苦蘵 Physalis angulata L.为茄科Solanaceae酸浆属Physalis 植物，又称蘵、蘵草、小苦耽等.苦蘵的宿萼、果实、根及全草均可入药，具有清热、利尿、解毒之功.现代药理学研究表明其具有抗肿瘤、镇痛、抗炎、抗菌、免疫调节等活性[1-4].苦蘵中化学成分主要为甾体类(酸浆苦味素类和withanolide类)、甾醇类、有机酸类、多糖类等化合物.

酸浆苦味素类化合物既是酸浆属植物的特征性化合物也是其主要有效成分之一，酸浆苦味素D(physalin D)即是从苦蘵等酸浆属植物中分离得到的一种酸浆苦味素类化合物，具有抗菌、抗肿瘤、镇痛、抗疟、抗抑郁等多种功效[5-7].

目前苦蘵药材研究多集中在化学成分和药理活性方面，质量标准研究相对较少，而不同产地苦蘵药材的质量差异较大，有效的质量控制将保证其用药的安全性和有效性.因此本文采用高效液相色谱技术，以苦蘵的主要药用部位宿萼为研究载体，建立了苦蘵药材中physalin D的含量测定方法，并对苦蘵其他用药部位中physalin D的含量进行了测定.该方法的建立为苦蘵药材的质量控制提供了一定的参考.

1　材料

Waters 高效液相色谱仪，包括 2695溶剂管理系统，2998 二极管阵列检测器等(美国Waters公司)；BT25s型电子天平(德国赛多利斯公司)；KQ5200DE型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；Milli-Q超纯水仪(美国Millipore公司).

  

图1　酸浆苦味素D的化学结构Fig.1　Structure of physalin D

甲醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；乙腈(色谱纯，Merck 公司)；超纯水(自制)；physalin D由本实验室自制，将其UV、1H-NMR、13C-NMR 和 MS 数据与文献比较确认[8]，纯度经 HPLC-UV(面积归一法) 检测含量大于98%，结构见图1.苦蘵采自不同产地，由杭州师范大学冯尚国老师鉴定.

2　方法和结果

2.1　溶液的制备

2.1.1　对照品溶液的制备　取对照品physalin D适量，精密称定，于容量瓶中，用55%(V/V)乙醇水溶液溶解，配制成每1 mL含physalin D 0.1000 mg的对照品储备液，备用.

2.1.2　供试品溶液的制备　取苦蘵药材粉末1 g(40目筛)，精密称定，置于100 mL具塞三角瓶中，加入55% 乙醇水溶液50 mL，称重，浸泡10 min后，超声40 min，放冷，称重， 55% 乙醇水溶液补足失重，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得.

2.2　色谱条件

Waters Symmetry C18色谱柱(4.6 × 250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(25∶75)；柱温：25 ℃；检测波长：227 nm；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL.理论塔板数按physalin D计算不低于5 000，两个相邻色谱峰的分离度应大于 1.5.结果见图2 .

2.3.4　重复性试验　取同一批样品5份，按“2.1.2供试品溶液制备”方法制备，按“2.2色谱条件”分别测定，测得physalin D平均含量为0.6426 mg·g-1，RSD%值2.6%，表明该方法重复性良好.

  

A．对照品；B. 样品 1. physalin D图2　高效液相色谱图Fig.2　HPLC chromatograms

2.3　方法学考察

2.3.1　线性关系考察　精密吸取“2.1.1”项下对照品储备液适量，分别制成浓度为10，20，40，60，80，100 μg·mL-1的 physalin D对照品溶液.按“2.2色谱条件”分别进样测定.以physalin D的浓度为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，进行线性回归，得回归方程：Y=5.7×106X+1.5×104，r=0.9998.说明physalin D在10～100 μg·mL-1浓度范围内有较好的线性关系.

2.3.2　精密度试验　取“2.3.1”项下浓度为40 μg·mL-1的对照品溶液，连续进样6次，测得physalin D峰面积，其RSD值为1.6 %，表明仪器精密度良好.

分别考察了甲醇-水、乙腈-水体系作为流动相系统对分离的影响，结果发现乙腈-水体系效果优于甲醇-水体系，在该体系下所得色谱峰峰形较好，且能够较好地与其他色谱峰分离，故选择乙腈-水体系作为流动相.

H4：行业协会作用对新疆农产品品牌竞争力有正向影响，即行业协会对农业产业发展的协调、引导作用越显著，新疆农产品区域品牌竞争力越强。

2.3.5　加样回收率试验　取已知含量的样品9份，精密称定，每3份分别按80 %、100 %、120 %精密加入标准品适量，按“2.1.2供试品溶液制备”方法平行制备，按“2.2色谱条件”分别测定,physalin D的平均加样回收率为98.7%，RSD为1.8 %，说明该方法准确性较好.

1.2 环境污染加剧。农业污染的最大特点是隐蔽性强和具有长期性。建国初期我国使用的666等剧毒农药残留在土壤中的化学成分到现在还没有完全分解。化肥农药和含激素生产剂虽然保护了农产品的高产，缩短了农产品的生长期，降低了单位农产品的生产成本，但直接影响农产品的品质，降低了农产品的市场竞争力，并威胁农业安全甚至直接危害人体健康。

2.4 含量测定

按上述条件，测定不同产地苦蘵中physalin D的含量，结果见表1.

