结肠癌是消化系统最为常见的恶性肿瘤之一，由于恶性肿瘤的侵袭及转移，很多患者就诊时已失去治疗机会。AGR2最早由Kuang等[1]在雌激素受体表达的人乳腺癌细胞株中通过差异化筛选发现，众多证据表明AGR2在多种人类肿瘤中超量表达与肿瘤的发生和转移密切相关[2-5]，其是结肠癌循环肿瘤细胞的标志物[6]。S100A4为S100钙离子结合蛋白超家族的成员，已证实与多种恶性肿瘤的侵袭、转移等病理过程密切相关并影响其预后[7-10]。本实验采用免疫组化法检测AGR2和S100A4在结肠癌组织中的表达，探讨两者在结肠癌中表达的相关性及与临床病理特征、预后的关系。

又由比尔-朗博定律可知，待测物质浓度C与吸光度A的关系如图2所示，从图中可以看出，当待测物质浓度超过一定范围时，浓度与吸光度将不再满足线性关系[6]，因此，在对待测气体进行定量分析时，要尽量选择待测物质浓度在其线性范围内。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集2011年12月～2013年12月新疆医科大学第一附属医院胃肠外科行结肠癌根治性手术的50例结肠癌患者临床及病理资料，并采用该组患者手术切除结肠癌组织标本及同源的癌旁正常结肠组织(边缘距肿块5 cm或以上正常结直肠黏膜组织，并经病理证实无癌浸润)标本，所有结肠癌组织病理类型为腺癌，患者临床资料完整，均经病理诊断确诊，术前均未接受放疗和(或)化疗。

1.2 试剂 AGR2抗体购自北京博奥森生物公司，S100A4抗体购自Abcam公司，免疫组化染色SP法试剂盒及浓缩型DAB试剂盒均购自北京中杉金桥公司，PBS购自福州迈新公司。

1.3 方法 免疫组化染色采用SP法，通过AGR2抗体与S100A4抗体分别与结肠癌组织与癌旁组织结合染色，显微镜下观察染色结果。阳性对照为抗体公司提供阳性对照片，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

[1] Kuang W W, Thompson D A, Hoch R V, et al. Differential screening and suppression subtractive hybridization identified genes differentially expressed in an estrogen receptor-positive breast carcinoma cell line[J]. Nucleic Acids Res, 1998,26(4):1116-1123.

综上所述，AGR2与S100A4在结肠癌的发生及进展中发挥一定作用，两者表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及肿瘤TNM分期有重要关联，且表达具有正相关性，可以作为评价结肠癌分化程度、淋巴结转移、肿瘤分期及预后的指标。AGR2与S100A4在结肠癌中呈高表达，在不同结肠癌患者中呈差异表达，提示两者与结肠癌的发生、发展密切相关，联合检验两者可以作为判断患者预后的重要指标，有助于指导结肠癌患者术后治疗。

1.5 随访 患者术后随访主要通过门诊及电话方式，询问患者或患者家属并整理患者生存资料。随访时间以月为计量单位，随访开始时间为术后第1天，截止日期为患者死亡日期或2016年12月30日，随访时间1～60个月。失访患者按最后一次随访时间为准做删失处理，对于截止到随访日期仍存活患者同样按删失处理。最终删失比例为12.0%。

实行固定资产信息化管理，除初建系统时需要进行大清查后将原始数据导入系统、对系统进行相关设置、梳理和准备好所需要的如人员库、地点库、单位库等基础数据外，日常管理中，只需要输入相关的固定资产增加、变动、处置数据。资产清查时，通过手持连接信息系统的扫描仪，对固定资产上的条码标签进行扫描，通过系统分析，可以得出账实不符资产数据，及时发现资产变动和流失现象。相对以往的手工管理方法，信息化管理大大提高了工作效率。

2.5 本组患者心理弹性多元逐步回归分析 以心理弹性得分为因变量，以单因素分析中有统计学意义的职业、家族史、家庭人均月收入，相关性分析中有统计学意义的BPRS得分、一般自我效能感、主观支持、客观支持、支持利用度为自变量，行多元逐步回归分析，结果显示家庭人均月收入、BPRS得分、一般自我效能感、支持利用度是影响心理弹性得分的主要影响因素，可解释总变异的33.4%，见表3。

下面是使用MATLAB仿真得出的图5，图像的纵轴是开发商建设普通房的概率，横轴是推广时间，因此曲线反映了概率水平随着推广过程进行产生的变化。

2 结果

2.1 AGR2和S100A4在结肠癌中的表达和分布 AGR2主要定位于细胞质中，在结肠癌组织中的表达部位与正常组织相同，但较正常组织明显增加，呈阳性或强阳性(图1)。AGR2在结肠癌中的阳性率(76.0%，38/50)高于癌旁正常组织(44%，22/50)，差异有统计学意义(χ2=10.667，P=0.001)。S100A4主要定位于细胞质中，在癌旁正常组织中表现为不着色或浅黄色颗粒，显示无表达或弱阳性。在结肠癌组织中表达于癌细胞胞质、细胞间质及间质细胞胞质，显示阳性或强阳性(图2)。S100A4在结肠癌中的阳性率(80.0%，40/50)高于癌旁正常组织(38.0%，19/50)，差异有统计学意义(χ2=18.231，P<0.001)。

