ABO血型是人类最早发现的一个血型系统，具有重要临床意义的红细胞血型系统，涉及临床安全输血、器官移植和法医鉴定等领域[1]。近年来研究发现ABO血型存在许多亚型，大多数亚型可能存在抗原减弱或正反定型不一致而被检出。目前应用分子生物学技术已鉴定300多个ABO等位基因。它具有多个亚型，对亚型进行正确定型是保证临床输血安全的一个重要前提。本血液中心在临床患者的ABO血型鉴定工作中发现1例罕见的ABO亚型样本。该样本正反定型不符，血型血清学方法很难判别出ABO血型，故对其进行家系调查，分析血型遗传规律，并采用分子生物学方法辅助鉴定。

对象与方法

1 对象 某先证者，女，72岁。先证者丈夫、儿子、2个女儿及其配偶，孙女1人和外孙女2人。

2 试剂与仪器

一是指导油气田勘探开发工作。按照上述各个部分及内容，对本单位所有储量评估单元逐个分析，将分析结果结合本单位勘探开发形势，提出下一步改善储量状况的措施对策；与开发单元的可采储量标定结合起来，并用于新老区开发方案的技术政策优化及实施前后评价分析；还可以用于制定采油厂的开发规划和分年度计划及部署。

2.1 试剂：抗-A、-B血型定型试剂，抗-A1、抗-A+B、抗-H血型定型试剂和人ABO血型反定型红细胞（上海市血液中心生物医药有限责任公司）；DNA提取试剂盒（北京天为时代）；人红细胞ABO血型基因检测试剂盒和人红细胞ABO cisAB与B（A）血型基因分型检测试剂盒（天津秀鹏），Taq酶（上海promega公司）。

3.2 CisAB与B（A）血型基因分型检测：根据电泳图分析，先证者和先证者儿子含有B（A）04基因型。见图2。

诊断：每例患者依靠多项影像学检查以明确诊断，CT表现：平扫时表现为低密度灶；增强扫描早期病灶周边明显强化并向中心部位逐渐填充；延迟扫描瘤体可完全被造影剂填充，瘤体密度多稍高于或等于肝实质。MRI表现：T1WI为边界清晰的稍低信号灶，T2WI为特征性的呈极高信号“灯泡征”。

3 ABO血型血清学检测 ABO正反定型实验及血浆中ABH物质检测按照文献[2]进行操作。

1 ABO正反定型结果 先证者家系正反定型结果见表1。其中先证者和先证者儿子 ABO正反定型结果不符，其余样本均为B型。

5 ABO血型基因检测和cisAB与B（A）血型基因分型采用人红细胞ABO血型基因检测试剂盒和人类ABO血型基因cisAB与B（A）检测试剂盒（天津秀鹏），严格按照试剂盒说明书操作，产物经2.5%琼脂糖凝胺电泳，以150 V电泳15 min，凝胶紫外成像。

结 果

4 标本DNA提取 采用TIANamp Blood DNA Kit试剂盒提取（北京天为时代公司），严格按照说明书操作，DNA浓度调为50 ng/μl，DNA纯度A260/A280比率在1.6～1.9，并用0.8%琼脂糖凝胶电泳显示无DNA降解现象。

3 先证者ABO分子生物学结果

2 样本1与样本3血浆中ABH物质的检测 血浆中均含有A、B和H血型物质。

3.3 先证者ABO基因型：根据ABO基因分型结果得出先证者应为B（A）04/O1型，先证者儿子应为B（A）04/B型。

研究会对比高端智库的要求还存在较大差距，把研究会建设成高端智库任重道远，一方面，要坚持开放、协同、集成发展，坚持“小核心、大网络”，团结和联合社会力量和各方面专家学者，“不为所有，但为所用”，坚持面向社会经济领域复杂系统工程，坚持“集大成 创智慧”，发挥好窗口和平台作用；另一方面，对标高端智库标准，加快深化改革，加强创新能力建设，持续苦练内功，发挥系统工程研究优势，多出高水平精品成果，不断扩大影响力，成为知名的高端智库。

2.2 仪器：PE-9700扩增仪（美国ABI公司），UVPGDS-8000凝胶成像系统（美国UVP公司），D Y Y-6B型稳压电泳仪（北京六一仪器厂），KUBOTA KA-2200细胞洗涤离心机（日本久保田），DK-600S三用恒温水浴箱（上海精宏实验设备有限公司）。

