复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指在怀孕早期连续发生≥2次的自然流产，是妊娠早期一种常见的并发症。流行病学调查数据显示，在普通育龄妇女中，RSA的发病率约为1%～3%，近年来呈上升趋势 [1-2]。RSA的发病原因和发病机制尚未完全阐明，普遍认为孕早期(孕12周内)发生的RSA多因母体黄体功能不全、或染色体异常以及免疫因素等引起，而孕中期(孕12～28周)发生的自然流产多由母体全身性疾病、或子宫畸形以及宫颈口松弛等原因引起[3]。由于血管化和血管形成伴随胚胎发育，且血管生长情况对胚胎的植入和胎盘的形成具有重要影响，有研究指出，胚胎血管生长异常可造成胚胎发育停止或胚胎着床失败[4]。关于血管生成因子在胚胎生长发育过程中的作用仍未阐明。本研究通过观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)与及可溶性受体(soluble fms-like tyrosine kinase，sflt-1)在RSA孕妇的表达情况，探讨RSA的发病机制。

1 资料和方法

1.1 临床资料

选取2015年1月～12月在产科门诊就诊的73例RSA孕妇为观察组，24～29岁，平均(26.1±2.9)岁；孕6～10周，平均(7.6±1.1)周。纳入标准：(1)孕10周内，B超诊断与孕周数相符；(2)B超显示胚胎无胎心搏动，血人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)和孕酮水平低于正常参考值；(3)拟进行人工流产者；(4)夫妇双方查外周血染色核型无异常、内分泌功能正常、男方精液检查正常。排除标准：(1)生殖器官解剖结构异常者；(2)高血压、糖尿病、心血管疾病以及自身免疫性疾病者；(3)多囊卵巢综合症、子宫内膜异位症等妇科疾病者；(4)生殖道感染性疾病者。选取同期在计划生育门诊要求人工流产的正常妊娠早期孕妇50例作为对照组，23～29岁，平均(26.5±3.1)岁；孕6～10周，平均(7.3±1.2)周。2组患者的年龄、孕周等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有研究对象均知情同意并签署知情同意书，本研究获得医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 标本 两组入选孕妇于流产手术前采集肘部静脉血3 mL，静置15 min后，2 500 r/min离心15 min，取上层血清于-70 ℃冰箱保存待测；流产术后采集新鲜绒毛组织，生理盐水中漂洗干净，清除血细胞等杂质后，置于4%多聚甲醛固定24～48 h，脱水后制作石蜡切片，厚4 μm。

1.2.2 血清VEGF及sflt-1 血清中的VEGF和sflt-1浓度采用ELISA法检测，试剂盒均购自美国R&D公司，操作按照试剂盒的说明书进行。

1.2.3 绒毛组织VEGF及sflt-1 采用二步法免疫组织化学染色技术检测[5]，VEGF抗体采用鼠抗人单克隆抗体、sflt-1抗体采用兔抗人单克隆抗体，均购自美国Cell Signaling Technology (CST)公司，其余免疫组化试剂购自北京中杉公司。 VEGF表达阳性时，在细胞浆中可观察到黄色或棕黄色信号；sflt-1表达阳性时，在细胞浆中可观察到棕黄色颗粒状信号。每张切片随机选取5个高倍镜视野，采用formwitz半定量积分法进行免疫组织化学染色评分(immunohis-tochemical scores，IHS)[5]，IHS=a×b，其中a为阳性细胞百分比，b为阳性细胞染色强度。阳性细胞≤20%记1分，阳性细胞21%～60%记2分，阳性细胞61%～90%记3分，阳性细胞>90%记4分；阳性细胞染色阴性记0分，淡黄色记1分，黄色记2分，棕黄色记3分。根据IHS得分判断免疫组化染色结果，≤2分为阴性(-)、3～5分为弱阳性(+)、6～8分为中度阳性(++)、≥9分为强阳性(+++)，本研究定义IHS<5分为阴性、≥5分为阳性。

1.3 统计学方法

用SPSS 20.0对数据进行分析处理，计量资料采用均数±标准差表示，组间比较采用t检验；计数资料采用百分率(%)表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

