石仙桃别名石橄榄、石上莲、石萸肉[1]，为兰科石仙桃属植物Pholidota chinensis Lindl.，以假鳞茎或全草入药[2]。全年可采，鲜用或开水烫后晒干备用。石仙桃生于林中、岩壁或岩石上，在中国、越南、缅甸均有分布，多见于我国云南、贵州、广东、广西等地。石仙桃性味甘淡微寒，归肺、胃、肾经，有养阴清热、润肺止咳之功，用于热病津伤口渴、阴虚燥咳、潮热盗汗，及外用跌打损伤，在我国云南、贵州等地民间使用广泛[3]。石仙桃Pholidota chinensis Lindl.野生资源稀缺难得，药材市场上常出现其混淆品如兰科石仙桃属植细叶石仙桃P. cantonensis Rolfe.[4]云南石仙桃 P. yunnanensis Rolfe.[5]及兰科石豆兰属香石豆兰Bulbophyllum odoratissimum(Swartz)Lindl.[6]等，性状较难辨别，常互为使用，造成石仙桃药材来源混乱的现状。

石仙桃现行质量标准见于2004年版《广东省中药材标准》[1]。该标准收载了石仙桃药材的来源和性状等特征，缺乏针对饮片的质量标准，饮片的理化鉴别、杂质检查、浸出物等项目尚待起草和完善。石仙桃属植物含有9,10-二氢菲类、三萜类及环石仙桃萜醇(cyclopholidonol)、环石仙桃萜酮(cyclopholidone)、虫漆蜡醇等成分[7-8]，而可用于鉴别石仙桃Pholidota chinensis Lindl.的专属性成分未见报道。鉴于现行标准无法全面反映石仙桃药材及饮片内在质量，不能解决石仙桃饮片鉴别等一系列质量问题，本研究拟制定石仙桃饮片的杂质限量和浸出物含量，新增薄层色谱-生物自显影鉴别方法，建立和完善石仙桃饮片的质量标准。

他对中国画是有深研的，但如今看来真正能成就他的却是水彩画，也只有水彩画。许是对中国画有深研的缘由，在他的水彩画里，我们可以感觉到一种“意”的无处不在的弥漫，正是这种不同画种间的自然交融和互换，造就了他的水彩画的特别样式和语态。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Canon550D数码相机[佳能(中国)有限公司)]；2F-20D暗箱式紫外分析仪(上海五久自动化设备有限公司)；AZ2015薄层板加热器(力扬企业有限公司)；PS-30超声波清洗仪(深圳市洁康洗净电器有限公司)。

1.2 试药

硅胶G预制板(青岛海洋化工厂，批号20150708)、硅胶G预制板(烟台化学工业研究所，批号150721)、硅胶G预制板(德国默克有限公司，批号604115)规格均为10 cm×10 cm。自制硅胶G薄层板以薄层层析用硅胶G(青岛洋化工有限公司，批号150513)为吸附剂，以质量浓度0.5%的羧甲基纤维素钠为黏合剂制备而成。各预制板和自制板均于105 ℃活化30 min备用。

2005年，正值湖南省首次公开招录法官和检察官，毕业于湖南省司法学校的李凌参加湖南省双峰县人民检察院的招聘考试，并最终如愿以偿。

推荐理由:《袍哥》以一份尘封七十余年的调查报告为切入点，围绕一桩骇人听闻的袍哥杀女案，剥茧抽丝，揭示了1949年以前川西平原影响最大的秘密社会组织——袍哥的真实面貌，由此反观宏观历史，展示出袍哥生长、壮大的社会经济、文化环境，重建民国基层社会的权力运作模式，还历史以血肉。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

分别取石仙桃药材粗粉0.5 g，加70%(体积分数，下同)甲醇25 mL，超声(频率40 kHz，功率180 W)处理45 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取对照药材，同法提取，作为对照药材溶液。

石仙桃对照药材由广东省药材公司提供，经广东药科大学李书渊教授鉴定为兰科石仙桃属植物石仙桃Pholidota chinensis Lindl.药材。10批石仙桃饮片(批号96115751-1、96115751-2、96115752-1、96115752-2、96115753-1、96115753-2、96115754-1、96115754-2、96115755-1、96115755-2)，由广东省药材公司提供，均采自广东。

