胃癌病死率占我国恶性肿瘤的第2位，且呈逐年上升趋势，侵袭和转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)是炎症的重要组成成分之一，高水平TAMs浸润的肿瘤预后差已在许多肿瘤中被证实。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)即肿瘤细胞丢失上皮表型而获得间质表型，从而使癌细胞获得更强的侵袭和转移能力。其中上皮细胞如E-cadheirn表达的减弱或丢失和间质细胞如vimentin表达的获得，被认为是发生EMT的标志[1]。转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGFβ1)是TGF家族重要成员之一，在肿瘤的侵袭、转移中起重要促进作用[2]。有研究表明TGFβ1是EMT重要的诱发者，但胃癌中TAMs与EMT的相关性及相互作用机制尚不明确。本文采用免疫组化法检测胃癌中TAMs、TGFβ1和EMT相关标志物E-cadherin和vimenitn的表达，并初步探讨其相关性及临床意义。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集邢台市人民医院病理科2014～2016年病理诊断为胃癌的手术切除石蜡标本90例。其中男性68例，女性22例；年龄34～80岁，中位年龄59岁；肿瘤直径<5 cm者48例，肿瘤直径≥5 cm者42例；按1965年Lauren分型：肠型54例，弥漫型36例；WHO(2010)胃癌分级标准：高+中分化者51例，低+未分化者39例；临床Ⅰ+Ⅱ期者36例，Ⅲ+Ⅳ期者54例；肿瘤浸润达浆膜者70例，未达浆膜者20例；有淋巴结转移者56例，无淋巴结转移者34例；有脉管癌栓者14例，无脉管癌栓者76例。同时收集20例相应的癌旁正常胃黏膜组织(距肿瘤切缘>5 cm)作为对照组。患者术前均未行任何放、化疗及其他辅助治疗。

1.2 方法 所有组织标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，应用免疫组化EliVision法染色。一抗为即用型鼠抗人单克隆抗体CD68标记巨噬细胞，即用型兔抗人多克隆抗体TGFβ1，即用型鼠抗人单克隆抗体E-cadherin和即用型鼠抗人单克隆抗体vimenitn均购自北京中杉金桥公司。免疫组化操作步骤严格按试剂盒说明书进行。以PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。

1.3 结果判定 所有指标的结果均由两位病理主治医师经双盲法判定。TAMs计数标准：低倍镜下(×40)观察切片，选择TAMs分布最高密度区即“热点”，然后在高倍镜下(×400，每个视野面积为0.785 mm2)计数5个视野的TAMs数，取其平均值为该例的TAMs值，计算90例总平均值，每例大于总平均值为高表达，低于总平均值为低表达。

每例切片选择5个高倍视野(×40)，TGFβ1染色以胞质中出现背景清晰的棕色或棕黄色颗粒为阳性，E-cadherin和vimentin阳性染色定位分别为细胞膜和细胞质，按细胞染色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。按细胞阳性率计分：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～75%为2分，>75%为3分。两项得分之和<6分为低表达，≥6分为高表达。

审计是一项专业性很强的工作，从业人员要求有良好的职业素养和胜任的专业能力。中国注册会计师协会规定通过注册会计师考试的人员必须在会计师事务所实习两年，才能拿到注册会计师执业资格证书，可见审计专业的实践对专业能力和专业素养培养的重要性。通过审计模拟实训不但可以训练学生专业技能，提高学生的专业判断能力，而且通过实践培养学生的职业道德，提高学生的专业素养。

明确4%氟嘧啶草醚+2.5%五氟磺草胺可分散油悬浮剂100毫升/亩对水稻稗草和野慈姑的田间防治效果及适宜应用的药剂量，评价该药剂对水稻的安全性。

2 结果

2.1 TAMs、TGFβ1、EMT标志物在正常胃黏膜和胃癌中的表达 胃癌组织中，CD68标记的TAMs的高表达率(63.3%，57/90)高于正常胃黏膜组织(30%，6/20)，差异有统计学意义(χ2=7.43, P=0.006，图1)；TGFβ1的阳性率(62.2%，56/90)高于正常胃黏膜组织(35%，7/20)，差异有统计学意义(χ2=4.955, P=0.026，图2)； E-cadherin的阳性率(50%，45/90)低于正常胃黏膜组织(100%，20/20)，差异有统计学意义(χ2=16.923，P<0.001，图3)；vimentin的阳性率(60%，54/90)高于正常胃黏膜组织(5%，1/20)，差异有统计学意义(χ2=19.800，P<0.001，图4)。

