溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种常见的非特异性慢性炎性疾病，发病机制不明，已被世界卫生组织列为难治病之一[1-2]。根据英国胃肠病学会炎症性肠病组的指南，将美沙拉嗪(mesalazine/mesalamine)划为轻、中度活动性UC有效的一线治疗(A级)药物[3]。美沙拉嗪药效主要取决于结肠黏膜药物浓度，但已上市美沙拉嗪制剂均存在在小肠过早释药、结肠靶向性差、给药次数多、服药剂量大、患者依从性差等问题[4-5] ，因此，新型精确结肠定位美沙拉嗪制剂的研制是当前研究的热点。

2008年10月，美国FDA批准了Salix Pharmas公司生产的AprisoTM上市，是迄今第一个1日1次给药的美沙拉嗪缓释胶囊剂，规格为每粒375 mg，可以减少药物在胃、前端小肠的吸收，同时药物释放平稳，疗效高，能减少给药次数，提高患者的顺应性。然而，AprisoTM 在国内尚未上市，国内也未见1日1次给药的美沙拉嗪缓释产品上市。为满足国内的临床需求，本文以释放度为指标，采用挤出滚圆法制备骨架型缓释丸芯，流化床包衣法包覆肠溶薄膜衣，对美沙拉嗪缓释胶囊进行仿制，制备美沙拉嗪肠溶缓释微丸，以期制得与原研制剂有相似释药效果的美沙拉嗪肠溶缓释微丸。

1 仪器与材料

1.1 仪器

BS 2000S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；KJZ-10型快速搅拌制粒机(中国上海信谊制药设备公司)；EXDS-60型挤出机和Q-230型圆化机(日本Fuji Paudal公司)；Glatt-Uni型流化床(德国Glatt公司)；RCZ-8M溶出仪试验仪及RZQ-8C溶出仪自动取样器(天津天大天发科技有限公司)；1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)。

1.2 药品与试剂

美沙拉嗪原料药(牡丹江恒远药业有限公司)；美沙拉嗪对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100586-200701，质量分数：99.9%)；美沙拉嗪缓释胶囊(原研制剂，商品名：Apriso，美国Salix Pharmas公司，批号：62539，规格：375 mg/粒)；微晶纤维素(MCC PH101，日本旭化成公司)；羟丙甲纤维素(HPMC)E5、K100LV CR和K4M(卡乐康技术有限公司)；尤特奇®S100、L100和NE30D(Eudragit®S100、L100和NE30D，Evonik公司)；滑石粉(沈阳医药股份有限公司化玻公司分装厂)；枸橼酸三乙酯(TEC，蚌埠丰原医药科技发展有限公司)；其他试剂为色谱纯或分析纯。

2 方法与结果

2.1 释放度测定方法的建立

2.1.1 色谱条件 色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇- pH6.8磷酸盐缓冲液(KH2PO4 6.805 g，NaOH 0.944 g，水1 000 mL，H3PO4调pH值至6.8;体积比50∶50)；流速：1.0 mL/min；检测波长：330 nm；柱温：常温；进样量：10 μL。

2.1.2 溶液的制备 精密称取美沙拉嗪对照品约10 mg，置于50 mL量瓶中，加pH 6.8磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，制成每1 mL中约含200 μg的对照品溶液；取0.5、1、2、3、4、5、6、7、9、12、15 h不同时间点的溶出液3 mL(同时补充相应同温度新鲜介质3 mL)，经一次性针式过滤器(水系，0.45 μm)滤过，取续滤液1 mL置于液相小瓶，作为供试品溶液。按美沙拉嗪缓释胶囊处方，称取处方组成中除美沙拉嗪以外的其他成分，同法制成空白辅料溶液。

2.1.3 专属性考察 取对照品溶液、12 h时的溶出液及空白辅料溶液各10 μL，按“2.1.1”项下色谱条件，记录色谱图(见图1)。结果表明，空白溶出介质和辅料对美沙拉嗪的测定均没有干扰。

2.1.4 标准曲线的绘制 精密吸取500 μg/mL的对照品溶液0.80、2.00、4.00、6.00、8.00 mL，分别置于10 mL量瓶中，用pH 6.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀，得到40、100、200、300、400 μg/mL的美沙拉嗪溶液，按“2.1.1”项下色谱条件下分别吸取10 μL进样测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=3.591 9X+3.587 8，r2=0.999 7，表明美沙拉嗪溶液在40～400 μg/mL质量浓度范围内线性良好。

