胃癌是我国第三大常见的恶性肿瘤，危害胃癌患者最大的是肿瘤复发和转移。因此，深入研究与转移相关特异的基因并进一步探讨其功能，不仅有利于阐明胃癌转移的分子机制，还能为临床靶向治疗进行药物筛选及进行预后判断。形成素(Formins)是目前最有效的肌动蛋白成核因子[1]，它通过调节细胞肌动蛋白，参与机体内多样化的细胞活动，如细胞分裂及伪足形成、细胞黏附及运动、细胞极向的形成等[2]。在多种恶性肿瘤侵袭和转移过程中常可检测到Formins蛋白的异常表达[3]。FMNL2基因是Formins家族重要成员，是结直肠癌侵袭转移的新靶点[4]。目前对于FMNL2的研究报道较少，主要集中在结直肠癌的研究中[5-7]，而它在胃癌中的研究尚未见报道。多项研究显示上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions, EMT)在肿瘤细胞侵袭和转移中起重要作用[8]，已成为肿瘤侵袭转移研究的热点。本实验采用免疫组化法检测FMNL2和EMT标志物E-cadherin、CK和vimentin在胃腺癌组织中的表达，分析FMNL2与EMT的关系，探讨其参与胃腺癌转移的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 收集西南医科大学附属医院胃肠外科2013年1月～2015年12月经活检已确诊为胃癌大部切除标本92例，包括高+中分化腺癌52例、低分化腺癌40例。43例淋巴结转移癌取自手术切除标本胃小弯及胃大弯周围淋巴结。男性60例，女性32例，患者年龄31～88岁，平均56岁，全部标本术前均未接受放、化疗。另收集20例正常胃黏膜组织(取自距原发癌灶5.0 cm以上且病理报告无癌残留区)。所有组织均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm厚切片，行HE染色和免疫组化检测。

1.2 主要试剂及仪器 鼠抗人FMNL2单克隆抗体购自Abnova公司；鼠抗人E-cadherin、CKpan、vimentin、免疫组化试剂、DAB显色试剂及PBS，均购自北京中杉金桥公司。

1.3 方法 免疫组化染色采用EnVision两步法，具体操作步骤严格按试剂盒说明书进行，以PBS替代一抗作为阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。免疫组化结果判断标准参照周龙书等[9]的方法进行判读。按染色强度计分：无阳性着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。按阳性细胞数计分：无阳性细胞为0分，1%～10%为1分，11%～50%为2分，51%～80%为3 分，﹥80%为4分。半定量积分=染色强度评分×阳性细胞数评分：0～1分为(-)；2～3分为(+)；4～6分为()；6分以上为()。结果均由两名高年资病理医师统一核准。

她的未来的丈夫，我见过。在外祖父的家里。人长得又低又小，穿一身蓝布棉袍子，黑马褂，头上戴一顶赶大车的人所戴的五耳帽子。

图4反映了橡胶粉掺量与试件抗拉强度之间的关系。图4(a)表明，随着橡胶粉掺量提高，抗拉强度呈现下降趋势，且变化规律与图3(a)相同。从图4(a)可以看出，改性方式与橡胶粒径对抗拉强度的影响不大。出现这种现象的原因可能是在橡胶粉掺量相对较小的情况下，水的表面处理除去了橡胶粉表面灰尘，提高了颗粒与基体的接触面积；氢氧化钠溶液的表面处理降低界面过渡区孔隙度，提高了橡胶骨料与水泥基体之间的粘结强度。此外强碱并不会改变橡胶粉表面的粗糙程度(图1所示)，使得两种改性方式产生的效果差异不明显。

