泮托拉唑钠化学名为5-二氟甲氧基-2-[(3,4-二甲氧基-2-吡啶基)甲基]亚硫酰基-1H-苯并咪唑钠盐，是一种长效质子泵抑制剂，与传统的H2受体阻滞剂比较，具有疗效好、起效快、不良反应少等优点[1]。临床上用于治疗十二指肠溃疡、胃溃疡急性胃黏膜病变、复合性胃溃疡等急性上消化道出血[2]。泮托拉唑钠肠溶片收载于WS1—(X—120)—2003Z注册标准中[3]，采用紫外分光光度法测定含量，对相关杂质的检查采用HPLC法，但准确度与灵敏度不好[4]。2005年版《中国药典》采用HPLC法对泮托拉唑钠原料药进行检测,色谱峰存在峰形不对称、拖尾较严重等缺点,影响杂质检测[5]。2010年版《中国药典》改进了流动相,采用梯度洗脱,应用主成分自身对照法对泮托拉唑钠原料药进行检测[6]。2015年版《中国药典》对泮托拉唑钠的有关物质采用0.01 mol/L K2HPO4溶液(用H3PO4调节pH值至7.0)和乙腈梯度洗脱，耗费时间长[7]。《美国药典》USP40-NF35对泮托拉唑钠缓释片的含量测定，流动相采用磷酸盐缓冲溶液-乙腈(体积比65∶35)，需调节流动相pH至7.9[8]，高pH环境和使用离子对试剂容易对色谱柱造成不可逆吸附，从而降低色谱柱寿命。

目前，泮托拉唑的测定主要有HPLC-UV法[9-13]、HPLC-DAD-MS法[14]、LC-MS法[15]等。本文在《美国药典》USP40泮托拉唑钠肠溶片的含量测定方法的基础上，对流动相进行了调整，并同时对有关物质进行考察，本法不需调节流动相的pH值，简化了操作，且对色谱柱起到一定的保护作用。

1 仪器与试药

Shimadzu HPLC色谱系统(包括LC solution液相色谱数据工作站、SPD-M20A紫外检测器、Shimadzu LC-15C泵)；SIL-10AF自动进样器、CTO-10ASVP柱温箱(日本岛津有限公司)；Phenomenex Luna C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；SB5200D超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司)；Shimadzu十万分之一天平(日本岛津有限公司)；FA1004N电子分析天平(上海精科科学仪器有限公司)；PHS-3D pH 计(上海三信仪表厂)。

泮托拉唑钠对照品(批号：H1M239，质量分数：本品形式为泮托拉唑钠倍半水合物)、泮托拉唑钠有关物质A对照品(批号：H1M230，质量分数99.0%)、泮托拉唑钠有关物质B对照品(批号：H0M242，质量分数100%)均为《美国药典》对照品；泮托拉唑钠有关物质C对照品(中国食品药品检定研究院，批号：510113-201501，质量分数100%)；泮托拉唑钠肠溶片(广东药科大学药物制剂教研室制备，规格：20 mg/片，批号：201611151、201611152、201611153)；泮托拉唑钠原料药(Hetero Drugs Limited，批号：PP2411014)；甲醇、乙腈(色谱纯，美国J. T. Baker公司)；四丁基硫酸氢铵(分析纯，上海阿拉丁生化科技公司)；乙酸铵(分析纯，天津市福晨试剂厂)；其他试剂均为分析纯；水为蒸馏水(屈臣氏集团)。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 流动相的制备 按缓冲盐溶液(3.85 g乙酸铵与1.1 g四丁基硫酸氢铵溶解于1 000 mL水)与甲醇按体积比42.5∶57.5混合，超声(40 kHz，250 W)溶解5 min。

2.1.2 泮托拉唑钠对照品溶液的制备 精密称取泮托拉唑钠对照品10.75 mg置10 mL量瓶中，加乙腈和0.02 mol/L NaOH(体积比1∶1)的混合溶液适量，超声(40 kHz，250 W)5 min使溶解，并用上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度1.005 mg/mL的对照品储备液。精密量取上述对照品储备液适量，用流动相稀释制成质量浓度为0.201 mg/mL的泮托拉唑对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品10片(批号：201611151)，剥去包衣，片芯总质量为0.807 2 g，研细，精密称取0.080 52 g(约相当于泮托拉唑20 mg)，置10 mL量瓶中，加乙腈和0.02 mol/L NaOH(体积比1∶1)的混合溶液适量，超声(40 kHz，250 W)5 min使泮托拉唑钠溶解，并用上述混合溶液稀释至刻度。滤过，精密量取续滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.1.4 有关物质对照品溶液的制备 分别取有关物质A 10.8 mg、有关物质B 9.8 mg、有关物质C 10.0 mg，精密称定，分别置100 mL量瓶中，加乙腈和0.02 mol/L NaOH(体积比1∶1)的混合溶液适量，超声(40 kHz，250 W)5 min使溶解，并用上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为有关物质对照品储备液。分别精密量取上述有关物质对照品储备液适量，用流动相分别稀释制成质量浓度为26.7、24.5、25.0 μg/mL的有关物质A、B、C对照品溶液。另分别精密量取上述有关物质对照品储备液适量，用流动相分别稀释制成质量浓度为5.3、4.9、5.0 μg/mL的有关物质A、B、C对照品溶液。