2.3 胃癌组织中TAMs、TGFβ1表达与EMT标志物的相关性 在胃癌组织中，TAMs、TGFβ1的表达均与E-cadherin的表达呈显著负相关(rs=-0.530，rs=-0.700，P均<0.001)；与vimentin的表达呈正相关(rs=0.508，rs=0.720，P均<0.001，表2)。

 

图1 低分化胃癌组织中CD68高表达，EliVision法 图2 低分化胃癌组织中TGFβ1高表达，EliVision法 图3 低分化胃癌组织中E-cadherin低表达，EliVision法 图4 低分化胃癌组织中vimentin高表达，EliVision法

2.2 TAMs、TGFβ1和EMT标志物的表达与胃癌各临床病理特征的关系 TAMs和TGFβ1蛋白的表达均与胃癌的Lauren分型、分化程度、临床分期及淋巴结转移相关(P均<0.05)；与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小、有无脉管癌栓无关(P均>0.05)。即随着胃癌浸润深度的加深、临床分期的进展、分化程度越低、有淋巴结转移时，TAMs和TGFβ1蛋白的表达逐渐增加，弥漫型比肠型胃癌TAMs和TGFβ1蛋白的表达增加。E-cadherin(早期高于晚期)和vimentin在胃癌组织中与胃癌分化程度、浸润深度、临床分期和淋巴结转移相关(P均<0.05)；与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小、Lauren分型、有无脉管癌栓无关(P均>0.05)。即当胃癌浸润深度达浆膜、分化程度为低～未分化、临床分期Ⅲ+Ⅳ期及淋巴结转移时，vimentin表达增加而E-cadherin表达减少(表1)。

TAMs已被证实在口腔鳞癌、肝癌、胆管癌、肺癌、乳腺癌及胃癌等肿瘤EMT中起重要促进作用[5,9-12]。本组亦发现随着TAMs浸润增多，E-cadherin表达逐渐减弱甚至缺失，而vimentin表达逐渐增多，提示TAMs参与胃癌的EMT过程。目前，TAMs促进EMT发生的分子机制尚不明确。有研究认为TGFβ1信号通路是TAMs促进肿瘤EMT重要启动者[9-10]。本组结果亦显示，TGFβ1在分化程度低、侵犯浆膜、临床分期高、有淋巴结转移的胃癌中显著增多(P均<0.05)，TGFβ1的表达与TAMs的表达呈显著正相关(rs=0.453，P<0.001)，提示高表达TAMs和TGFβ1的胃癌侵袭性更强、预后更差，TAMs调节EMT可能通过TGFβ1途径。与Yan等[11]在胃癌中的研究结果一致。

2.装置中导管处空气对实验会造成影响，为了追求实验的准确性，需事先将导管处装满水，但显然操作起来麻烦。

2.4 胃癌组织中TAMs与TGFβ1之间的相关性 在胃癌组织中，TAMs与TGFβ1的表达呈显著正相关(rs=0.453，P<0.001，表3)。

肿瘤微环境在肿瘤发生、发展和转移中的作用已被普遍认可，炎症也已被列为癌症的第七大特征[3]。TAMs作为炎症细胞的重要组成成分之一，在肿瘤的生长、血管生成、侵袭和转移中起重要作用，并与患者预后呈负相关[4-5]。Lin等[6]在研究胃癌中发现TAMs浸润促进胃癌的进展，生存率降低，可以作为评价胃癌预后的指标，与本组结果相似。本实验发现当胃癌为弥漫型、分化程度越低、浸润深度达浆膜、有淋巴结转移及临床分期越晚时，TAMs显著增多(P均<0.05)，提示TAMs促进胃癌演进与预后不良相关。

3 讨论

恒山景区要加强生态工程建设，提高森林覆盖率和景区绿化覆盖率。通过生态保护林来美化环境、涵养水源、保持生物多样性。同时加强生态环境保护。立足林业生态建设，着力抓好森林资源管护。另外要大力发展生态旅游。抓好旅游规划的实施，加快推进旅游资源整合，全力打造“花泉林歌，悠然恒山”旅游品牌。严厉打击景区周围的乱采乱挖的行为，严格规范开采的流程和相关评判标准，真正做到资源保护。提高景区群众和游客的环保意识。政府首先要起到主导作用，对民众进行素质教育，为保护当地的生态环境和拥有新鲜的空气，带动县城经济发展等多方面来告诉保护生态的重要性，其次民众也要相互监督积极参与。