参考文献:

3.1.2自由纺锤型主干高70～80厘米，采用定向刻芽技术，在中心干上按相邻25厘米左右的间距，培养10～12个主枝，生长季节对主枝开角至80～90度，对其他枝可采取扭梢、拿枝、缓放等方法进行控制，促进早结果。树高控制在3.5米左右。

 

表1　苦蘵中physalin D的含量测定结果Tab.1　Results of physalin D determination in Physalis angulata L.　 /(mg·g-1)，n=3

  

序号产地用药部位含量1宁海根0.085茎0.673叶0.413果实0.013宿萼1.7172杭州宿萼0.8423南京宿萼1.0304厦门宿萼2.0905温州宿萼0.1746台州宿萼0.276

3　讨论

3.1　含量测定结果分析

以所建立的含量测定方法对不同产地的苦蘵药材中physalin D的含量进行了测定，结果表明：不同产地苦蘵和同一产地的不同用药部位中physalin D的含量差异较大，而苦蘵宿萼中physalin D的含量最高.该方法的建立，对于苦蘵药材尤其是以宿萼为用药部位时的质量控制，具有一定的意义.

3.2　提取方法的选择

在受访者的口述中，“每个人都觉得自己是受害者，而不是参与者”。这不仅因为上文所述的多重困境，更因为他们得到“自由”与他们期待的根本不同。那么，他们想要的自由到底是什么呢？

3.3　流动相的选择

2.3.3　稳定性试验　取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10，12 h进样分析，测得physalin D峰面积，其RSD %值1.1%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好.

研究利用中国社会状况调查(2015)年度数据，剔除缺失值，共提取有效样本9113条，其中男生4159人，女生4954人，平均年龄46.64±3.59岁。

3.4　检测波长的选择

取physalin D对照品溶液，采用DAD检测器，进行全波长扫描，其最大吸收为227 nm，且在该波长下，基线平稳，故选择227 nm波长为检测波长.

所谓“任务驱动”，就是在学习专业技术的过程中，学生在教师的帮助下，紧紧围绕一个共同的任务活动中心，在强烈的问题动机的驱动下，通过对学习资源的积极主动应用，进行自主探索和互动协作的学习，并在完成既定任务的同时，引导学生产生一种学习实践活动。这种教学方法特别适用于学生学习操作类的知识和技能，尤其适于学习工程机械驾驶与维修方面的知识和技能。因此，“任务驱动”教学法在铁道工程机械系统故障排除课程教学中已得到运用，就笔者的教学实践来看，要有效地实施任务驱动教学，应注重以下几个方面。

[1] 方春生, 杨燕军. 酸浆苦素B的体外抗肿瘤活性研究[J]. 广州中医药大学学报, 2015, 32(4):652-665.

分别考察了浸渍法、热回流提取法、超声提取法，并对提取溶剂、提取时间、溶剂用量进行了考察，确定了physalin D的提取方法为固液比1∶50, 55% 乙醇，超声提取40 min.

[2] LIMA M S, EVANGELISTA A F, SANTOS G G, et al. Antinociceptive properties of physalins from Physalis angulata[J]. Journal of Natural Products, 2014, 77(11):2397-2403.

[3] BASTOS G N T, SILVEIRA A J A, SALGADO C G, et al. Physalis angulata extract exerts anti-inflammatory effects in rats by inhibiting different pathways[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2008, 118(2):246-251.

[4] DA S B, RODRIGUES A P, FARIAS L H, et al. Physalis angulata induces in vitro differentiation of murine bone marrow cells into macrophages[J]. BMC Cell Biology, 2014, 15(1):1-11.

[5] JANUARIO A H, FILHO E R, PIETRO R C, et al. Antimycobacterial physalins from Physalis angulata L. (Solanaceae)[J]. Phytother Res,2002,16(5):445-448.

[6] FERREIRA M H I, ROCHA T M, ODORICO M M, et al. In-vitro and in-vivo antitumour activity of physalins B and D from Physalis angulata[J]. J Pharm Pharmacol,2006,58(2):235-241.

[7] SA M S, DE MENEZES M N, KRETTLI A U, et al. Antimalarial activity of physalins B, D, F, and G[J]. J Nat Prod, 2011, 74(10):2269-2272.

[8] 张初航. 锦灯笼的活性成分及质量评价研究[D]. 沈阳：沈阳药科大学, 2009.

在库管理指数计算方面，则利用下列公式进行计算：①碳库指数=土壤有机碳含量/参考农田土壤有机碳含量；②碳库活度=活性有机碳×100/稳态碳；③稳态碳=土壤有机碳-活性有机碳。④碳库活度指数=碳库活度/参考土壤碳库活度；⑤碳库管理指数=碳库指数×碳库活度指数×100。在上述试验数据计算和整理过程中，主要采用SPSS13.0统计分析软件，并利用Excel制作图表。分别进行单因素方差分析，根据Duncan法采用0.05显著水平检验不同耕作措施的影响显著性。

为实现移动设备端和桌面端界面自适应，主要考虑库中已有的控件和需开发的控件。本文主要对需开发的控件进行分析(已有的控件满足要求)。

第17卷第2期2018年3月杭州师范大学学报(自然科学版)JournalofHangzhouNormalUniversity(NaturalScienceEdition)Vol.17No.2Mar.2018