  

A.空白辅料溶液； B.对照品溶液； C.供试品溶液。

 

图1 高效液相色谱图Figure 1 HPLC chromatograms

2.1.5 精密度、稳定性及回收率试验 取质量浓度200 μg/mL的美沙拉嗪对照品溶液10 μL，重复进样6次，记录峰面积，结果RSD值为0.53%，表明方法精密度良好；取质量浓度200 μg/mL的美沙拉嗪对照品溶液在室温下放置0、4、6、8、10、12、18、24 h后进样测定，结果24 h内美沙拉嗪峰面积的RSD值为0.15%，表明样品稳定性良好；精密称取美沙拉嗪对照品约10%、50%和130%各3份，照处方比例加入空白辅料，置于50 mL量瓶中，用pH 6.8磷酸盐缓冲液溶解，定容，按“2.1.1”项下色谱条件测定，以加入量和测得量相比求得回收率，结果美沙拉嗪平均回收率为98.7%，RSD为0.67%。

2.2 体外释放度试验

参照FDA推荐的美沙拉嗪缓释胶囊的释放度测定方法[6]，采用《中国药典》2015年版溶出度测定法第一法的装置[7]，测定方法如下：① 耐酸性测定介质为0.1 mol/L HCl溶液，介质体积为750 mL，温度为(37±0.5)℃，转速为100 r/min，耐酸考察时限为120 min；② 释放度测定耐酸时限考察完成后，立即取浓度为0.2 mol/L的Na3PO4溶液250 mL(预热至37 ℃)加入到溶出杯中，介质pH变为6.8，介质体积为1 000 mL，温度为(37±0.5)℃，转速为100 r/min，分别在0.5、1、2、3、4、5、6、7、9、12、15 h取样3 mL，过0.45 μm微孔滤膜，同时补加等温释放介质3 mL。按“2.1.1”项下方法测定释放介质中美沙拉嗪的浓度，并计算美沙拉嗪的累积释放度。

2.3 美沙拉嗪肠溶缓释微丸的制备

2.3.1 缓释丸芯的制备 参考美国FDA药品说明书[8]和原研制剂相关专利[9]拟定丸芯处方。称取美沙拉嗪原料药、微晶纤维素和HPMC混合均匀，过60目筛后倒入快速搅拌机，一边搅拌一边加入Eudragit®NE30D和纯化水制备软材，经挤出机筛板(孔径1.0 mm)挤成直径相等的条状，将条状物置于滚圆机内滚圆制成微丸。取出微丸于60 ℃烘干3 h，筛分得16～24目的目标微丸。

2.3.2 肠溶微丸的制备 参考Eudragit®S100和L100包衣液技术资料和使用指导[10]拟定包衣液处方。称取尤特奇®S100和L100与水混合，搅匀，缓慢加入体积分数95%乙醇，加入枸橼酸三乙酯，搅拌过夜，为包衣液A。称取滑石粉与水混合，用均质机分散10 min，为包衣液B。将包衣液B缓慢加入包衣液A中，搅拌分散60 min，采用Glatt-Uni型流化床进行包衣，制得美沙拉嗪肠溶缓释微丸。

2.4 主药粒径的选择

从Eudragit®L100和Eudragit®S100的比例筛选中可知，包衣膜中Eudragit®L100比例越大，包衣膜溶解破裂的速度越快，药物的释放速率越快。所以，Eudragit®L100和Eudragit®S100的比例是包衣膜处方筛选的关键因素之一。通过对美沙拉嗪缓释丸芯包衣处方的单因素考察，结果显示Eudragit®S100和Eudragit®L100比例为2∶3，包衣增重为14%时，自研美沙拉嗪肠溶缓释微丸和原研制剂的体外溶出曲线相似，产品的处方工艺能够满足与原研制剂达到相似释放行为的要求。

(4) 带入监测断面序列历史洪水资料，进行非稳定流模拟，得出研究区河道在特定时间段和时间步长条件下的流量模拟，并与实际监测流量进行对比。

  

图2 不同粒径原料药所制美沙拉嗪缓释丸芯的释放曲线

 

Figure 2 Dissolution curves of mesalamie extendeded-release pellets by different particle size of crude drug