免疫组织化学染色显示，在绒毛膜组织中，VEGF主要在间质细胞和血管内皮细胞的胞质中表达，在滋养细胞中表达较少；而sflt-1主要在滋养细胞的胞质中表达，呈棕黄色颗粒状，在间质细胞中也有少量的表达(图1)。观察组患者绒毛膜组织中VEGF与sflt-1染色深度均明显强于对照组，阳性表达率也显著高于对照组(P<0.05)，见表2。

2 结果

2.1 血清VEGF及sflt-1水平

观察组孕妇血清中的VEGF与sflt-1水平均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

 

表1 两组孕妇血清VEGF及sflt-1表达水平比较Tab.1 Expression level of VEGF and sflt-1 in serum of both groups

  

组别n VEGFsflt-1对照组50 974.9±253.83 647.5±972.7观察组733 159.7±942.614 787.2±5 549.3 t7.95718.649 P0.0000.000

2.2 绒毛膜组织VEGF与sflt-1表达

（6）10000 r/min离心10 min，取上清液550 μL转移至新的1.5 mL离心管中，应避免吸到沉淀。

VEGF是一种特异性的内皮细胞有丝分裂原，对内皮细胞的生长分化具有强烈的促进作用，也可增强血管的通透性，在血管的增生、迁移和浸润中发挥重要的积极作用[6]。VEGF的可溶性受体sflt-1是一种重要的抗血管生成因子，对VEGF起着拮抗作用，从而起到阻碍血管生成的作用，并可影响血管壁的通透性和完整性[7]。近年来有诸多研究显示，在RSA孕妇的外周血中，VEGF和sflt-1含量均显著高于同等妊娠时长的正常妊娠妇女[8-10]。有学者认为这2者与RSA具有密切关系，但其确切的作用机制，目前研究尚未完全阐明。

  

图1 两组孕妇绒毛膜组织中VEGF及sflt-1表达(免疫组化,×400)Fig.1 Expression of VEGF and sflt-1 in villous tissue of both groups

 

表2 两组孕妇绒毛膜组织中VEGF与sflt-1阳性表达(n,%)Tab.2 Expression of VEGF and sflt-1 in villous tissue of both groups

  

指标对照组(n=50)阳性阴性观察组(n=73)阳性阴性χ2PVEGF26(52.0)24(48.0)55(75.3)18(24.7)7.1900.011Sflt-131(62.0)19(38.0)69(94.5)4(5.5)20.6440.000

3 讨论

外国人名汉译选字除过需考虑发音的契合度，还要考虑联想意义是否适当。此种意义的考虑除过上述几个方面外，应该还有很多，可以留待进一步研究。比如美国前任总统Obama的译名“欧巴马”与“奥巴马”的争论，现任总统Trump的译名“川普”与“特朗普”的争论，除过语音方面的优劣比较，在选字的意义联想方面，应该还有文雅与正式的考虑。

血管形成障碍和生长异常导致的胚胎发育异常是自然流产的重要原因之一，已有研究指出，VEGF表达异常在胚胎血管生成障碍中发挥重要作用，进而引发自然流产[11]。Vatin等 [12]通过实验研究证实VEGF信号转导异常与胚胎死亡密切相关，而Vuorela等[13]报道指出RSA孕妇的胚胎滋养细胞中VEGF的免疫活性和蜕膜血管受体的活性均显著低于正常妊娠的妇女，该研究提示VEGF及其受体的表达水平和活性异常导致的绒毛膜组织或胚胎血管形成障碍可能导致RSA的发生。但关于RSA孕妇VEGF的表达水平，目前国内研究报道的结果不一致，我国学者胡瑞华等[14]报道的数据显示RSA孕妇血清VEGF水平降低、sFlt-1水平升高，并认为这可能是导致妊娠早期自然流产的原因之一，李惠卿[15]报道的数据则显示RSA孕妇的血清和绒毛膜组织中的VEGF和sflt-1表达水平均显著高于正常妊娠的妇女，Atalay等[16]研究也指出RSA孕妇的VEGF水平异常升高。本组研究结果发现，观察组孕妇血清VEGF与sflt-1表达水平均显著高于对照组(P<0.05)；观察组孕妇的VEGF与sflt-1染色深度、阳性表达率均显著高于对照组(P<0.05)；与上述后2者报道的数据基本一致，分析VEGF与sflt-1高表达与RSA密切相关的原因，可能为sflt-1蛋白的过度表达与VEGF高度结合抑制了VEGF的促血管生成功能、从而抑制胎盘绒毛血管生成，进而引发流产。