2.1.5 系统适用性试验溶液 分别取上述泮托拉唑钠和有关物质对照品溶液适量，用流动相稀释制成含泮托拉唑钠8 μg/mL，含有关物质A、B、C约为5 μg/mL的系统适用性试验溶液。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流动相为缓冲盐溶液(3.85 g乙酸铵与1.1 g四丁基硫酸氢铵溶解于1 000 mL水)-甲醇(体积比42.5∶57.5)，柱温：30 ℃，流速：0.7 mL/min，进样量：20 μL，检测波长：290 nm。

尽管我国电梯产量、保有量增长较快，但市场需求仍有较大潜力。例如，大量老旧楼房的建筑改造需要加装电梯，大量公共场所需要加装自动扶梯和自动人行道，全国多个城市建设地铁需要大量电扶梯。随着国家城镇化进程的不断深入，国内电梯行业仍然有较大发展空间。同时，由于国内电梯企业的技术水平和产品质量迅速提高和制造成本相对较低，国内电梯出口竞争力不断增强，2014-2016年电梯出口连续增长，出口总量与增长率情况如图1所示，国际市场的出口前景给我国电梯行业创造了额外的发展空间。因此，未来较长时间内我国仍将是全球最大的电梯市场［4］。

精密吸取“2.1.5”项下的系统适用性试验溶液20 μL，重复进样6次，按上述色谱条件测定并记录色谱图，色谱图见图1。6次测定结果中泮托拉唑钠峰面积的RSD为0.79%，小于2.0%；有关物质A、B、C峰面积的RSD分别为0.70%、2.09%和0.93%，均小于10.0%；泮托拉唑钠和有关物质A、B、C保留时间的RSD分别为0.08%、0.70%、2.09%和0.93%，均小于2.0%；拖尾因子的RSD分别为0.6%、0.3%、1.7%和1.0%，均小于2.0%；有关物质A与泮托拉唑峰的分离度大于3.0，符合《美国药典》USP40-NF35中关于泮托拉唑钠缓释片的系统适用性试验要求，说明方法的系统适用性良好。

  

1.有关物质C； 2.有关物质A； 3.泮托拉唑钠； 4.有关物质B。

 

图1 系统适用性试验的HPLC色谱图Figure 1 HPLC chromatograms of system suitability test

2.3 泮托拉唑质量分数的测定

2.3.1 空白对照试验 精密称取泮托拉唑钠肠溶片的辅料(按处方配比，约相当于泮托拉唑20 mg)，置10 mL量瓶中，按供试品溶液的稀释方法同法操作，作为空白辅料溶液，分别精密吸取空白溶剂、空白辅料溶液、“2.1.3”项下的供试品溶液、泮托拉唑钠对照品溶液各20 μL，按“2.2”项下条件测定，色谱图见图2。结果表明空白溶剂和辅料对样品测定无干扰。

2.3.2 线性关系的考察 精密量取“2.1.2”项下质量浓度1.005 mg/mL的泮托拉唑对照品储备液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL，分别置5 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，分别配制成质量浓度为 80.4、120.6、160.8、201.0、241.2、281.4、321.6 μg/mL的系列对照品溶液。按“2.2”项下色谱条件测定，平行进样3次，以泮托拉唑峰面积(A)为纵坐标，溶液质量浓度(ρ)为横坐标进行线性回归，计算得线性方程为A=3.281 6×104 ρ+1.789 4×105,R=0.999 7(n=7)。结果表明，泮托拉唑在80.4～321.6 μg/mL质量浓度范围内与峰面积线性关系良好。

  

A．对照品溶液； B．供试品溶液； C．空白溶剂；D.空白辅料溶液；1.有关物质C； 2.有关物质A； 3.泮托拉唑； 4.有关物质B； 5.未知杂质。

 