1.2.4 术后常规检查 术后进行UCVA、屈光度数、非接触眼压和眼前节，术后3个月用Pentacam三维眼前节分析仪测量角膜光密度。

 

表1 TAMs、TGFβ1、E-cadherin及vimentin的表达与胃癌临床病理特征的关系

  

临床病理参数nTAMs高表达低表达P值TGFβ1高表达低表达P值E⁃cadherin高表达低表达P值vimentin高表达低表达P值年龄(岁) <502212101579131012 ≥506845230．32541270．50736320．32744240．109性别 男684127383031373929 女221660．29310120．3941480．1411570．367肿瘤直径(cm) <5482919262222263216 ≥54228140．53930120．09223190．39822200．168Lauren分型 肠型542826262819352430 弥漫型362970．006306<0．00126100．001306<0．001分化程度 高+中512031232840112427 低+未分化39372<0．001336<0．001534<0．0013090．004临床分期 Ⅰ+Ⅱ36162030624121620 Ⅲ+Ⅳ5441130．00226280．00121330．0138160．014浸润深度 达浆膜705020502030404822 未达浆膜207130．0036140．0011550．0116140．002淋巴结转移 有564313401621354313 无3414200．00116180．02124100．0021123<0．001脉管癌栓 有1411310486104 无7646300．1946300．43937390．56144320．342

 

表2 TAMs和TGFβ1与EMT相关蛋白在胃癌组织中表达的相关性

  

分组TAMs高表达低表达rs值P值TGFβ1高表达低表达rs值P值E⁃cadherin 高表达1728829 低表达405-0．530 <0．001485-0．700 <0．001vimentin 高表达459495 低表达12240．508 <0．0017290．720 <0．001

 

表3 TAMs与TGFβ1在胃癌组织中表达的相关性

  

TGFβ1TAMs高表达低表达rs值P值阳性45110．453<0．001阴性1222

EMT是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程，上皮细胞如E-cadherin膜表达的缺失可使上皮细胞之间的黏附性降低，间质细胞如vimentin表达的获得使细胞运动和迁移能力增强。研究表明EMT通过促进肿瘤侵袭、抵抗细胞凋亡、抵抗化疗和免疫治疗、免疫监测、免疫抑制，并使瘤细胞获得干细胞特性，从而促进肿瘤演进和转移[7]。本组采用免疫组化法检测E-cadherin和vimentin的表达，结果发现在大部分胃癌组织中存在E-cadherin表达减弱甚至缺失，同时vimentin表达增加，这些病例具有更高的临床分期、分化程度低且出现淋巴结转移(P均<0.05)，提示在胃癌中发生EMT促进了肿瘤侵袭和转移，与Zhang等[8]在胃癌中的研究结果相似。

而另一部分人，甚至从来没有看过原著，只愿意观看影视作品。毕竟画面带来的视觉冲击更强烈，人物也会更加直接生动。而阅读小说所需的“脑补”环节，直接让剧组代劳了，省心省力又赏心悦目。

TAMs还可通过其他信号通路促进EMT，Lee等[12]的研究结果证实TAMs促进口腔癌 EMT是通过活化Gas6/Axl-NFκB17信号通路。Zhang等[13]在乳腺癌中发现TAMs分泌的CCL18通过活化PI3K/Akt/GSK3β/Snail信号通路促进癌细胞EMT。Liu等[14]在胰腺癌中发现TAMs通过TLR4/IL-10信号通路促进癌细胞EMT。由此可见，TAMs促进肿瘤EMT是个复杂的过程，具体机制仍需更多的研究证实。

综上所述，本实验结果表明TAMs参与胃癌的EMT过程，促进胃癌的发生、发展及侵袭转移，TGFβ1信号通路可能参与调节该过程，阻断TGFβ1信号通路可能是治疗胃癌的重要方法。

[2] Bellomo C, Caja L, Moustakas A. Transforming growth factor β as regulator of cancer stemness and metastasis[J]. Br J Cancer, 2016,115(7):761-769.