2 结果

2.1 FMNL2的表达 FMNL2阳性定位于细胞质和细胞膜，呈强弱不等的弥漫性分布；FMNL2在正常胃黏膜组织、胃腺癌原发灶及胃腺癌淋巴结转移癌中的表达差异有显著性(χ2=36.112，P=0.000，图1)。通过两两比较，胃腺癌原发灶中FMNL2表达高于正常胃黏膜组织(Z=-3.800，P=0.000)；胃腺癌淋巴结转移中FMNL2表达高于胃腺癌原发灶(Z=-3.190，P=0.012，表1)。

测绘档案管理必须要加强档案管理人员的专业素质，加强人才培养，提升管理人员的理论基础和业务技能。因此，档案管理人员在掌握相关专业知识时，也要注重知识面的拓展，能更好地运用测绘技术的相关知识、地理信息系统知识、计算机知识和网络安全知识等知识。相关高校应加强复合型测绘档案管理人才的培养，通过加强学术交流，定期组织培训，邀请相关专业的专家授课等多种方式学习，来实现对档案信息化管理的复合型人才的培养。

 

图1 FMNL2在胃腺癌原发灶(A)、淋巴结转移癌(B)中的表达，EnVision两步法

 

表1 FMNL2在正常胃黏膜组织、原发灶及淋巴结转移癌中的表达

  

组别FMNL2-+ 合计正常胃黏膜1640020※＄胃腺癌92※# 高+中分化52123352& 低分化31715540&淋巴结转移癌4624943#＄

※Z=-3.800，P=0.000；#Z=-3.190，P=0.012；&Z=-2.223，P=0.019；$Z=-5.512，P=0.000 (Mann-Whitney Test检验)；各组间比较χ2=36.112，V=4，P=0.000(Kruskal-Wallis Test检验)

2.2 E-cadherin、CK的表达 E-cadherin在正常胃黏膜细胞膜中呈较均质的线状表达，而CK的阳性信号位于细胞膜和胞质。E-cadherin、CK的表达强度与胃腺癌分化程度相关。E-cadherin和CK在正常胃黏膜、原发灶癌组织及淋巴结转移癌中的表达差异有显著性(χ2=113.531，P=0.000；χ2=143.213，P=0.000)。两两比较发现，正常胃黏膜组织中E-cadherin和CK的表达高于原发灶癌组织(Z=-5.324，P=0.000；Z=-4.981，P=0.000)；在高+中分化胃癌中E-cadherin和CK表达高于低分化胃癌(Z=-5.114，P=0.000；Z=-3.812, P=0.000)；但原发灶癌组织与淋巴结转移癌中的表达差异无显著性(Z=-2.315，P=0.04；Z=-1.516，P=0.192，表2，图2)。

 

表2 E-cadherin和CK在正常胃黏膜、原发灶及淋巴结转移癌中的表达

  

分组E⁃cadherin-+ CK-+ 合计正常胃黏膜002180041620※#胃癌〛92※＄ 高+中分化01232800173552& 低分化41320331220540&淋巴结转移癌381616210151643＄#

E-cadherin：※Z=-5.324，P=0.000；$Z=-2.315，P=0.048；&Z=-5.114，P=0.000；#Z=-6.098，P=0.048 (Mann-Whitney Test检验，用Bonferroni校正)；各组之间比较：χ2 =113.531，V=4，P=0.000(Kruskal-Wallis Test检验)；CK：※Z=-4.981，P=0.000；$Z=-1.516，P=0.187；&Z=-3.812，P=0.000；#Z=-5.306，P=0.000 (Mann-Whitney Test检验，用Bonferroni校正)；各组之间比较：χ2=143.213，V=4，P=0.000 (Kruskal-Wallis Test检验)

 

图2 E-cadherin在胃高+中分化腺癌(A)、低分化腺癌(B)中的表达，EnVision两步法

[4] Péladeau C, Heibein A, Maltoz M T, et al. A specific FMNL2 isoform is up-regulated in invasive cells[J]. BMC Cell Biol, 2016,17(1):32.

