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联合检测CK7、CK20和SATB2在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌中的表达及鉴别意义

更新时间:2009-03-28

卵巢原发性黏液腺癌临床较少见且预后较差,约占卵巢癌的3%[1],结直肠黏液腺癌转移至卵巢,可表现与卵巢原发性黏液腺癌相似的组织学特点[2]。因此,很多病理诊断认为卵巢原发的黏液性腺癌往往是由结直肠转移而来。在临床病理诊断工作中,鉴别卵巢黏液腺癌是原发性还是转移性仍然十分困难[3]。免疫组化染色对鉴别卵巢原发性及转移性黏液腺癌有一定的意义,目前应用于两者鉴别诊断常用的免疫组化标志物有CK7和CK20[4];但CK7、CK20在卵巢原发性黏液腺癌和卵巢转移性结直肠腺癌中的表达有重叠交错的现象,因此鉴别诊断的价值有限[5-6]。富含AT序列的特异性结合蛋白2(special AT-rich sequence-binding protein 2, SATB2)是一种核基质结合蛋白,通过改变染色质的高级结构,从而调控多种基因的表达[7]。近年国内外研究表明,SATB2 主要在下消化道(结直肠、阑尾)上皮中表达,而在卵巢中则罕见表达[8-9]。本文联合检测CK7、CK20及SATB2在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌中的表达,旨在提高卵巢黏液性腺癌病理诊断的准确率。

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1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本 收集安徽医科大学第一附属医院2011~2016年确诊为卵巢黏液性腺癌的标本55例,其中卵巢原发性黏液腺癌26例,年龄24~69岁,平均(51.4±11.9)岁;卵巢转移性结直肠腺癌29例(包括转移性结肠腺癌25例、转移性直肠腺癌4例),年龄28~67岁,平均(50.7±7.9)岁;结直肠原发性黏液腺癌50例(包括结肠黏液腺癌30例、直肠黏液腺癌20例),年龄36~86岁,平均(60.3±12.9)岁。以上病例均经两位病理科专家复诊。所有标本经10%中性福尔马林固定,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,4 μm厚连续切片,分别行HE染色及免疫组化染色。

1.1.2 主要试剂 SATB2抗体购自Santa Cruz公司,CK7、CK20抗体购自北京博奥森生物公司;免疫组化染色试剂购自北京中杉金桥公司。

1.2 方法 免疫组化染色采用EnVision两步法。SATB2抗体稀释浓度1 ∶200,CK7、CK20抗体稀释浓度为1 ∶400;组织切片经脱蜡至水、高压修复(SATB2用柠檬酸盐修复液pH 6.0,CK7、CK20用EDTA修复液pH 8.0)。用已知阳性的切片作阳性对照,用PBS代替一抗作阴性对照。

改良POSSUM评分系统在老年髋部骨折手术风险评估中的应用价值…………………… 刘莉君 严光 顾辨辨 等(1)114

1.4 统计学处理 应用SPSS 21.0软件进行数据分析,计数资料采用χ2检验及Fisher精确概率法比较各组间的差异,以P<0.05作为检验水准。

2 结果

2.1 卵巢原发性黏液腺癌与转移性结直肠腺癌临床病理特征分析 患者以平均年龄50岁为界限,≥50岁的卵巢原发性黏液腺癌所占比例为69.2%(18/26),转移性结直肠腺癌所占比例为55.2%(16/29),两组患者在年龄上差异无统计学意义(P>0.05)。以肿瘤最大径10 cm为界限,卵巢原发性黏液腺癌的肿块直径常≥10 cm,占61.5%(16/26);卵巢转移性结直肠腺癌的肿块直径常<10 cm,占72.4%(21/29),两组相比差异有显著性(P<0.05)。卵巢原发性黏液腺癌发病部位以单侧常见,占80.8%(21/26);转移性结直肠腺癌以双侧常见,占58.6%(17/29),两组相比差异有显著性(P<0.05)。卵巢原发性黏液腺癌生长方式以囊性或囊实性为主,占88.5%(23/26);转移性结直肠腺癌以结节状生长方式为主,切面多为实性,占69.0%(20/29),两组相比差异有显著性(P<0.05)。