然而正如前文所述，遗产型旅游景区赖以发展的核心旅游吸引物均为自然或文化遗产，而这些遗产的本质权属应为全民共有。即，从某种程度而言全体公民（包含低收入群体）均享有遗产型旅游景区的部分所有权，也应享有自主旅游的权益。但遗产型旅游景区的门票涨价行为剥夺了低收入群体应有的旅游权益，却无损于对门票价格不敏感的中高收入群体的旅游权益，从而在旅游机会方面引发社会不公。另外，低收入群体原本可以通过旅游活动缓解紧张生活压力、排解各类积压矛盾，但当下的景区的门票涨价行为却堵塞了他们压力释放的渠道，压力与矛盾的长期集聚有可能演变成为社会矛盾。因而，遗产型旅游景区应确保低收入群体合理旅游权益，构建景区门票定价机制。

依据2015年版《中国药典》四部“通则2302灰分测定法”测定10批石仙桃的总灰分、酸不溶性灰分，并拟定石仙桃饮片总灰分限量不得超过平均值的120%，即7.1%；酸不溶性灰分不得超过平均值的120%，即6.3%限量，结果见表1。

2.2 TLC色谱鉴别及方法学考察

2.2.1 TLC色谱条件的建立 取自制硅胶G薄层板照2015年版《中国药典》附录ⅤB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各10 μL，点于同一硅胶G薄层板上，比较展开体系1[石油醚-乙酸乙酯(体积比3∶2)]、2[环己烷-乙酸乙酯(体积比3∶2)]、3[环己烷-丙酮(体积比3∶2)]3种不同展开剂对石仙桃药材的TLC分离效果，见图1A～C。结果发现：展开体系1展开斑点较多也较清晰，但石油醚为主溶剂存在挥发较快、Rf值较大、边缘效应明显的问题，故此条件不作为首选；展开体系2所得色谱斑点很少且不清晰，故首先排除；而展开体系3所得斑点清晰，Rf值适中，斑点分离度和重现性好，拟选此溶剂系统为石仙桃TLC鉴别的展开剂。经进一步优化溶剂比例，最终确定环己烷-丙酮(体积比7︰5)为石仙桃鉴别的最佳展开条件，结果见图1D。

2.2.2 不同薄层板的比较 比较青岛海洋化工厂(20150708)、烟台化学工业研究所(150721)、德国默克公司(604115)3家的硅胶G预制板。自制的硅胶G薄层板，以青岛洋化工有限公司薄层层析用硅胶G(批号150513)为吸附剂，以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂制备。分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各10 μL，点于同一硅胶G薄层板上。分别按“2.2.1”项下选定的最佳条件展开。结果表明，上述3批次预制板和自制薄层板均能达到鉴别要求，其中默克硅胶G预制薄层板(604115)斑点相对更清晰，色谱效果更佳。

  

1～5.分别是批号为96115751-1、96115752-1、96115753-1、96115754-1、96115755-1的石仙桃饮片；A.石油醚-乙酸乙酯(体积比3∶2)； B.环己烷-乙酸乙酯(体积比3∶2)； C.环己烷-丙酮(体积比3∶2); D.环己烷-丙酮(体积比7∶5)。

 

图1 不同展开系统的石仙桃TLC色谱图

 

Figure 1 The TLC chromatograms of P. chinensis under different developing conditions

2.2.3 不同温度的比较 取点样后的薄层板(n=3)，分别在低温4 ℃和常温25 ℃的温度下展开。结果表明本方法对温度的适应性较好，其中常温25 ℃时斑点相对更清晰，色谱效果更佳。

2.2.4 不同湿度的比较 取点样后的薄层板(n=3)，分别在32%和88%的湿度中展开。结果表明本方法在不同湿度环境下适应性较好，其中高湿环境下斑点相对更清晰，色谱效果更佳。

2.2.5 薄层色谱-DPPH生物自显影鉴别结果 按“2.2.1”项下薄层色谱分离条件，分别精密吸取上述供试品、对照溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(体积比7∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，于365 nm紫外下观察。供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(见图2A)。再喷以DPPH显色溶液，于日光下观察斑点显色情况(见图2B)。对照品色谱图中，在Rf值0.38处呈现淡黄色斑点，为石仙桃抗氧化活性组分，拟定此斑点为石仙桃鉴别的必要成分。供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，呈现相同的淡黄色斑点。

  

A.紫外光下； B.日光下;1～10分别是批号为96115755-2、96115754-2、96115753-2、96115752-2、96115751-2、96115755-1、96115754-1、96115753-1、96115752-1、96115751-1的石仙桃饮片供试品； S.为石仙桃对照药材。

 

图2 石仙桃薄层色谱-生物自显影图谱

 

