEA、CA199单项与联合检测诊断肺癌的ROC曲线

注：7-AABs为7种自身抗体，CEA为癌胚抗原，CA199为糖类抗原199，ROC曲线为受试者工作特征曲线

3 讨论

在肿瘤形成过程中，由于基因突变、蛋白异常表达或异常修饰等原因患者体内产生TAA，激活免疫系统，产生抗TAA自身抗体[14]。TAA及其自身抗体可出现于多种不同类型的肿瘤，包括肺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等[15-16]。在血清中TAA性质不稳定，会被迅速降解或清除，而其自身抗体可以持续稳定的存在，并且健康个体或非癌症个体血清中TAA自身抗体含量很低甚至不能被检测出来[17]。由此可见患者血清中TAA 自身抗体水平可作为一种标志性物质应用于肿瘤的诊断。

目前，TAA自身抗体作为肿瘤诊断的血清学标志物已逐渐成为关注热点。很多研究证明，自身抗体联合检测在肿瘤诊断中具有重要价值[18-19]。Zhang等[19]对不同肿瘤患者进行TAA自身抗体检测，发现p53等血清7-AABs检测阳性率为44%～ 68%。赵娟等[20]研究报道血清7-AABs诊断初诊肺癌患者的敏感性为62%，ROC AUC为0.769，均达到较高水平，可用于肺癌辅助诊断。本研究结果显示肺癌组血清抑癌基因产物p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE的表达均显著高于对照组，血清7-AABs检测阳性率74.42%高于对照组血清7-AABs检测阳性率16.67%，差异有统计学意义。提示血清7-AABs可以作为肺癌诊断的分子学标志物，与既往研究结果类似。

集体主义内蕴着对人的自由与全面发展的关注和要求。 在受物化逻辑统治的个体化社会中弘扬集体主义价值原则，有利于矫治个体化社会中人受物统治的异化状态，促进人的自由与全面发展。

本研究结果还显示血清7-AABs、CEA和CA199联合检测诊断肺癌的灵敏度及ROC AUC均较高，其中7-AABs同时与CEA、CA199联合检测诊断肺癌的效果最好。阳志军等[13]选择126例初治卵巢恶性肿瘤和142例健康体检者，对其4次跨膜蛋白L6超家族成员(transmembrane 4 L six family member 1， TM4SF1)等6种TAA抗体以及CA125检测结果进行了分析，发现6种TAA抗体检测诊断卵巢癌的灵敏度为75.4%，6种TAA抗体联合CA125检测诊断卵巢癌的灵敏度增加至85.7%。李志等[21]研究分析抑癌基因产物p53等5种TAA自身抗体以及CEA在64例结肠癌和58例正常对照血清中的检测结果，发现5种TAA抗体检测诊断结肠癌灵敏度为60.9%，联合检测CEA后诊断结肠癌的灵敏度提升至82.8%。上述研究结果均表明血清TAA自身抗体联合传统肿瘤标志物检测可以提高肿瘤诊断效率。

综上所述，血清7-AABs联合CEA、CA199检测有望成为一种简单、准确、有效地筛检和诊断肺癌的方法。但本研究纳入样本量较少，后续可进一步扩大样本量进行研究验证。

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