图2 空白对照试验HPLC色谱图Figure 2 HPLC chromatograms of blank control

2.3.3 重复性试验 取同一批泮托拉唑钠肠溶片(批号：201611151)，按“2.1.3”项下供试品溶液的制备方法平行操作6份，按“2.2”项下色谱条件测定。结果6份样品中泮托拉唑的平均质量分数为103.6%，RSD为1.2%，表明方法重复性良好。

2.3.4 精密度试验 精密量取“2.1.2”项下泮托拉唑对照品溶液20 μL，按“2.2”项下色谱条件测定，连续测定6次。结果泮托拉唑峰面积的RSD为0.27%，表明仪器精密度良好。

2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号：201611151)，在0、2、4、6、8、16 h分别进样20 μL，按“2.2”项下方法测定。室温下泮托拉唑峰面积的RSD值为0.4%，表明供试品溶液在室温下16 h内稳定性良好。

2.3.6 定量限与检测限 精密量取泮托拉唑对照品储备液适量，用流动相稀释制成质量浓度为0.8 μg/mL的对照品溶液。在基线平衡时测定高效液相色谱仪基线噪音，将上述0.8 μg/mL对照品溶液稀释420倍，注入高效液相色谱仪，记录色谱图及信号。将此浓度下的对照品溶液测得的信号与基线噪音相比较，信噪比为10∶1时的浓度为定量限，继续稀释，以信噪比为3∶1时的浓度为检测限。结果测得定量限为1.9 ng/mL，检测限为0.6 ng/mL。

2.3.7 回收率试验 取泮托拉唑钠肠溶片(批号：201712211)10片，剥去包衣，片芯总质量为 0.800 2 g，研细，精密称取0.040 00 g(约相当于泮托拉唑10 mg)，共9份，3份为1组，分别置100 mL量瓶中，每组分别加入泮托拉唑钠对照品 6.4、10.7、14.8 mg，加乙腈和0.02 mol/L NaOH(体积比1∶1)的混合溶液，超声5 min使泮托拉唑钠完全溶解，并用上述混合溶液稀释至刻度，制成高、中、低3组质量浓度的回收率试验溶液。称上述片芯细粉0.040 00 g，置100 mL量瓶中，加乙腈和0.02 mol/L NaOH(体积比1∶1)的混合溶液，超声5 min使溶解，用上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为样品本底溶液。按“2.2”项下方法测定，按外标法以峰面积计算，得3组溶液中泮托拉唑钠的回收率分别为101.0%、101.7%、101.9%(n=9)，平均回收率为101.5%，RSD值为0.6%，表明方法准确可靠。

2.4 有关物质的测定

2.4.1 线性关系的考察 分别精密量取“2.1.4”项下的有关物质对照品溶液，按表1配制一系列浓度的对照品溶液。按“2.2”项下色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，溶液质量浓度为横坐标进行线性回归。各有关物质的回归方程及线性范围见表1。

2.4.2 重复性试验 同“2.3.3”项下操作。结果6份供试品溶液中泮托拉唑钠有关物质A、B、C峰面积的RSD值分别为1.2%、1.8%和0.9%，表明本方法重复性良好。

2.4. 稳定性试验 同“2.3.5”项下操作。结果室温下有关物质A、B、C的峰面积RSD值分别为1.7%、3.2%、1.5%，均小于10%，表明供试品溶液在室温下放置16 h稳定性良好。

2.4.4 精密度试验 同“2.3.4”项下操作，取有关物质对照品溶液连续测定6次，结果有关物质A、B、C峰面积的RSD分别为0.3%、1.7%和1.0%，小于2.0%，表明仪器精密度良好。

2.4.5 定量限与检测限 分别取质量浓度为0.05 μg/mL的有关物质对照品溶液，用流动相分别稀释8、4、15倍，按“2.3.6”项下的信噪比法计确定定量限和检测限，结果测得有关物质A、B、C的定量限分别为6.0、13.5、3.0 ng/mL；检测限分别为2.0、4.5、1.0 ng/mL。

2.4.6 回收率试验 取辅料混合粉末适量(按处方配比，约相当于10 mg泮托拉唑时的辅料用量)，精密称定，共9份，3份为一组，分别置50 mL量瓶中，每组分别加入“2.1.4”项下5.3 μg/mL的有关物质A对照品溶液8、10、12 mL，分别加入4.9 μg/mL的有关物质B对照品溶液4.8、6.0、7.2 mL，分别加入5.0 μg/mL的有关物质C对照品溶液3.2、4.0、4.8 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。分别取上述溶液20 μL，按“2.2”项下方法操作，得3组溶液中有关物质A、B、C的平均回收率分别为101.0%、98.4%和100.1%，RSD均小于2%，表明方法准确可靠。

