口腔扁平苔藓(Oral lichen planus，OLP)在口腔黏膜病中很常见，是一种病因尚不明确的慢性斑纹类疾病，世界卫生组织将口腔扁平苔藓列为是一种癌前状态， 癌变率为0.4%～2.0%[1]。 临床上，口腔扁平苔藓发生长期糜烂溃疡的表现特征，很可能是由癌前状态转变为口腔鳞状细胞癌，但其机制尚不清楚[2]。研究表明[3,4]，MMP-9和VASH1在多种恶性肿瘤疾病中均发挥重要作用，但两者在OLP中的相关性研究较少。 本研究采用免疫组织化学检测 VASH1和 MMP-9在 NOM、OLP和 OSCC中的表达，并探讨二者在OLP的癌变中所起的作用以及OSCC的发病机制。

行文至此，忽然想起另一种“出国人员”：那些被追逃的“红通人员”，那些将贪腐赃款存入外国银行，偷偷将妻儿安置国外的贪官污吏。他们的“出国”目的可不是为了区区几块银元，他们的“初心”极其肮脏而不可见诸天日。对比百年前埋骨异乡的中国劳工，这些人显得何等猥琐，他们带给中国人的又何止是耻辱！

1　材料和方法

1.1　标本来源

选取2013～2016年佳木斯大学附属口腔医院病理科存档的蜡块和口腔颌面外科手术切除的组织，用10%多聚甲醛固定，石蜡包埋。其中，选取OLP为30例，OSCC为45例，以及NOM中15例作为正常对照组。

1.2　主要试剂

兔抗人基质金属蛋白酶9多克隆抗体，兔抗人 VASH1抗体， DAB显色试剂盒、SABC免疫组化染化试剂盒，山羊抗兔 IgG等购于武汉博士德生物有限公司。

当然，换在以前，穿帮的只是公开发表的文稿，而那些数量更多的内部使用或仅用于存档备查的文案，则几乎无人关注，即使偶尔露出马脚，人们也只是一笑了之，后果严重不到哪里去。也正是因为如此，偷懒的人继续偷懒，偷文的人照偷不误，各类奇葩新闻时时曝光，为丰富多彩的生活平添若干生动素材。

1.3　免疫组化染色

（1）完善民营企业制度建设，聘请专家帮助企业建立严格的制度，用制度来管理人，提高企业运营效率。不仅要制定关乎企业发展的宏观制度，而且要制定各部门的规章，让员工的每一项公司行为都有章可循。

将包埋蜡片进行连续3μm连续片切。 切片常规脱蜡至水。室温下将切片置于3%甲醛-过氧化氢中，10min左右，以灭活内源性酶为主。再将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液中，微波加热修复抗原，冷却后PBS冲洗，滴加5%BSA封闭液，37℃下20min。 滴加稀释过的一抗，4℃下过夜。室温下，滴加生物素化山羊抗兔IgG，20min，然后滴加SABC，30min，PBS冲洗。 DAB显色，镜下观察5～30min。苏木素轻度复染，返蓝，最后封片。PBS代替一抗作阴性对照。

1.4　结果判定

采用 SPSS13.0进行统计学分析，样本率采用χ2来检验，以α=0.05作为双侧检验的标准，以P<0.05表示差异有统计学意义。

鼓励教师积极参与教学方法改革，通过教学改革立项，鼓励教师在教学方法和手段上积极探索，大胆创新，突出学生的主体性和主动性，启发学生勤于思考，敢于突破，引导学生用学过的知识分析问题，解决问题。例如“翻转课堂教学”“项目教学”“微课堂”等等，使课堂教学减少“灌输”，增加“互动”，讲好课，讲精彩课。

1.5　统计学方法

MMP-9和 VASH1以背景清晰，以细胞质和(或)细胞膜(部分胞浆)里呈浅黄色至棕黄色颗粒为阳性染色的标准。从每张切片中观察至少5个400倍的视野。判定结果：根据细胞的染色强度计分：细胞未染色为0分，细胞染色淡黄色为1分，细胞染色棕黄色为3分；同时依照阳性细胞百分比评分：没有染色或者染色很浅即阳性细胞率为0记为0分，1%～10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。把两项之和记作总分，0分为阴性(﹣)，总分>1分为阳性：1～4分为弱阳性，记为(+)，5～8分为中度阳性，记为()；>9分为强阳性，记为()。