FMNL2基因是新近发现的一种基因，属于Formins家族成员之一，目前有关FMNL2功能学方面的研究极少，但已有研究发现FMNL2的mRNA可表达于多种正常组织(下丘脑、胎盘、眼球等)和肿瘤(乳腺癌、胃癌、皮肤恶性黑色素瘤等)中[10]。朱曦龄等[11]进行FMNL2基因沉默后，结直肠癌细胞株在体内侵袭能力明显降低，证明FMNL2 基因与结直肠癌细胞的转移侵袭能力显著相关。

 

表3 vimentin在正常胃黏膜、原发灶及淋巴结转移癌中的表达

  

组别vimentin-+ 合计正常胃黏膜2000020※#胃癌92※＄ 高+中分化271510052& 低分化51812540&淋巴结转移癌71911643＄#

※Z=-4.760，P=0.000；$Z=-3.056，P=0.045；&Z=-3.968，P=0.000；#Z=-5.708，P=0.000 (Mann-Whitney Test检验，用Bonferroni校正)；各组之间比较：χ2=53.267，V=4，P=0.000(Kruskal-Wallis Test检验)

 

图3 vimentin在胃高+中分化腺癌(A)、胃低分化腺癌(B)中的表达，EnVision两步法

3 讨论

2.4 FMNL2与E-cadherin、CK、vimentin的相关性 相关性分析结果表明：FMNL2表达与E-cadherin、CK表达呈负相关(r=-0.466，P=0.000；r=-0.327，P=0.000)；而与vimentin表达呈正相关(r=0.553，P=0.000)。

参考文献：

本实验通过检测不同分化程度、不同阶段的胃腺癌组织中FMNL2、EMT上皮标志物(E-cadherin、CK)及间质标志物(vimentin)的表达变化，探讨FMNL2表达与胃腺癌转移及EMT的关系。结果表明，FMNL2和vimentin在淋巴结转移癌中的表达高于原发灶癌组织，而原发癌又明显高于正常胃黏膜，但有关上皮标志物(E-cadherin、CK)在正常胃黏膜中的表达显著高于胃腺癌原发灶及淋巴结转移癌组织。相关性分析显示FMNL2与上皮标记(E-cadherin、CK)的表达呈负相关，而与间质标记vimentin的表达呈正相关，与苏坚等[13]对胃癌EMT的研究结果一致。提示FMNL2可能参与胃腺癌EMT过程，从而促进肿瘤的转移。

因此，我们推断FMNL2可能通过促进胃腺癌的EMT过程，导致胃腺癌的转移，它是一个有用的促胃癌转移基因，临床上可以通过抑制其基因表达，阻止胃癌细胞增殖和转移，可将其作为抑制胃癌生长和转移的靶点。

EMT是指具有极性的上皮细胞转换为具有活动能力，能够在间质中自由移动的成纤维细胞或间充质细胞的过程。EMT主要参与胚胎发育、组织重建以及肿瘤的转移等过程，在该过程中，它的主要特征是失去上皮细胞表型而获得间质细胞的特性[12]。

[5] Liang L, Li X, Zhang X, et al. MicroRNA-137, an HMGA1 target, suppresses colorectal cancer cell invasion and metastasis in mice by directly targeting FMNL2[J]. Gastroenterology, 2013,144(3): 624-635.

[2] Gardberg M, Talvinen K, Kaipio K, et al. Characterization of diaphanous-related formin FMNL2 in human tissues[J]. BMC Cell Biol, 2010,11:55.

[3] Gardberg M, Heuser V D, Koskivuo I, et al. FMNL2/FMNL3 formins are linked with oncogenic pathways andpredict melanoma outcome[J]. J Pathol Clin Res, 2016,2(1):41-52.