从2016年6月——2017年6月在我院急诊科接受治疗的患者中抽取80例作为研究对象,将其平均分成实验组和对照组,实验组42人,对照组43人。其中,对照组的患者年龄在25岁-37岁,平均年龄为(29.34±3.74)岁,平均不孕不育时间为(64.31±6.34)月,实验组的患者年龄从23岁38岁不等,平均年龄为(30.64±3.64),平均不孕不育时间为(66.31±6.94)月。两组患者一般资料方面均无明显差异,具有可比性。

综述所述，VEGF和sflt-1在血清和绒毛组织中的高表达可能是导致RSA孕妇胚胎发育障碍的重要原因，从而成为引发流产或死胎。

4 参考文献

[1] PANG L,WEI Z,LI O,et al.An increase in vascular endothelial growth factor (VEGF) and VEGF soluble receptor-1 (sFlt-1) are associated with early recurrent spontaneous abortion[J].PloS One, 2013，8(9):e75759.

[2] 杨秀芳.复发性流产病因学研究进展[J].中国妇幼保健, 2015，30(23):4080-4082.

[3] 陈一红,胡继芬.血管内皮生长因子及其可溶性受体表达水平与复发性自然流产相关性研究[J].中国临床药理学杂志, 2015，14(19):1402-1404.

[4] 庞丽红,李敏清,杨冬梅,石凌,臧宁,林伟雄.可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)与不明原因复发性流产的相关性研究[J].中国全科医学, 2011，16(1):58-61.

[5] 韦舟玲,庞丽红,杨冬梅,黎欧阳,石凌.VEGF在早期自然流产患者血清及绒毛组织中的表达及临床意义[J].中国妇幼保健, 2012，6(33):582-584.

[6] WEI Z,PANG L,LI O.Expression and clinical significance of vascular endothelial growth factor in the serum and chorionic villi in patients of early spontaneous abortion[J].Journal of Minimally Invasive Medicine, 2012，6(9):4-7.

[7] 王瑜,贾黎静,黄沙,等.血管内皮生长因子受体1及其可溶性受体亚型在血管新生中的作用[J].中国糖尿病杂志, 2015，7(7):457-460.

[8] 赖火娣,赖丽辉.血管内皮生长因子及可溶性受体与孕期复发性流产的相关性研究[J].临床医学, 2016，7(17):95-96.

[9] 谢晓芳,张静.MIF与VEGF在原因不明早期复发性流产患者血清和蜕膜中的表达及意义[J].医学临床研究, 2013，7(16):36-39.

[10] GU C H，LIANG W J，FU L L，et al．Risk factors of recurrent spontaneousabortion[J].National J Andrology，2013，19(18):758-762．

[11] 武生梅,史淑红,李艳芳,等.异位子宫内膜组织间质细胞培养液中VEGF、sflt-1表达及意义[J].山东医药, 2015，55(6):40-41.

[12] VATIN M,BURGIO G,RENAULT G,et al.Refined mapping of a quantitative trait locus on chromosome 1 responsible for mouse embryonic death[J].Plos One, 2012，7(8):e43356.

[13] VUORELA P,CARPÉN O,TULPPALA M,et al.VEGF,its receptors and the tie receptors in recurrent miscarriage.[J].Molecular Human Reproduction, 2000，6(3):276-282.

[14] 胡瑞华,李伟莉.早期自然流产患者血清VEGF、sFlt-1水平的变化及意义[J].中医药临床杂志, 2012，24(7):625-626.

[15] 李惠卿.VEGF及sflt-1在复发性流产患者中的表达及临床价值研究[J].中国妇幼保健, 2015，9(23):1419-1421.

[16] ATALAY M A,UGURLU N,ZULFIKAROGLU E,et al.Clinical significance of maternal serum vascular endothelial growth factor (VEGF) level in idiopathic recurrent pregnancy loss[J].European review for medical and pharmacological sciences, 2016，20(14):2974.