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2.2 CK7CK20和SATB2在卵巢原发性和转移性黏液腺癌及结直肠黏液腺癌组织中的表达 CK7定位于细胞膜和(或)细胞质,在卵巢原发性黏液腺癌中的阳性率(80.8%)显著高于卵巢转移性结直肠腺癌(17.2%)和结直肠原发性黏液腺癌(18.0%)(P<0.05)。 CK20定位于细胞膜和(或)细胞质,在卵巢转移性结直肠腺癌和结直肠原发性黏液腺癌中的阳性率(75.9%、64.0%)显著高于卵巢原发性黏液腺癌(38.5%)(P<0.05)。SATB2定位于细胞核,在卵巢转移性结直肠腺癌和结直肠原发性黏液腺癌中的阳性率(65.5%、62%)显著高于卵巢原发性黏液腺癌(0)(P<0.05,表1、2,图1~3)。

本实验对卵巢原发性和转移性黏液腺癌的相关临床病理特征进行统计分析,包括发病年龄、肿块大小、发病部位是单侧还是双侧以及肿瘤的大体特征;与相关文献报道一致[13],提示为卵巢转移性黏液腺癌的一般特征:双侧肿瘤、直径小于10 cm、出现多个肿瘤结节、切面呈实性等。这些证据可以辅助判断卵巢黏液性腺癌是原发性还是转移性。除了大体和显微镜下特征,还应选择性的应用免疫组化染色,对鉴别诊断有一定的帮助,目前常用的免疫组化标志物有CK7和CK20。CK7主要在乳腺、卵巢、子宫、肺以及胆管上皮中表达,但在结直肠腺癌中,CK7也有一定的表达,阳性率10%~27%[5]。CK20是结直肠腺癌比较敏感的标志物,主要表达于胃肠道上皮,但在卵巢原发性黏液腺癌中,CK20也有40%~75%的阳性率[6]。本组中CK7在卵巢原发性黏液腺癌的表达高于卵巢转移性结直肠腺癌,CK20在卵巢转移性结直肠腺癌中的表达高于卵巢原发性黏液腺癌,差异均有统计学意义(P<0.05)。CK7和CK20有4种免疫表型组合在卵巢原发性和转移性黏液腺癌中均存在,CK7+/CK20-、CK7-/CK20+和CK7+/CK20+在两者中差异有显著性(P<0.05),卵巢原发性黏液腺癌以CK7+/CK20-免疫表型组合较为常见(占46.2%),卵巢转移性结直肠腺癌则以CK7-/CK20+常见(占65.5%)。而CK7-/CK20-在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌中差异无显著性(P>0.05)。当CK7+/CK20-时,提示为卵巢原发性黏液腺癌;而CK7-/CK20+则提示为转移性结直肠腺癌。但是CK7、CK20免疫组化结果有相互重叠的现象,对两者鉴别诊断价值有限,因此建议与其他更为特异性的免疫组化标志物联合检测。

2.3 CK7CK20在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌组织中的表达 CK7和CK20是目前诊断卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌常用的免疫组化标志物。CK7+/CK20-在卵巢原发性黏液腺癌中有12例(46.2%,12/26),在卵巢转移性结直腺癌中有3例(10.3%,3/29);CK7-/CK20+在卵巢原发性黏液腺癌中有3例(11.5%,3/26),在卵巢转移性结直肠腺癌中有19例(65.5%,19/29);CK7+/CK20+在卵巢原发性黏液腺癌中有9例(34.6%,9/26),在卵巢转移性结直肠腺癌中有2例(6.9%,2/29);CK7-/CK20-在卵巢原发性黏液腺癌中有2例(7.7%,2/26),在卵巢转移性结直肠腺癌中有5例(17.2%,5/29)。CK7+/CK20-、CK7-/CK20+和CK7+/CK20+三种免疫表型组合在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌中的表达差异有显著性(P<0.05),卵巢原发性黏液腺癌以CK7+/CK20-免疫表型组合较为常见,而卵巢转移性结直肠腺癌则以CK7-/CK20+常见。CK7-/CK20-在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌中的表达差异无显著性(P>0.05,表3)。