1.4 统计学分析 采用SPSS 13.0软件进行统计学处理，免疫组化结果采用非参数Kruskal-Wallis检验，两两比较采用Mann-Whitney检验；FMNL2和上皮、间质标志物之间选用两变量相关Pearson相关系数分析。

2.3 vimentin的表达 vimentin在正常胃黏膜上皮中不表达；在胃腺癌肿瘤细胞质和细胞膜中呈阳性(图3)。vimentin分别在正常胃黏膜组织、高+中低分化腺癌及淋巴结转移癌中的表达，差异有显著性(χ2=53.267，P=0.000)。两两比较发现，在腺癌组织中的表达高于正常胃黏膜组织(Z=-4.760，P=0.000)；低分化癌高于高+中分化癌(Z=-3.968，P=0.000)；但是在原发灶与淋巴结转移癌中的表达差异无显著性(Z=-3.056，P=0.045，表3)。

系统可对多项指标进行统计，包括致贫原因、贫困结构、家庭收入、十大工程成效、性别、民族、文化程度、健康状况、劳动能力等，以饼图、柱状图等形式展示。如图6所示。

[1] Kühn S, Erdmann C, Kage F, et al. The structure of FMNL2-Cdc42 yields insights into the mechanism of lamellipodia and filopodia formation[J]. Nat Commun, 2015,12(6):7088.

[6] Zeng Y F, Xiao Y S, Lu M Z, et al. Increased expression of formin-like 3 contributes to metastasis and poor prognosis in colorectal carcinoma[J]. Exp Mol Pathol, 2015,98(2):260-267.

[7] Li Y, Zhu X, Zeng Y, et al. FMNL2 enhances invasion of colorectal carcinoma by inducing epithelial-mesenchymal transition[J]. Mol Cancer Res, 2010,8(12):1579-1590.

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[8] Grassi M L, Palma C S, Thomé C H, et al. Proteomic analysis of ovarian cancer cells during epithelial-mesenchymal transition (EMT) induced by epidermal growth factor (EGF) reveals mechanisms of cell cycle control[J]. J Proteomics, 2017,16(151):2-11.

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[11] 朱曦龄, 梁 莉, 黎 功, 等. FMNL2基因沉默对人大肠癌细胞体内外增殖及侵袭能力的影响[J]. 肿瘤学杂志, 2017,23(2):81-86.

受到惊吓的女员工本能地将款箱抓紧，发现有人抢劫，她惊慌地叫喊道：“抢劫啦！有人抢银行了！”一边喊，一边死死地拽住款箱。回过神来的保安抡起一根狼牙木棒，勇敢地往郭启明头上打去……搏斗中，挨打后疯狂了的郭启明拔出水果刀捅进了女员工的腹部……伴随着喷涌而出的鲜血，她惨叫一声倒在了地上！

[12] 王卫杰, 周家华, 张丽华, 等. 胃癌中上皮-间质转化路径及相关因子的研究进展[J]. 临床与实验病理学杂志, 2014,30(2):193-195.

[13] 苏 坚, 赵晓红, 刘 芳. RORα高表达抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化[J]. 临床与实验病理学杂志, 2017,33(2):143-147.

说来惭愧，此前我仅仅出版过一部杂文集，就是世纪之初长江文艺出版社为我出的那本《戏说红尘》。在它前后，我把自己的一些杂文收录到散文或文艺杂谈的集子里去了，那些集子多半是书商帮我出的，发行量也比较大，其中还有两本散文集被书商再版发行。

3．教师指导与学生自学相结合。除了在课堂上指导学生学习，教师还要进行课外指导，在指导过程中，教师根据学生的个性差异进行有选择的指导，根据学生偏好选择听力学习还是阅读学习。大学生自主学习是基于教师的指导下进行，在此期间，教师一旦发现问题要及时修正，大学生在自主学习英语听读过程中，多与教师沟通、交流、分享，不断挖掘适合自身学习的方式。在移动学习过程中，师生之间要相互学习、分享心得。移动工具的运用，很大程度上实现了英语听读的效果，能够扬长避短，促进师生共同学习、共同进步。