1.4 统计学分析 应用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计数资料采用χ2检验。TAMs与TGFβ1的相关性采用Spearman等级相关性分析，TAMs、TGFβ1与E-cadherin、vimentin的相关性分析采用Mann-Whitney U检验。P<0.05为差异有统计学意义。

回到郑州天已经晚了，草草吃过饭，苏楠就上网搜文城发大水的信息。因为大水发生在1975年8月，媒体简称为“河南‘758’特大洪水”。维基百科的概述让苏楠震惊不已。

[1] 王卫杰, 周家华, 张 丽. 胃癌中上皮-间质转化路径及相关因子的研究进展[J]. 临床与实验病理学杂志, 2014,30(2):193-196.

参考文献：

周淑蘋女士为前任中西女塾皇后。民国十六年间毕业。各报争刊其玉影。……是晚女士之装束华丽冠全场。粉红色的衣缀以一大红花。衣外复披白狐黑大衣，色彩与式样可称时髦已极。女士之头上浩浩乎平滑无疆，是又不得不归功于司丹康矣。闻今日为其出闺佳期。记者深愿女士能始终得条件之保障。而享受携手白头之乐也。……闻夏璐敏女士为沪大西剧社社员，因家庭反对男女合演，故未加入云。 ”[12]5（图 8、图 9）《新闻报》1929年 3月6日刊载《值得登广告》，详细记载了该剧的本事：

[3] Colotta F, Allavena P, Sica A, et al. Cancer-related inflammation, the seventh hallmark of cancer: links to genetic instability[J]. Carcinogenesis, 2009,30(7):1073-1081.

[4] Gwak J M, Jang M H, Kim D I, et al. Prognostic value of tumor-associated macrophages according to histologic locations and hormone receptor status in breast cancer[J]. PLoS One, 2015,10(4):e0125728.

[5] Hu Y, He M Y, Zhu L F, et al. Tumor-associated macrophages correlate with the clinicopathological features and poor outcomes via inducing epithelial to mesenchymal transition in oral squamous cell carcinoma[J]. J Exp Clin Cancer Res, 2016,35(1):12.

[6] Lin C N, Wang C J, Chao Y J, et al. The significance of the co-existence of osteopontin and tumor-associated macrophages in gastric cancer progression[J]. BMC Cancer, 2015,15:128.

[7] Thiery J P, Acloque H, Huang R Y, et al. Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease[J]. Cell, 2009,139(5):871-890.

[8] Zhang J, Yan Y, Yang Y, et al. High infiltration of tumor-associated macrophages influences poor prognosis in human gastric cancer patients, associates with the phenomenon of EMT[J]. Medicine (Baltimore), 2016,95(6):e2636.

[9] Fan Q M, Jing Y Y, Yu G F, et al. Tumor-associated macrophages promote cancer stem cell-like properties via transforming growth factor-beta1-induced epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Lett, 2014,352(2):160-168.

[10] Bonde A K, Tischler V, Kumar S, et al. Intratumoral macrophages contribute to epithelial-mesenchymal transition in solid tumors[J]. BMC Cancer, 2012,24(12):35.

旱情信息服务实现旱情监测成果发布、成果查询、用户管理的功能。将旱情监测成果发布到指定目录下；成果查询支持按监测日期查询历史监测成果；用户管理支持对系统用户的管理，包括添加、删除和修改功能。

[11] Yan Y, Zhang J, Li J H, et al. High tumor-associated macrophages infiltration is associated with poor prognosis and may contribute to the phenomenon of epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer[J]. Onco Targets Ther, 2016,9:3975-3983.

[12] Lee C H, Liu S Y, Chou K C, et al. Tumor-associated macrophages promote oral cancer progression through activation of the Axl signaling pathway[J]. Ann Surg Oncol, 2014,21(3):1031-1037.

[13] Zhang B, Yin C, Li H, et al. Nir1 promotes invasion of breast cancer cells by binding to chemokine (C-C motif) ligand 18 through the PI3K/Akt/GSK3β/Snail signaling pathway[J]. Eur J Cancer, 2013,49(18):3900-3913.

[14] Liu C Y, Xu J Y, Shi X Y, et al. M2-polarized tumor-associated macrophages promoted epithelial-mesenchymal transition in pancreatic cancer cells, partially through TLR4/IL-10 signaling pathway[J]. Lab Invest, 2013,93(7):844-854.