随着现代医学诊疗技术的不断提高,对卵巢黏液腺癌的研究不断深入,逐渐认识到卵巢原发性黏液腺癌临床罕见,许多诊断为卵巢原发性黏液腺癌的病例往往是从其他部位转移而来,卵巢转移性黏液腺癌比原发性更为常见[10]。Yemelyanova等[11]研究显示卵巢转移性与原发性黏液性肿瘤之比约为2.73 ∶1。原发于消化系统的黏液性肿瘤最为常见,包括胃、结直肠、阑尾、胰腺等[12]。转移性肿瘤的症状一般出现在原发性肿瘤之后,但结直肠癌转移至卵巢的患者,其转移症状与原发症状出现的时间相差较短,甚至可以首先表现为转移性症状。当卵巢转移性结直肠腺癌含有较多杯状细胞并产生大量黏液时,非常类似于卵巢原发性黏液腺癌,单从形态学表现很难辨认,给病理诊断工作带来极大的挑战,且两者治疗方式截然不同,所以明确肿瘤来源对治疗和预后均至关重要。

 

表1 CK7CK20SATB2在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌中的表达[n(%)]

  

组别CK7+-CK20+-SATB2+-卵巢原发性黏液腺癌21(80.8)5(19.2)10(38.5)16(61.5)0(0)26(100.0)卵巢转移性结直肠腺癌5(17.2)24(82.8)22(75.9)7(24.1)19(65.5)10(34.5)χ2值22.1977.88226.025P值0.0000.0050.000

 

表2 CK7CK20SATB2在卵巢原发性黏液腺癌和结直肠黏液腺癌中的表达[n(%)]

  

组别CK7+-CK20+-SATB2+-卵巢原发性黏液腺癌21(80.8)5(19.2)10(38.5)16(61.5)0(0)26(100.0)结直肠原发性黏液腺癌9(18.0)41(82.0)32(64.0)18(36.0)31(62.0)19(38.0)χ2值28.2084.51327.225P值0.0000.0340.000

 

表3 CK7/CK20在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌中的表达[n(%)]

  

组别CK7+/CK20-表达不表达CK7-/CK20+表达不表达CK7+/CK20+表达不表达CK7-/CK20-表达不表达卵巢原发性黏液腺癌12(46.2)14(53.8)3(11.5)23(88.5)9(34.6)17(65.4)2(7.7)24(92.3)卵巢转移性结直肠腺癌3(10.3)26(89.7)19(65.5)10(34.5)2(6.9)27(93.1)5(17.2)24(82.8)χ2值8.86316.6446.5832.149P值0.0030.0000.0100.143

 

图1 A.卵巢原发性黏液腺癌中CK7呈阳性,EnVision两步法;B.卵巢原发性黏液腺癌中CK20呈阴性,EnVision两步法;C.卵巢原发性黏液腺癌中SATB2呈阴性,EnVision两步法 图2 A.卵巢转移性结肠腺癌中CK7呈阴性,EnVision两步法;B.卵巢转移性结肠腺癌中CK20呈阳性,EnVision两步法;C.卵巢转移性结肠腺癌中STAB2呈阳性,EnVision两步法 图3 A.结肠原发性黏液腺癌中CK7呈阴性,EnVision两步法;B.结肠原发性黏液腺癌中CK20呈阳性,EnVision两步法;C.结肠原发性黏液腺癌中SATB2呈阳性,EnVision两步法