Figure 2 TLC-bioautography identification of P. chinensis

2.3 水分检查与杂质限量试验

按照2015年版《中国药典》四部“通则2201浸出物测定方法”，比较了乙醇、稀乙醇和水3种溶剂对石仙桃浸出物质量分数的影响，结果见表1。可见，采用3种溶剂石仙桃浸出物的平均值分别为11.8%、15.5%和13.9%，以采用稀乙醇为溶剂时石仙桃浸出物的质量分数最高。故选用稀乙醇为测定石仙桃浸出物的溶剂，拟定石仙桃饮片稀乙醇浸出物质量分数不得少于平均值的80%，即12.4%。

DPPH显色剂溶液：称取DPPH 25 mg，溶于50 mL甲醇中，即得0.5 mg/mL DPPH甲醇溶液，避光冷藏保存。

2.4 浸出物的测定

依据2015年版《中国药典》四部“通则0832水分测定第二法(烘干法)”[9]测定10批次石仙桃药材的水分，10批药材均符合《广东省中药材标准》[1]石仙桃水分项下≤12.0%要求。

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH，CAS:1898-66-4,Phygene公司)。环己烷、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、甲醇均为分析纯，购自天津市致远化学试剂有限公司。

 

表1 10批石仙桃药材中总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的测定结果

 

Table 1 The determination results of total ash,acid insoluble ash and extract of P. chinensis w/%

  

批号总灰分酸不溶性灰分乙醇浸出物稀乙醇浸出物水浸出物96115751⁃15．325．2611．4115．6913．7496115751⁃25．635．2011．8716．6013．5096115752⁃16．225．0912．0817．0613．7696115752⁃26．515．0011．7116．0814．4496115753⁃15．775．2512．0716．7714．1596115753⁃25．485．2712．5616．6214．4596115754⁃16．855．7110．2111．6314．3196115754⁃26．735．5810．7811．7113．6396115755⁃15．204．7312．5416．1313．2796115755⁃25．405．0112．3716．3713．85平均值 5．915．2111．7615．4713．91

3 讨论

石仙桃是广东习用药材，收载于《广东省中药材标准》等地方标准，目前未被《中国药典》收录。广东省“十二五”规划中药材标准研究科研任务[10]的目的是完善提高2004年版《广东省中药材标准》的内容，而本研究是广东省“十二五”规划中药材标准研究科研任务之一，所得实验数据为石仙桃药材及饮片地方标准的完善奠定了研究基础。

石仙桃饮片是单味制剂头痛定糖浆的重要原料[11],建立和完善石仙桃饮片质量标准，对石仙桃饮片及头痛定糖浆的质量控制有重要意义。薄层色谱-生物自显影是一种将薄层色谱分离和生物活性测定相结合的鉴别方法，也是一种快速筛选活性组分的方法。薄层色谱-DPPH生物自显影技术中，薄层板本身显淡紫色，DPPH与具有抗氧化活性的物质结合而呈现白色或淡黄色[12]。本实验结合常规薄层色谱检识方法，建立了石仙桃饮片的生物自显影TLC鉴别方法，将质量评价与抗氧化活性直接相关联，从而更好地控制石仙桃的质量。

浸出物测定是中药质量标准或工艺控制的重要参数，对有效成分不明确又无精确定量指标的生药尤其重要[13]。现行版石仙桃质量标准[1]中，均未规定石仙桃理化鉴别、检查和浸出物测定等项目，本研究补充和完善了石仙桃饮片鉴别、检查和浸出物测定项，提高了其现有的质量标准，为石仙桃饮片及其制剂的质量控制、开发利用提供了参考。

参考文献:

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[2] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第18卷[M].北京:科学出版社,1999:390-400.

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[4] 陈小兵,邓鼎森,黄丽芸.细叶石仙桃化学成分的研究进展[J].中国药物经济学,2014,9(S1):428-429.

[5] 郭晓宇,王乃利,姚新生.云南石仙桃的化学成分[J].沈阳药科大学学报,2006，13(4):205-208.

[6] 易绮斐，邢福武，陈红锋，等.我国石仙桃属植物的分布和开发利用[J].华南农业大学学报，2004,25(3):94-97.

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[8] YAO Sheng，TANG Chunping，LI Xiqiang，et al. Phochinenins A-F，dimeric 9,10-dihydrophenanthrene derivatives from Pholidota chinensis[J].Helv Chim Acta,2008,91(11):2122-2129.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2015年版四部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：103.

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