2　结果

2.1　VASH1在NOM、OLP和OSCC中的表达

VASH1在NOM中只有3例(13.33%)是呈弱阳性表达； VASH1在OLP中有11例(36.67%)阳性表达，棕黄色染色大多集中在细胞的胞质中，其中弱阳性和阳性表达分别是5例和6例；在OSCC中，VASH1的阳性表达主要集中在肿瘤细胞及周围间质细胞，有39例(86.67%)呈阳性表达，经过对比发现，VASH1、OLP组和OSCC组中的阳性表达率均显著高于 NOM组(P<0.05)，OSCC组高于 OLP组(P<0.05)，见表1。

 

表1　不同组织中VASH1的表达

  

组别例数﹣+总阳性例数阳性率(%)χ2值P值NOM1513200213.337.88★0.005OLP30195601136.6720.25 ◆0.000OSCC456914163986.6727.96▲0.000

注：★NOM与OLP比较；◆OLP与OSCC比较；▲NOM与OSCC比较。

2.2　MMP-9在NOM、OLP和OSCC中的表达

口腔扁平苔藓的病因及发病机制都不明确，但现如今，很多研究表明，OLP是一种潜在的恶性病变，虽然癌变率低，但确实有发生癌变的病例，在做活检时，可以同时检测出OLP和OSCC的组织病理学特征[5]。OSCC是在口腔颌面部最常见、有广泛的转移和浸润、预后极差等特征的恶性肿瘤，所以寻找早期分子标志物来检测OLP是否发展为OSCC有很重要的意义。

 

表2　不同组织中MMP-9的表达

  

组别例数﹣+总阳性例数阳性率(%)χ2值P值NOM151410016.6713.00★0.001OLP301141501963.337.004◆0.015OSCC4551019114088.8935.15▲0.000

注：★NOM与OLP比较；◆OLP与OSCC比较；▲NOM与OSCC比较。

  

图1　VASH1在OLP中表达(SABC×400)　　　　图2　VASH1在OSCC中表达(SABC×400)

  

图3　MMP-9在OLP中表达(SABC×400)　　　　图4　MMP-9在OSCC中表达(SABC×400)

3　讨论

MMP-9在NOM里大多呈阴性表达，只有2例(6.67%)弱阳性表达；在OLP中MMP-9大多在细胞的胞膜或胞浆中呈棕黄色染色，有19例(63.33%)呈阳性表达，其中中度阳性和弱阳性表达分别为15例和4例；在OSCC中 MMP-9的表达增强，棕黄色染色大多集中在肿瘤细胞和癌巢，有40例(88.89%)呈阳性表达。经比较发现，MMP-9在 OLP与OSCC中的表达均高于对照组(P<0.05)， 且OSCC组高于OLP组(P<0.05)，见表2。见图1～4。

研究表明，VASH1是由血管生成因子(VEGF)和纤维生长因子2(FGF2)所诱导的可以抑制血管生成的因子，并且是现如今发现的唯一的来源于内皮细胞以负反馈调节机制抑制血管生成的蛋白[6]。肿瘤的形成需要依赖血管的新生，血管又由血管周边的促进因子(如：VEGF)和抑制因子来调节，VASH1具有抑制血管内皮细胞的增殖和阻止形成丰富的微血管网，VASH1对视网膜血管新生、肾脏重塑等方面还可以抑制肿瘤的发展[7]。VASH1在多种炎症反应等病变中均呈现高表达，本研究结果显示VASH1在OLP组和 OSCC组中的表达均高于NOM组(P<0.05)，我们推测 VASH1在OSCC组中的表达增高是由于新生血管的负反馈调节，调节血管生长促进因子，抑制了血管和淋巴管生成而出现高表达，这与文献中报道VASH1在恶性肿瘤及相关癌的表达结论相似[3]。VASH1在NOM组、OLP组和OSCC组中的表达依次增高，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，说明OLP有一定的癌变能力，同时也说明 VASH1与扁平苔藓癌变有关。