2.4 CK7CK20和SATB2在转移性结直肠腺癌中的灵敏度和特异度 CK7、CK20和SATB2在鉴别诊断卵巢黏液腺癌是否为转移性结直肠腺癌时,灵敏度分别为82.8%、75.9%、65.5%,特异度分别为80.8%、61.5%、100%。SATB2作为高度特异性的指标,用于两者鉴别诊断时,阳性预测值达100%,SATB2阳性时高度提示其为卵巢转移性结直肠腺癌,但敏感性比CK7和CK20低(表4)。

3 讨论

由于耦合区域较小,令θ=20°,在耦合间距0~500 nm范围内对半径R=20 μm的微环谐振腔系统进行仿真,得到了谐振系统耦合系数与耦合间距的关系图,如图5所示。

 

表4 CK7CK20和SATB2在转移性结直肠腺癌中的灵敏度和特异度

  

免疫表型灵敏度特异度阳性预测值阴性预测值CK782.8%(24/29)80.8%(21/26)82.8%(24/29)80.8%(21/26)CK2075.9%(22/29)61.5%(16/26)68.8%(22/32)69.6%(16/23)SATB265.5%(19/29)100.0%(26/26)100.0%(19/19)72.2%(26/36)

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SATB2属于特异性的核基质结合蛋白,位于人类2号染色体长臂32~33区,含11个外显子,长约191 kb,其编码的SATB2蛋白由733个氨基酸组成,通过改变染色质的高级结构,招募转录因子、染色质重塑酶以及修饰酶,从而发挥其生物学功能[7]。近年对SATB2的研究主要集中在中枢神经系统发育、成骨的分化以及结直肠癌等方面,SATB2基因的缺失可导致骨骼发育异常、颌面部畸形、中枢神经系统发育迟缓等[14-16]。近年研究表明,SATB2是结直肠黏膜上皮和结直肠腺癌比较特异的标志物,而在女性生殖系统(包括卵巢、子宫内膜、子宫颈鳞状上皮及腺上皮)中罕见表达[17-18]。因此,SATB2在病理诊断工作中可能作为新的免疫组化标志物。

本实验检测SATB2在卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌以及结直肠原发性黏液腺癌中的表达。在卵巢转移性大腺癌中,SATB2的阳性率为65.5%,在结直肠原发性黏液腺癌中,SATB2的阳性率为62.0%,而SATB2在卵巢原发性黏液腺癌中不表达,这与Moh等[19]报道一致。在29例卵巢转移性结直肠腺癌中,有10例SATB2不表达(10/29),灵敏度较差(65.5%),但特异度达100%,当SATB2阳性时,高度支持为卵巢转移性结直肠腺癌。CK7和CK20在鉴别卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌的灵敏度(82.8%、75.9%)均高于SATB2,但特异度(80.8%、61.5%)与SATB2相比较低。因此可以联合检测SATB2、CK7和CK20,结合这三种免疫组化标志物的优点,从而提高卵巢黏液性腺癌病理诊断的准确性。当出现SATB2+/CK7-/CK20+时,强烈提示为卵巢转移性结直肠腺癌;而SATB2-/CK7+/CK20-则高度支持卵巢原发性黏液腺癌。

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综上所述,SATB2可作为鉴别卵巢原发性黏液腺癌和转移性结直肠腺癌高度特异性的免疫组化标志物,鉴于SATB2在结直肠黏液腺癌中的灵敏度不高,因此可以联合检测CK7和CK20,从而提高卵巢黏液性腺癌临床病理诊断的准确性。

1.3 结果判定 CK7和CK20定位于细胞膜和(或)细胞质,SATB2蛋白定位于细胞核。阳性表达为棕黄色颗粒,无着色为不表达。

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李玉洁,曹立宇,蔡永萍,张聪
《临床与实验病理学杂志》2018年第04期文献

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