2.4.7 样品中泮托拉唑与有关物质的测定 取泮托拉唑钠肠溶片3批(201611151、201611152、201611153)，按“2.1”项下供试品溶液的制备方法操作，每批平行操作3次，按“2.2”项下方法测定，结果见表2。可见，3批样品中泮托拉唑质量分数均在95.0%～105.0%范围内，样品质量分数符合规定，3批20 mg规格的样品的有关物质检查均合格。

 

表1 有关物质A、B、C的回归方程测定结果Table 1 The regression equation of the related substances of A,B and C

  

有关物质ρ/(μg·mL-1)LOQ12345线性方程线性范围/(μg·mL-1)A0．0060．5340．8011．0681．3361．604A=24583ρ-3732．5，R=0．99900．006～1．604B0．0140．2940．4410．5880．7350．882A=16942ρ+3788．1，R=0．99810．014～0．882C0．0030．2000．3000．4000．5000．600A=41246ρ-4593．6，R=0．99920．003～0．600

注：1、2、3、4、5为各有关物质线性溶液的序号，3号溶液的浓度为USP40规定项下的限量浓度，即线性中间浓度，1和5对应的浓度分别为50%和150%的线性中间浓度，2和4对应的浓度分别为75%和125%的线性中间浓度。

 

表2 3批泮托拉唑钠肠溶片中有关物质检查和泮托拉唑质量分数测定结果

 

Table 2 Determination results of pantoprazole and the related substances in 3 batches of pantoprazole sodium enteric-coated tablets w/%

  

方法批号有关物质A有关物质B有关物质C单一未知杂质总杂质泮托拉唑标示量平均标示量本文方法2016111510．080．020．050．030．18100．08100．22016111520．040．020．060．020．1699．892016111530．050．020．040．030．15100．71USP40方法2016111510．070．010．030．040．19100．61100．52016111520．050．020．040．030．18100．792016111530．040．020．020．030．15100．04

3 讨论

在提倡素质教育的今天，我们不仅仅关心学生每次考试的成绩情况，更加在意学生在学习过程中知识与技能的获得、过程方法的习得以及情感态度价值观的提升。教师通过智学网系统进行组卷、阅卷，进而分析每次考试的情况。智学网系统不仅为教师工作提供极大的便利，大大缩短阅卷时间，提升教师工作效率，同时智学网自带的学业报告与分析也让教师更加明确学生的问题。对学生而言也能最大程度地了解自身不足，从而有针对性地进行改进。

本文用《美国药典》USP40[8]条件测定时，色谱运行时间为40 min，但此色谱条件不够稳定，实验后期有关物质A与泮托拉唑钠峰分离度为0.8，对有关物质A进行定量不准确。若要达到基线分离，必须降低乙腈比例，色谱运行时间会继续增大，造成溶剂浪费且没有实际应用价值。此外，《美国药典》USP40方法测定泮托拉唑钠缓释片时使用的流动相需调节pH至7.9，长久使用会对色谱柱造成不可逆损伤，造成硅胶塌陷或者溶解。本文使用的流动相pH为5.82，色谱柱的pH使用范围为2～9，避免了对色谱柱造成损伤。

本文考察了流动相中甲醇的比例，当甲醇比例为46%和60%时，得到的泮托拉唑钠和各有关物质的保留时间用DryLab软件进行等度模式模拟，结果显示甲醇的最佳比例为57.5%。选择缓冲盐-甲醇(体积比42.5∶57.5)进行验证，泮托拉唑钠和各有关物质均在30 min之前出峰，且分离度最小为3.2，达到基线分离要求。当甲醇比例为57.5%，流速为0.7 mL/min时，柱压达到17.0 MPa，故最终选择流速为0.7 mL/min。若色谱柱条件允许，适当升高流速，可使分析时间缩短，且分离度能达到基线分离要求。

本研究采用高效液相色谱法分离泮托拉唑和有关物质，通过对流动相中有机相比例、流速和pH的筛选优化，确定了最佳流动相体系，并进行了方法学考察，结果表明本方法快速、准确、重复性好，可用于泮托拉唑和有关物质的分离检测。

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5）倍 点 原 则 ，设P1=(x1,y1)∈EP(a,b){O}，且 y1≠0 ，若P3=(x3,y3)=P1+P1，则(x3,y3)=(λ2-2x1,λ(x1-x3)-y1) ， 其 中