MMP-9是基质金属蛋白酶家族(MMPs)的成员之一，MMPs是细胞外基质降解基底膜成分的蛋白酶家族，可以生理性的调节细胞外基质[8]。其中Ⅳ型胶原成分是基底膜中最主要的部分，只有Ⅳ型胶原酶可以特异性的降解Ⅳ型胶原成分，在此基础之上继续毁坏基底膜的连续与完整性。而MMP-9是Ⅳ型胶原酶的主要成分，恶性细胞诱导产生了大量的MMP-9，于是基底膜Ⅳ型胶原降解，恶性细胞突破基底膜完成了浸润[9]。大量研究已证实MMP-9在甲状腺乳头状癌、非小细胞肺癌、乳腺癌等多种癌症的侵袭和转移有关[10-12]，本研究结果显示 MMP-9在OLP组和OSCC组中的表达均显著高于 NOM组(P<0.05)，表明OLP具有一定的癌变潜能，MMP-9在 NOM组、OLP组和OSCC组中的表达依次增高，组间的比较有统计学意义(P<0.05)，表明了恶性细胞在 MMP-9协助下在 OLP和 OSCC中发生了侵袭和转移， 促进了OSCC的发展，MMP-9在OLP癌变的过程中起到重要的作用。

综上所述，针对VASH1和MMP-9的研究大多局限在恶性肿瘤中，而很少在 OLP等癌前病变中报道，口腔黏膜癌变的机制是现在研究的热点，本研究表明 VASH1与 MMP-9在 OLP发展为 OSCC的过程中发挥重要作用，且发生协同作用，但两者在 OLP恶变发生发展中具体的机制仍需做下一步研究，也有望两者可以通过联合检测作为诊断OLP和 OSCC的分子标志物。

参考文献：

[1] 陈谦明. 口腔黏膜病学[M]. 第4版，北京:人民卫生出版社，2010:103-110

[2] Hsue SS，Wang WC，Chen CH，et al. Malignant transformation in 1458 patients with potentially malignant oral mucosa disorders: a follow-up study based in a Taiwanese hospital[J]. J Oral Pathol Med，2007，36(1):25-29

[3] 易华，师永红. VASH1在恶性肿瘤中的研究进展[J]. 内蒙古医学杂志，2016，48(4): 444-446

[4] 刘俊，李灼日，毛先海. Fascin和MMP-9在肝门肝胆癌组织中的表达及临床意义[J]. 世界华人消化杂志，2012，20(9):795

[5] 周红梅，郭宜青，危常磊. 口腔扁平苔藓癌变进展及争议[J]. 中国实用口腔科杂志，2012，5(3): 146-149

[6] Watanabe K，Hasegawa Y，Yamashita H，et al.Vasohibin as an endothelium derived negative feedback regulator of angiogenesis[J].Clin Invest，2004，114: 898-907

[7] 朱江兰，石蓓. VASH对新生血管的调节作用[J].遵义医学院学报，2013，36(3):281-284

[8] 申颖，郭文奇. 基质金属蛋白酶抑制剂的研究[J].内蒙古医学杂志，2007，39(2):263-265

[9] 柳海，李秀.口腔鳞状细胞癌中MMP-9以及CD44v6表达及其意义[J].中国肿瘤，2005，14(11):747-750

[10]李艳萍，庾英兰，关宝生，等.MMP-2、MMP-9、CD147在甲状腺乳头状癌中的表达[J].黑龙江医药科学，2010，33(2):41-42

[11]阎红娥，梁姗姗，鲍文华，等.RECK及MMP-9在非小细胞肺癌中的表达及意义[J]. 黑龙江医药科学，2013，36(2):11-13

[12]汪洪盛，李壮，曹玉杰，等.SRC-3、MMP-9在乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 黑龙江医药科学，2017，40(4):125-128