高盐饮食是一种重要的环境因素，可造成人体血压的异常升高[1，2]，增加肾脏血尿蛋白的排泄量，还可以增加左心室质量，加速血管硬化等。有学者通过形态学观察发现，高盐饮食能够损伤小鼠的颌下腺组织，使其腺体组织的体积、重量较正常对照组明显降低，镜下切片观察到高盐组小鼠颌下腺均有明显的淋巴细胞浸润，腺泡萎缩，导管扩张。水通道蛋白AQP-5mRNA及其蛋白表达降低[3]。因此可以得出结论：高盐饮食的摄入可以导致小鼠唾液腺腺体发生损伤。但是关于高盐饮食与颌下腺紧密连接蛋白表达之间的关系，国内外鲜有报道。因此本实验旨在通过建立高盐大鼠模型，观察颌下腺组织的显微结构以及检测颌下腺组织中紧密连接蛋白的表达变化。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　动物及分组

32只雄性SD大鼠，3月龄，体重180～220g，由哈尔滨医科大学实验动物学部提供，许可证号：SCXK(黑)2013—001。随机分为正常饮食对照组，高盐饮食1周至高盐饮食7周组。每组各4只大鼠，其中2只用于免疫组化检测，2只用于Western blot 检测。

翻译工作坊中的角色设置与分工参照翻译公司中的实际翻译流程。每5名学生为一组，分别设立项目经理、译员、术语提取与归纳人员、校审、PPT制作人员、翻译成果汇报人员等角色。与翻译公司中实际的角色设置不同之处在于：第一、为了使每位学生都了解翻译内容，切实参与到翻译实践与讨论中，每位组员都是译员，都要自己先翻译，在此基础上兼任其他角色。第二、为了避免小组成员“搭便车”的现象出现，让每位组员都熟悉本小组翻译过程中遇到的问题及解决方式，翻译成果汇报人在课堂上随机抽取。小组在项目经理的统筹和领导下，对教师所发材料开展分工与合作安排。

1.1.2　试剂及仪器

3.年轻人要理性消费，不能盲目攀比，我们不得不承认，很多年轻人目前的生活环境极为优越，绝大多数为独生子女，父母都比较宠爱，基本上所有的消费愿望，都能得到满足。但是，这就存在很多年轻人为了面子而盲目攀比的问题，消费不是从自己的实际需要出发，容易造成资源浪费的现象。

1.2　方法

正常组大鼠颌下腺组织的腺泡上皮和导管上皮细胞中有较多occludin阳性细胞，与正常对照组相比，各实验组的occludin的表达位置未见明显变化，但是表达量相对降低。

采用western blot 的方法进行测定。摘取未经灌注的大鼠颌下腺组织进行研磨、收集，加入蛋白裂解液，离心，分离上清为所得的蛋白质抽提物。BCA法进行蛋白质定量，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，将蛋白转至PVDF膜上。转印结束后取出PVDF膜，浸入TBST中，摇床摇动5min。然后严格按照说明书要求进行孵育一抗、孵育二抗、ECL底物发光、抗体剥脱及封闭。将胶片进行扫描，用凝胶图象处理系统(Gel-Pro-Analyzer软件)分析目标条带的光密度值。

化学是高中理科的主要学习内容之一，在应试思维下理论知识的学习成为了全部重点，使得我们学生的化学学习与日常生活间的联系被忽略，难以真正掌握化学实用知识。基于这种情况，我们通过生活化学习方法可拉近理论知识与实际生活间的关系，认识到化学学习的开展并非的为了应对高考，更多的是为我们的生活带来方便。另一方面来看，将生活化模式运用到化学学习中有利于知识的记忆与巩固，以便于我们全面理解化学理论知识，从而提高了学习效率与质量。

