芬太尼(fentanyl)最早合成于1960年，是人工合成出的阿片类强效麻醉性镇痛药物，其化学名称为1-苯乙基-4-(N-丙酰苯胺)哌啶。其药理作用与吗啡类似，具有与舒芬太尼和阿芬太尼等芬太尼类配体相似的特征与优点，广泛应用于术后镇痛及手术麻醉。芬太尼的镇痛效力约是吗啡的100～180倍，哌替啶的550～1000倍[1]，强阿片类药物如芬太尼、哌替啶、吗啡主要应用于全身麻醉中的诱导及维持、术后镇痛以及中到重度癌性疼痛及慢性疼痛的治疗。芬太尼因其具有时效短(15～30min)、静脉滴注易于控制给药量、药效强、起效迅速、毒副作用低、对循环影响小、术后恢复到正常水平快、安全可靠等众多优点[2～4]，所以近年来越来越被人们所重视。芬太尼是目前麻醉镇痛的主要使用药物。但由于芬太尼的用量在临床中存在较大的个体差异，因而可能导致不同患者对达到治疗目的所需的芬太尼剂量不同，所以为了能够更好的监测患者芬太尼血药浓度使用药剂量更加准确，我们设计采用高效液相色谱法检测人血液中芬太尼浓度，实验结果表明，本法具有灵敏度高，操作简便，测试结果精确等优点，因此本方法适用于药物代谢动力学及血药浓度的检测过程中。

1　仪器及试剂

高效液相色谱仪(LC-15，日本岛津公司)，AUW220D电子分析天平(日本岛津公司)，HC-2518R高速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)。

色谱纯乙腈、色谱纯甲醇(天津凯通化学试剂有限公司生产)，乙酸铵，枸橼酸芬太尼注射液(Fentanil Citrate Injection，FCI，50 μg·mL-1)，枸橼酸舒芬太尼注射液(Sufentanyl Citrate Injection，SCI，50 μg·mL-1)标准品购自中国药品生物制品检定所。其它试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1　标准溶液的制备

(1) 对照品枸橼酸芬太尼：取FCI枸橼酸芬太尼注射液作为对照品溶液(50 μg·mL-1);(2) 内标枸橼酸舒芬太尼：取SCI枸橼酸舒芬太尼注射液作为对照品溶液(50 μg·mL-1)。

于洪：其一，减税降负，特别强调减轻实际负担，并且对以前欠缴的税款不进行集中清缴，给企业吃“定心丸”。其二，在“放管服”深化过程中，明确提出再压缩10%的办税时间，营造高效的政府服务环境。其三，税收文件中有违市场公平竞争的内容一律修改或废止，保护公平竞争的市场环境。

色谱柱:Sinochrom ODS-BP(4.6mm×200mm, 5μm)；流动相：甲醇-乙腈-0.13mol·L-1 %乙酸铵水溶液(45:24:31)，用氨水调节pH值至7.5；流速：1.0mL·min-1；检测波长：215nm；柱温：室温；进样量：40μL。

2.2　血浆样品溶液的处理

取空白血浆1.0mL，按2.2项方法制备样品溶液6份，使含比芬太尼浓度分别为31.25、62.5、125、250、500、1000ng·mL-1，按色谱条件进样，以加入量芬太尼为横坐标(X)，芬太尼峰面积与舒芬太尼峰面积的比值作为纵坐标(Y)进行线性回归，得出线性关系公式及相关系数R2和最低检测限，即Y = 0.0005x-0.0082，R2=0.99966，最低检测线为31.25ng·mL-1。

2.3　色谱条件

首先，提高农村文化消费市场供给，传统农村文化市场，产品相对单一，农村居民文化消费选择较少。因此，需要适当增加农村文化消费市场供应，促使更多的文化产品走入农村。

2.4　线性关系与最低定量限

取10mL试管一支，分别加入患者血浆1mL，内标物枸橼酸舒芬太尼溶液(50μg·mL-1)40μL，50 μL 2 mol·L-1氢氧化钠溶液，振荡摇匀，加入正己烷-无水乙醇(95:5)溶液5mL，漩涡混匀，2800r·min-1离心10min。取上清液4mL，置于另一试管中，50℃氮气吹干，残渣加入100μL甲醇漩涡溶解，取该上清液40μL进样，记录色谱图。同法制备不含药品的空白血浆样品。

  

图1　专属性试验图谱 A：空白血浆；B：加样血浆；C：患者血浆

 

1：芬太尼保留时间：10.28min；2：舒芬太尼保留时间：20.22min

2.5　回收率及精密度

分别配制含芬太尼低、中、高三种浓度(含芬太尼62.5、250、1000 ng·mL-1)的血浆样品室温放置6h，反复冻融3次，-20℃ 冰冻保存20d，见表2。

 

表1　回收率及精密度试验结果

  

对照品加入量/ ng·mL检出量/ ng·mL方法回收率(%)提取回收率(%)RSD(%)日内RSD(%)日间RSD(%)芬太尼62.558.88±8.6394.2070.48±0.0913.2414.6613.58250255.79±14.42102.3277.10±0.022.255.642.631000999.98±14.78100.0075.75±0.011.921.484.47