 

图1 A.AGR2在癌旁正常组织中的表达，SP法；B.AGR2在癌组织中的表达，SP法 图2 A.S100A4在癌旁正常组织中的表达，SP法；B.S100A4在癌组织中的表达，SP法

2.2 AGR2和S100A4表达与结肠癌临床病理特征的关系 AGR2及S100A4在结肠癌中的表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、浸润深度的差异均无统计学意义(P>0.05)，与肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤TNM分期的差异有统计学意义(P<0.05)，分化程度越差、有淋巴结转移及分期越晚者表达越高(表1)。

2.3 AGR2、S100A4在结肠癌中表达的相关性 检测50例结肠癌中AGR2与S100A4的表达并通过Spearman等级相关分析发现，AGR2与S100A4在结肠癌中表达呈正相关(r=0.538，P<0.001，表2)。

[3] Ondrouskova E, Sommerova L, Nenutil R, et al. AGR2 associates with HER2 expression predicting poor outcome in subset of estrogen receptor negative breast cancer patients[J]. Exp Mol Pathol, 2017,102(2):280-283.

2.4 AGR2、S100A4表达与预后的关系 50例结肠癌患者中位生存时间为31个月(6～60个月)，单独AGR2阳性为27个月(16～35个月)，单独S100A4阳性为32个月(11～43个月)，AGR2、S100A4均阳性为27个月(6～60个月)，AGR2、S100A4均阴性为42个月(31～60个月)。4组两两比较发现，AGR2、S100A4均阳性者中位生存时间较单独AGR2阳性者、单独S100A4阳性者之间差异无统计学意义(χ2=0.478，P=0.489；χ2=2.041，P=0.153)，AGR2、S100A4均阴性者中位生存时间明显较单独AGR2阳性者、单独S100A4阳性者、AGR2、S100A4均阳性者长，且差异有统计学意义(χ2=25.378，P<0.001；χ2=9.533，P=0.002；χ2=26.331，P<0.001，图3)。

  

图3 AGR2和S100A4表达与结肠癌患者预后的关系

3 讨论

AGR2是近年发现的与多种肿瘤形成相关、重要的分子标志物，Xue等[11]在实验研究中也发现，在有淋巴结转移的结肠癌细胞中AGR2高表达，提示可能与结肠癌淋巴结转移行为有关。本组结果显示：AGR2在结肠癌中的阳性率明显高于癌旁正常组织，提示AGR2参与结肠癌的发生。分析结肠癌患者临床病理特征发现，低分化的结肠癌组织AGR2阳性率明显高于高分化结肠癌组织，表明肿瘤分化程度越低AGR2的阳性率越高；有淋巴结转移及TNM分期高的病理切片AGR2阳性率明显高于无淋巴结转移及TNM分期低的病理切片，提示AGR2在结肠癌中的异常表达与结肠癌的进展及转移情况有关。

S100A4是钙结合蛋白S100家族的成员，有广泛的生物学功能，包括调节血管生成、细胞的存活、运动和入侵[12]，Kang等[13]通过使用免疫组化检测526例结直肠癌患者S100A4蛋白并使用原位杂交法检测S100A4 mRNA，发现S100A4蛋白在结直肠癌中的表达可以提示肿瘤进展和淋巴结转移。本组发现S100A4在结肠癌中的阳性率明显高于癌旁正常组织，表明S100A4同样参与结肠癌的发生、发展。在患者临床病理资料中发现，S100A4在结肠癌中的表达与肿瘤分化程度有关，肿瘤分化程度越差S100A4阳性率越高，与淋巴结转移及肿瘤TNM分期相关，提示S100A4不仅参与结肠癌的发生而且与癌细胞的转移、进展有关，肿瘤分期高及有淋巴结转移的结肠癌中S100A4阳性率明显升高。

 

表1 AGR2和S100A4表达与结肠癌临床病理特征的关系[n(%)]

  

临床病理参数nAGR2阳性χ2值P值S100A4阳性χ2值P值性别 男2420(83．3)1．3610．24319(79．2)0．0200．877 女2618(69．2)21(80．8)年龄(岁) <601711(64．7)1．8010．18012(70．6)1．4260．232 ≥603327(81．8)28(84．8)肿瘤直径(cm) <52417(70．8)0．6750．41118(75．0)0．7210．396 ≥52621(80．8)22(84．6)分化程度 低1412(85．7)13(92．9) 中2421(87．5)10．2200．00621(87．5)9．0400．011 高125(41．6)6(50．0)浸润深度 未及浆膜1712(70．6)0．4140．52014(82．4)0．0890．765 浆膜及浆膜外3326(78．8)26(78．8)淋巴结转移 无2919(65．5)4．1600．04120(69．0)5．2550．022 有2119(90．5)20(95．2)TNM分期 Ⅰ+Ⅱ2012(60．0)4．6780．03112(60．0)8．3330．004 Ⅲ+Ⅳ3026(86．7)28(93．3)

 

表2 AGR2和S100A4蛋白在结肠癌中表达的相关性

  

AGR⁃2S100A4-+ 合计r值P值-6330120．538<0．001+364013 135413 035412合计101517850

[2] Huang J, Wang L, Jiang M, et al. AGR2-mediated lung adenocarcinoma metastasis novel mechanism network through repression with interferon coupling cytoskeleton to steroid metabolism-dependent humoral immune response[J]. Cell Immunol, 2014,290(1):102-106.