采用SPSS19.0统计软件分析处理。组间样本率的比较采用卡方检验。以α=0.05 为检验标准。以P<0.05 为有统计学意义。

1.2.3　颌下腺组织Occludin 蛋白水平检测

高盐饮食饲料及正常饮食饲料均由南通特洛菲饲料科技有限公司提供；电热恒温鼓风干燥箱(精宏实验设备公司)、显微镜(日本Olympus公司)、电泳仪(北京六一公司)、双垂直蛋白电泳仪(北京六一公司)、凝胶成像系统(北京六一公司)、超速冷冻离心机(湖南湘仪公司)、酶标仪(美国Biotek公司)、Occludin (Rb)(Wanleibio公司)、生物素化山羊抗兔IgG(Beyotime公司)、辣根酶标记链酶亲合素( Beyotime公司)、DAB显色液(Solarbio公司)、全蛋白提取试剂盒(Wanleibio公司)、BCA蛋白浓度测定试剂盒(Wanleibio公司)、SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒(Wanleibio公司)、SDS - PAGE电泳液(干粉)(Wanleibio公司)、SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(Wanleibio公司)、ECL发光液(Wanleibio公司)、预染蛋白分子量标准(加拿大 Fermentas公司)、PVDF膜(美国 Millipore公司)、occludin antibody(Wanleibio公司)、羊抗兔IgG-HRP(Wanleibio公司)、内参抗体 β-actin(Wanleibio公司)。

在预定的时间点，用10%水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔注射麻醉大鼠。迅速开胸，充分暴露心脏，从左心室心尖处插入穿刺针，用血管钳固定。快速推注生理盐水，同时剪开右心耳。约注入生理盐水100～150mL，至流出液体颜色较浅，停止灌注。然后继续用10%福尔马林溶液继续灌流约250mL。于颈部颌下区切开，取出颌下腺组织，常规石蜡包埋，以2～3μm厚度连续切片。采用免疫组化SABC法，严格按照说明书要求进行操作，出现黄色或黄褐色为阳性着色。

本文结合现状及行业技术的发展水平，提出了BIM运维管理平台搭建常见的三种方式并总结了各自的优缺点，三种方式为：①基于常规运维软件开发支持BIM功能；②基于BIM软件二次开发；③自主开发。

高盐饮食组大鼠给予含8%Nacl的高盐饲料，正常饮食组大鼠给予含0.6%Nacl饲料，均自由进食进水。

1.3　统计学方法

1.2.2　免疫组化染色

2　结果

2.1　免疫组化染色结果

1.2.1　模型制备

  

图1　正常饮食组大鼠颌下腺组织occludin阳性细胞较多

 

(ABC法，×400)

2.2　各组大鼠颌下腺组织occludin蛋白表达水平的比较

与正常饮食组相比，高盐饮食组occludin表达降低(P<0.05)，高盐饮食1周组与2周组occludin表达量显著降低，高盐饮食到第3周occludin的表达有所升高但仍低于正常水平，高盐饮食第4、5、6、7周组occludin的表达逐渐平稳，但低于正常水平。

  

图2　高盐饮食1周组大鼠颌下腺组织occludin阳性细胞较少

 

(ABC法，×400)

 

表1　正常组与各实验组紧密连接蛋白occludin相对表达量

  

组别 occludin β-actin 比值 相对表达量正常组 3151.2 1455.6 2.16 1.001周组 97.107 1422.4 0.07 0.032周组 220.24 1508.9 0.15 0.073周组 1817.6 1536.2 1.18 0.554周组 1373.6 1479.4 0.93 0.435周组 1206.6 1512.1 0.80 0.376周组 1422.7 1545.2 0.92 0.437周组 1500.8 1655.8 0.91 0.42

  

图3　正常组与各实验组紧密连接蛋白occludin相对表达量柱状图

  

图4　正常组与各实验组紧密连接蛋白occludin电泳图

3　讨论

大量的实验研究结果以及流行病学调查表明，盐是一种重要的环境因素，且普遍认为其在高血压的发生发展中具有非常重要的作用[1,2]。此外，高盐饮食还能损害心、脑、肾等器官。近来通过研究发现，高盐饮食小鼠的颌下腺组织有大量淋巴细胞浸润，腺泡萎缩，导管扩张明显且腺体的体积重量均降低，通过荧光定量pcr方法检测高盐饮食小鼠的颌下腺水通道蛋白AQP-5基因表达降低。经检测发现高盐饮食组小鼠的唾液流率较正常饮食组小鼠显著降低[3]。这说明高盐饮食能对小鼠的颌下腺造成损伤，影响颌下腺组织相关因子的表达，最终导致颌下腺的分泌功能异常，这与本实验的结果是一致的。