2.6　血浆样品稳定性试验

取试管18支，各加空白血浆1.0mL，按2.2项方法分别制备含芬太尼低、中、高三种浓度(含芬太尼62.5、250、1000 ng·mL-1)溶液各6份，进样检测，以内标法计算测得量，通过测得量与加入量的比值计算方法回收率，然后再以芬太尼与舒芬太尼峰面积的比值计算日内精密度；同法制备低、中、高浓度对照品溶液，每6份合并在一起，分别于3d内进样6次，以芬太尼和舒芬太尼峰面积比值计算各浓度日间精密度(RSD)；配制经过体积折算后的低、中、高三种浓度的溶液各6份，直接进样测定，以日内精密度相应浓度样品的峰面积与直接测定的的相应浓度峰面积比值计算提取回收率，见表1。

 

表2　稳定性试验结果

  

保存条件 加入浓度/ ng·mL 实测浓度/ ng·mL RSD% RE%室温 62.5 55.55±5.73 10.31 -11.11 250.0 245.36±11.58 4.72 -1.86 1000.0 988.57±9.96 1.01 -1.14冻融3次 62.5 54.58±6.54 11.97 -12.67 250.0 236.97±5.38 2.27 -5.21 1000.0 986.40±12.76 1.29 -1.35冷冻20d 62.5 54.27±6.50 11.97 -13.16 250.0 242.89±4.24 1.74 -2.84 1000.0 986.05±6.69 0.68 -1.40

将按条件储存后芬太尼的测定结果与准确度试验结果进行统计学t检验，含量差异没有显著性，证明在试验条件下样品稳定。

海绵城市理论遵循“生态优先”原则，采用顺应自然、与自然和谐共处的发展模式，在确保城市排水防涝安全的前提下，通过“自然积存”，实现削峰调蓄，控制径流量；通过“自然渗透”来恢复水生态，修复水的自然循环；通过“自然净化”减少水污染，改善水质。海绵城市建设强调在城市开发过程中采用源头削减、过程控制、末端调蓄等方式，通过“渗、滞、蓄、净、用、排”等措施，实现水资源的生态循环。

3　讨论

本方法在选择流动相配比时，曾经参考文献中已有报道，采用乙腈：磷酸盐(0.015 mol·L-1 NaH2PO4, pH = 5)= 40:60作为流动相[4～6]，经过现有仪器试验验证发现此种方法对色谱柱损伤较大，应对色谱条件进行改进。通过不断的试验比对，最后参考《中华人民共和国药典》中对于芬太尼检验的相关部分，将冰醋酸更换为三乙胺，选择甲醇、乙腈、三乙胺作为流动相组成，经过改变流动相组分比例以及pH，发现此流动相组成下样品分离度不理想。最后我们将《中华人民共和国药典》流动相组成中的冰醋酸更换为乙酸铵,经过不断的实验配比,最终确定流动相组成为甲醇:乙腈:0.13mol·L-1 %乙酸铵 = 45:24:31,并用氨水调节pH=7.5。此种方法使芬太尼更好的与内标物分离，并且无杂质峰影响。检测波长时曾参考文献[7～10],对210～225nm波长段进行对比，最终确定检测波长为215nm时峰形良好。此方法图谱基线稳定,峰形良好,芬太尼与内标物舒芬太尼能够很好的分离,保留时间适中,适合于芬太尼血药浓度检测。与液相色谱-质谱联用法相比[11],高效液相色谱法具有成本低,操作简便,仪器普及率高等优点,适合芬太尼血药浓度检测。

参考文献:

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[2]Niemegeers CJ,Schellekens KH,Van Bever WF,et al.Sufentanil,a very potent and Extremely safe intravenous morphine-like compound in mice,rats and dogs[J].ARzneim Forsch,1976,26(8):1551

[3]Kharasch ED, Whittington D, Hoffer C. Influence of hepatic and intestinal cytochrome P4503A activity on the acute disposition and Effects of oralt ransmucosal fentanyl cit rate [J]. Anesthesiology, 2004, 101(3): 729

[4]马金孝, 吕淞, 海客蓉. 高效液相色谱法测定人血浆中芬太尼的浓度测定分析[J]. 宁夏医学杂志，2009, 31(1): 57

[5]李正翔, 赵晴, 董伟林. 高效液相色谱法测定人血浆中芬太尼浓度[J]. 中国医院药学杂志, 2004, 24(10): 607

[6]张虹, 方昱, 李英. 高效液相色谱法测定人血浆中芬太尼浓度[J]. 同济大学学报, 2005, 26(1): 49

[7]伦新强, 梁健成. 高效液相色谱法测定芬太尼的血药浓度[J]. 中国医院用药评价与分析, 2010, 10(9):820

[8]李琪,雷力力,张志国,等. HPLC法测定人血浆中的拉莫三嗪[J]. 黑龙江医药科学,2011,34(6):39-40

[9]曲秀梅,雷力力,方芳,等.柱前衍生化-HPLC检测丙戊酸钠血清浓度方法验证[J]. 黑龙江医药科学,2010,33(5):75-76

[10]张志国,雷力力,田桦. 高效液相色谱法测定怡康灵胶囊中大黄酚含量[J]. 黑龙江医药科学,2006,29(4):18-19

[11]田莹莹, 王医成, 武惠斌,等. HPLC-MS-MS法测定人血浆中芬太尼浓度及其生物等效性研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2012, 17(7): 785