2.5 丸芯处方单因素考察

2.5.1 Eudragit®NE30D聚合物用量 固定美沙拉嗪原料药、HPMC E5和滑石粉用量，以MCC PH101补至要求的丸芯质量，分别考察Eudragit®NE30D干聚合物量为处方量的10%、15%、17%和19%时药物的释放情况。结果表明，不同用量的Eudragit®NE30D处方的药物释放速度均较快，由于该制剂载药量达到61%，辅料用量占处方量的比例小，辅料用量的调整空间小，而Eudragit®NE30D作为骨架材料起到控制药物缓释的作用，故选取在此试验中的最高值19%为骨架材料Eudragit®NE30D的用量。处方组成见表1，释放曲线见图3A。

2.5.2 HPMC型号和用量 以19% Eudragit®NE30D为 缓释骨架材料，分别考察HPMC型号(HPMC E5、HPMC K100LV、HPMC K4M)及其用量(处方量的2%、4%)对缓释丸芯中药物释放的影响。结果表明，HPMC的型号对Eudragit®NE30D美沙拉嗪缓释丸芯的释药表现有很大影响，HPMC黏度越大，药物释放越慢，因此选择HPMC K4M作为本品的黏合剂。处方量2%的HPMC K4M的释放曲线与原研制剂的最接近，故确定处方中HPMC K4M的加入量为处方量的2%。处方组成见表1，释放曲线见图3B和图3C。

2.5.3 丸芯的干燥条件 考察缓释丸芯在不同干燥条件下(40 ℃、12 h；60 ℃、12 h；60 ℃、3 h)对缓释丸芯中药物释放的影响。结果表明，干燥条件为40 ℃、12 h和60 ℃、12 h 时，药物具有明显的突释现象，而60 ℃、3 h的释药曲线与原研制剂最为接近，故选择缓释丸芯的干燥条件为60 ℃、3 h，释放曲线见图3D。

 

表1 单粒美沙拉嗪缓释微丸中缓释丸芯的处方组成

 

Table 1 Formulation compositions of one mesalamine extendeded-release pellet w/%

  

辅料F1F2F3F4F5F6F7美沙拉嗪61616161616161微晶纤维素24191715151513Eudragit？倕NE30D10151719191919HPMCE52222HPMCK100LV2HPMCK4M24滑石粉3333333

注：F1～F7分别代表7个处方。

2.6 包衣处方的单因素考察

2.6.1 包衣材料种类及比例的选择 选择Eudragit®L100和S100作为包衣材料，将二者以一定比例混合制备美沙拉嗪肠溶缓释微丸。以表1中F6处方，固定包衣增质量为20%，考察Eudragit®L100和S100以不同比例混合(S100∶L100 = 1∶1,1∶0,0∶1,1∶4,4∶1,2∶3,质量比)制备包衣液，按“2.3.2”项下方法制备美沙拉嗪肠溶缓释微丸。结果显示，当选择不同比例的Eudragit®L100和S100混合包衣液进行包衣后，包衣微丸中药物的释放行为呈现明显的pH依赖特性，包衣处方中Eudragit®L100和S100的比例对药物的释放行为有显著的影响，根据图4释药曲线结果，选择Eudragit®S100和L100比例为2∶3作为包衣液处方。

  

A. Eudragit®NE30D聚合物用量; B. HPMC 型号; C. HPMC K4M用量; D. 丸芯干燥条件。

 

图3 不同处方的美沙拉嗪缓释丸芯的体外溶出曲线

 

Figure 3 Dissolution curves in vitro of mesalamine extendeded-release pellets designed by different formulations

  

图4 不同比例Eudragit®L100和S100包衣液的体外溶出曲线

 

Figure 4 Dissolution curves in vitro of mesalamine extendeded-release pellets coated at different level with various Eudragit®S100-L100 combination ratios

2.6.2 包衣增重的选择 通过对包衣材料种类及比例的考察，选择Eudragit®S100和L100比例为2∶3的包衣液对美沙拉嗪肠溶缓释微丸进行包衣,考察不同包衣增重(14%、17%、20%)对包衣微丸释药的影响。按“2.2”项下方法检测自制制剂的释放度，采用相似因子(f2)法[11]比较自制制剂与原研制剂释药曲线的相似性。结果显示，上述自制制剂与原研制剂释药曲线的f2分别为55.93、49.53、55.70，故确定包衣增质量为14%。自制制剂与原研制剂的释药曲线见图5。

  

图5 不同包衣增重的体外溶出曲线

 

Figure 5 Dissolution curves in vitro of mesalamine extended-release pellets coated at different levels