3.1 ABO血型基因检测试剂盒Ⅰ检测：先证者ABO基因型结果见图1。根据O1/非O1结果，样本1的一条染色体上有O1基因，另一条染色体上有非O1基因。根据B/非B结果，其中一条染色体上有B基因，另一条染色体上有非B基因。按照常规ABO三复等位基因理论，样本1的基因型应为B/O1杂合，但是与血清学结果不符。先证者儿子的基因型为B/B纯合，也与血清学结果不符。

由表3可以看出，萃钯余液采用原有萃取法分离工艺，中和后液中铂浓度0.444g/L，萃铂余液铂浓度0.006g/L，而采用氯化铵沉淀法对萃钯余液中铂进行沉淀后，沉铂后液中铂为0.007g/L，高于原工艺铂的收率。

4 家系调查 先证者家系的血型基因分型结果见图2。

 

表1 ABO正反血型鉴定结果

  

抗A抗A1抗B抗A+B抗HA细胞B细胞O细胞 自身先证者2+04+4+4+4+4+00BO1先证者丈夫004+4+2+4+000BO1先证者儿子1+04+4+3+2+000BB先证者孙女004+4+2+4+000BO2先证者大女婿004+4+2+4+000BB先证者大女儿004+4+2+4+000BO1先证者外孙女004+4+2+4+000BB先证者小女婿004+4+2+4+000BO1先证者小女儿004+4+2+4+000BO2先证者外孙子004+4+2+4+000BO2样本编号ABO正定型ABO反定型ABO基因分型

  

图1 先证者ABO分子生物学结果

  

图2 先证者家系调查血型结果

讨 论

本实验的ABO血型基因分型结果表明先证者DNA中有O2基因和B基因，如按照常规理论，可排除A1基因的存在，但与血清学结果不符，考虑到先证者存在B基因、O2基因，血清学检测有A抗原，采用cisAB与B（A）血型基因分型试剂盒检测，存在B（A）04基因，这就能解释ABO基因分型与血清学结果的矛盾。先证者儿子由于从先证者遗传到B（A）04基因，所以基因型应为B（A）04/B型，先证者儿子的血清学结果就能得到合理解释。

B（A）血型是较罕见的ABO血型，人群中发生频率非常低。目前血型抗原基因突变数据库[3]检索发现B（A）等位基因6种，中国大陆发现的有B（A）02、B（A）04、 B（A）05、B（A）06等位基因[3]。B（A）表现型是一种独特的ABO表型，表现在同一等位基因的编码产物兼具A和B特异的糖基转移酶活性。B（A）血清学特征随着个体的不同、家系的不同而有所差异。目前B（A）血型经临床血清学检测方法难以正确定型，易与AxB或CisAB亚型相混淆，增加安全输血的风险[4]。本文通过血清学方法和基因分型方法相合，鉴定先证者为B（A）04血型。

在临床输血治疗实践中，除正常ABO血型外，有时会遇到ABO正反定型结果不一致的情况，造成这种正反定型不符的原因之一是ABO血型亚型。ABO亚型给临床血型鉴定和配血工作带来了困难[5，6]。由于血清学方法的局限性，许多变异型在血清学分型时可能被误判。有文献报道，对194份被证明A或B抗原或A+B抗原均有弱或不正常表达的样品进行检测，有60份供者样品为cisAB血型[6]。ABO血型正反定型不符的样本，需要深入研究。现在有了分子生物学方法的支持，疑难血型鉴定会更加准确，在红细胞血型领域有可能发现更多新的基因变异型。

常江的这次倾诉，取得了母亲的信任。李峤汝从常江后来的信里判断，母亲可能也讲了自己的经历。这明显是一次交换，信任的交换。

参 考 文 献

1 戚新，章旭，刘显智.一例ABO血型cisAB06亚型的基因序列分析[J].中华医学遗传学杂志，2013，30（2）172-175.

2 叶应妩，王毓三，申子瑜，主编.全国临床检验操作规程[M]. 南京：东南大学出版社，2015：118-124.

3 Patnaik S K，Helmberg W，Blumenfeld O O. NCBI dbRBC database of allelic variations of genes encoding antigens of blood group systems[J]. Nucleic Acids Res，2012，40：1023-1029.

4 李丽春，章旭，李剑平.罕见B（A）血型的鉴定及临床安全输血的研究[J].中国输血杂志，2016，29（7）：689-692.

5 许先国，刘瑛，洪小珍，等.中国人罕见的cisAB变异型分子机制分析[J].遗传，2008，30（10）：1295-1300.

6 章旭，张坤莲，李剑平. cisAB03血型鉴定及家系分析[J].中国输血杂志，2011，4（3）：230-232.

7 Cho D，Kim S H，Jeon K L，et al．The serological and genetic basis of the cis-AB blood group in Korea[J].Vox Sang，2004，87（1）：41-43.