1.4 结果判定 AGR2、S100A4蛋白染色均以细胞质出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞，每例切片随机选取5个高倍视野(400倍)进行结果判断，染色评分标准按着色强度及着色细胞数综合计算。每张切片按阳性细胞的染色强度计分：不着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分；按着色阳性细胞数计分：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；染色强度与着色细胞数得分相乘，0～1分为阴性(-)，2～4分为弱阳性(+)，5～7分为中度阳性()，≥8分为强阳性()；其中(+～)为阳性，(-)、(+)为阴性。

参考文献：

2.若生产2个单位重量的产品需3个单位重量的原料M1，2个单位重量的原料M2，那么工厂区位最好接近以下四点中的（ ）

国内外关于AGR2与S100A4相关性的研究目前较少，本实验通过联合免疫组化标记并通过Spearman等级相关分析发现，AGR2与S100A4在结肠癌中的表达呈正相关，AGR2与S100A4高表达患者往往伴淋巴结转移及肿瘤分化程度较差，提示两者均在结肠癌的发生、发展中起重要作用，在结肠癌中的表达提示肿瘤进展。Kaplan-Meier生存曲线示，两者均阴性的中位生存时间明显较阳性者长，且差异有统计学意义；提示阳性患者往往预后不良。在结肠癌发展过程中AGR2及S100A4之间具有某种相互作用共同影响患者的临床病理及患者预后，可以促进结肠癌的发生、发展，但其具体机制尚不清楚，仍然需进一步分析。

飞鱼是群集生活的鱼类。我们很难想象，飞鱼妈妈争先恐后地在同一片棕榈叶上产卵的情形该有多么混乱。不过很显然，飞鱼妈妈这样做肯定是有原因的。

[4] Zhang J, Jin Y, Xu S, et al. AGR2 is associated with gastric cancer progression and poor survival[J]. Oncol Lett, 2016,11(3):2075-2083.

[5] Ho M E, Quek S I, True L D, et al. Prostate cancer cell phenotypes based on AGR2 and CD10 expression[J]. Mod Pathol, 2013,26(6):849-859.

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[7] Wang Y, Chen J, Chen Z, et al. Deregulated miR-296/S100A4 axis promotes tumor invasion by inducing epithelial-mesenchymal transition in human ovarian cancer[J]. Am J Cancer Res, 2016,6(2):260-269.

1.6 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行统计学处理，计数资料采用χ2检验，各因素之间的关系采用Spearman等级相关分析，应用Kaplan-Meier法进行生存曲线的描绘，中位生存时间用Log-rank检验进行比较，以P<0.05为差异具有统计学意义。

二是多种形式为补充。一是法院与某家律师事务所开展合作。如上城、余杭两家法院分别与一家律师事务所合作，由该律师事务所承接法院的调解案件。律所调解成功的案件，以当事人撤诉或法院出具调解文书形式结案。二是律师个人参与法院调解。律师个人作为某法院的特邀调解员按照法院安排参与调解工作，或者加入浙江“在线矛盾纠纷多元化解平台”上设立的网上律师调解中心，承接调解工作。调解结果亦由法院出具相关法律文书。三是律所自行设立律师调解工作室，直接接受当事人的委托开展调解工作。

[8] Chen N, Sato D, Saiki Y, et al. S100A4 is frequently overexpressed in lung cancer cells and promotes cell growth and cell motility[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2014,447(3):459-464.

[9] 任延松, 王 博, 顾 页, 等. 结直肠癌S100A4的表达及意义[J]. 临床与实验病理学杂志, 2016,32(10):1084-1088.

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[11] Xue H, Lü B, Zhang J, et al. Identification of serum biomarkers for colorectal cancer metastasis using a differential secretome approach[J]. J Proteome Res, 2010,9(1):545-555.

综上所述,肝局灶性结节增生是发病率较低的一类良性占位病变,该疾病不是真正的肿瘤疾病,发病原因还不清楚,女性患者发病率比男性高。临床中对肝局灶性结节性增生患者使用CT平扫和增强扫描的效果比较好,能够很好的观察分析患者的病理特征和供血情况,对患者的血管肿瘤鉴别效果比较理想,有些特殊影像特征会对诊断带来一些影响,临床中应该要引起重视。

[12] Sugai T, Yamada N, Eizuka M, et al. Vascular invasion and stromal S100A4 expression at the invasive front of colorectal cancer are novel determinants and tumor prognostic markers[J]. J Cancer, 2017,8(9):1552-1561.

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