2.7 制备工艺的确定

称取美沙拉嗪原料药213.15 g，经粉碎机粉碎后过筛备用；将主药与52.50 g MCC PH101和7.00 g HPMC K4M混合均匀，过60目筛后倒入快速搅拌机，一边搅拌一边加入221.67 g的Eudragit®NE30D和50 g纯化水制备软材，经挤出机筛板(孔径1.0 mm)挤成直径相等的条状，将条状物置于滚圆机内滚圆制成微丸。取出微丸于60 ℃烘干3 h，筛分得16～24目的目标微丸。称取22.86 g尤特奇®S100和34.29 g L100与100 g水混合，搅匀，缓慢加入95%乙醇789.33 g、枸橼酸三乙酯11.43 g，搅拌过夜，为包衣液A。称取滑石粉11.43 g与97.33 g水混合，用均质机分散10 min，为包衣液B。将包衣液B缓慢加入包衣液A中，搅拌分散60 min，得到均匀的混悬包衣液，备用；将丸芯置于流化床中，调节适当的喷液泵速，控制入风温度、排气量和雾压，进行微丸包衣，待丸芯增质量达到14%时，即可。

3 讨论

本文未建立该制剂有关物质的考察项目，也未进行制剂稳定性试验，下一步尚需对此进行研究完善。

本研究参考了原研制剂专利[9]中的处方信息并经试验筛选，通过调整骨架丸芯、包衣膜材料和厚度，获得了与原研制剂体外释放行为相一致的自制品，有效简化了操作流程，适合国内工业化生产，具有较好的开发前景。此外，原料粒度、辅料型号及用量为影响释放的关键因素，在生产过程中应控制原料粒度。

将美沙拉嗪原料药分别过60目、100目和200目筛后，按“2.3.1”项下方法制备成美沙拉嗪缓释丸芯，按“2.2”项下方法测定累积释放度并绘制释放曲线。结果显示，将原料药过60目筛后制备的样品与原研制剂的溶出行为最相似，并从工艺易操作的角度考虑，选择将原料药过60目筛即可。不同粒径原料药所制美沙拉嗪缓释丸芯的释放曲线见图2。

美沙拉嗪为高载药量药物，辅料所能增加的空间十分有限。本文试验过程中，选择Eudragit®NE30D干聚合物最大用量为19%时，自制制剂的药物累积释放速率始终比原研制剂的快很多，因此需要筛选不同黏度的HPMC以调整药物释放速率。本研究选择的HPMC E5、HPMC K100LV和HPMC K4M的黏度分别为5×10-9、100×10-9、4 000×10-9 Pa·s，发现HPMC黏度越高，制备的软材黏弹性越好，但同时在滚圆时微丸的圆整性变差，影响药物的释放，因此，最终选择黏度高的HPMC K4M作为黏合剂，从圆整性和药物释放度等方面考虑，选择处方量为2%作为HPMC K4M的用量。

Eudragit®NE30D是具渗透性的非离子型丙烯酸乙酯—甲基丙烯酸甲酯聚合物，在水中溶胀但不溶解，是具有不同化学结构和活性基团的pH非依赖型高分子共聚物。在药物湿法制粒工艺设计中，缓释骨架微丸配方中的Eudragit®聚合物水分散体可同时起到缓释骨架和黏合剂的作用[12]，一般不需要再加入其他辅料，其优点在于可以简化处方，有效增加制剂的稳定性和提高药物释放行为的重现性，生产工艺流程短，生产成本低。

3.以爱国主义为核心的民族精神和以改革创新为核心的时代精神是这一核心价值体系的精髓。中华民族优秀传统文化的核心之一就是爱国主义。她已经深深地融入我们这个民族的意识、品格和气质之中，成为56个民族团结一致、共同奋斗的精神支柱和价值取向。勇于探索的果敢精神和富于进取的思想品格也是中华民族优秀传统文化的核心之一。中华民族的爱国主义精神和改革创新的时代精神是马克思主义中国化、时代化、大众化的思想源泉，也是推进中华民族走向伟大复兴的精神动力。

这两个问题是引导学生对文本人物进行评价的两种不同的提问方式，促进学生与文本进行深层次的对话。这些问题涉及学生的批判性思维，学生通过对文本的理解和判断，与文本进行思想交流。

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大到城市的政治、经济、文化等领域，小到乡村旅游景点、建筑风格、美食文化、传说故事，好的文化营销对于城市发展具有重要的作用。“上有天堂下有苏杭”“桂林山水甲天下”等城市标签不仅代表了城市形象，某种程度上也决定了城市发展的方向。

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