多数学者认为唾液的分泌是通过水通道蛋白调节的细胞内途径和经紧密连接蛋白调节的细胞间途径共同介导的，但后者的分泌机理不明[4]。目前对于高盐饮食是否会引起颌下腺紧密连接蛋白的表达也鲜有研究。紧密连接广泛存在于所有上皮细胞间连接的顶端，是物质经过旁细胞途径进行转运的结构基础，具有“栅栏”和“屏障”的功能。以往的研究发现，紧密连接在肾小管的重吸收、呼吸道上皮细胞的分泌以及肠上皮的屏障保护作用中发挥着重要的作用。近年来发现，在涎腺上皮细胞也有紧密连接蛋白的表达。一些促分泌药物和促炎因子可通过调节紧密连接的表达、结构和功能进而调控涎腺的分泌[5]。在紧密连接蛋白中occludin是构成紧密连接的跨膜蛋白之一，是构成紧密连接的重要结构和功能蛋白，也是疾病时物质转运障碍的重要靶点，其表达分布及磷酸化状态涉及旁细胞途经的开放。有报道说明，occludin并不是上皮细胞保持紧密连接结构及功能完整所必需的[6]，但是saitou等人发现occludin可能会影响涎腺的细胞分化，他们在敲除小鼠涎腺occludin蛋白后，观察到小鼠涎腺纹状管细胞浆内的分泌颗粒明显减少[7]。目前对于能够调节紧密连接蛋白功能的物质知道的很少。有实验证实高盐饮食会导致小鼠脑内紧密连接蛋白的显著降低[8]。同样本实验也表明，高盐饮食也会导致颌下腺组织中紧密连接蛋白的表达降低(P<0.05)。通过免疫组化检测发现，紧密连接蛋白occludin见于腺泡上皮和导管上皮细胞顶端，这与以往的研究一致。高盐饮食后的大鼠颌下腺紧密连接蛋白occludin表达降低，且在高盐饮食的初期occludin的反应最为显著，随着高盐饮食时间的加长，occludin的表达会逐渐升高，升高到一定水平后趋于平稳，但仍低于正常水平。这可能是机体的代偿性反应，使机体逐渐的适应高盐饮食状态，但是并不能恢复到正常的水平。这种occludin长期低表达的状态是否会诱发颌下腺的各种疾病还需要进一步研究。可以肯定的是，高盐饮食造成了颌下腺的损伤，使其紧密连接蛋白的表达降低，影响了唾液的正常分泌。

最近的流行病调查显示，现代人死亡的主要原因已经集中到慢性非传染性疾病，像糖尿病、高血压、癌症和心脑血管疾病的发病率在逐年增长[9]。这些疾病主要是由于不良的生活行为造成的，所以称之为生活方式疾病。近年来，高盐饮食的危害逐渐得到了人们的关注，认识到高盐饮食也属于一种不良的生活行为，人们开始普遍倡导清淡饮食。本研究为此提供了理论依据。日常饮食中过量食盐的摄入会成为颌下腺疾病发生发展过程中的一个重要的危险因素，因此适当减少盐的摄入量是预防及控制颌下腺疾病的有效方法。这为临床实践中对于颌下腺疾病患者的管理提供有力的证据。

参考文献：

[1]Zhong JC,Guo D,Chen CB, et al. prevention of angiotensin -mediated renal oxidative stress, inflammation, and fibrosis by angiotensin converting enzymez[J]. Hypertension, 2011,5(7):314-322

[2]金海燕,宋蓓,钟久昌. ACE2基因:高血压防治新的靶点[J]. 中华临床医师杂志(电子版),2011,5(17):5062-5065

[3]吴婷婷. 高盐对小鼠颌下腺组织形态唾液流率的影响[J]. 中华口腔医学会口腔生物医学专业委员会.2014全国口腔生物医学学术年会暨“西湖国际”口腔医学高峰论坛论文汇编[C].中华口腔医学会口腔生物医学专业委员会,2014:1

[4]Melvin JE, Yule D, Shuttle worth T, et al. Regulation of fluid and clectrolgte secretion in salivary gland acinar cells[J]. Annu Rev physical, 2005,67:445-469

[5]丛馨,孟庆娱,吴立玲. 涎腺细胞紧密连接的研究进展[J]. 生理科学进展,2012,43(03):193-197

[6]Schulzke JD, Gitter AH, Mankentz J, et al. Epithelial transport and barrier function in occludin-deficient mice[J]. Biochim Biophys Acta, 2005,1669:34-42

[7]Saitou M, Furuse M, Sasaki H, et al. Complex phenotype of mice lacking occludin, a component of tight junction strands[J]. Mol Biol Cell,2000, 11:4131-4142

[8]常明秀,陈丽霞,陈立杰,等. 脑水肿时紧密连接蛋白occludin及AQP4的表达变化[J]. 现代生物医学进展,2014,14(07):1258-1262

[9]Dayan N, Weili Y. The application of genetic risk score in genetic studies of complex human diseases[J].Yi chuan, 2015,37(12):1204-1210